13.10.3 Tests based on cell surface

13.10.3 Tests based on cell surface properties
The surface properties of yeast cells underpin two types of differentiating tests. These are firstly, those that assess the immunological properties of cells and, secondly, those that measure flocculation.
Immunological analyses rely on interactions between antigens (the yeast cell or fraction thereof) and antibodies. The latter are obtained by prior inoculation of the antigen fraction into a suitable mammalian host, usually a rabbit. Antibodies are raised in response to the antigen and these can be isolated and purified. Components of the yeast cell wall, principally mannan side chains, have antigenic activity (Section 11.6.1). Reactions between antigens and antibodies are specific. The complexes formed can be visualized by coupling a fluorescent molecule to the antibody. A much-used method is the ELISA technique (enzyme-linked immuno-absorbent assay), in which a membrane is coated with a layer of antibody, which is reactive with the antigen of interest. The antigen mixture is added to the membrane. The membrane is then washed, which removes all but the bound antigen. The complex is then treated with a second batch of antibody, the same as that attached to the membrane, although in this case it is conjugated with an enzyme. The second antibody fraction binds to the antigen-antibody complex. After a second wash to remove unbound antibody, a substrate is added, which is acted upon by the enzyme and in doing brings about a colour change. This colour change allows visualization and quantification of bound antigen.
Methods of assessing yeast flocculence have a long history. They cannot be used to provide a positive identification but are useful nonetheless for assurance that yeast strains are behaving normally. Four methods have gained acceptance within the brewing industry. These are the procedures of Burns (Burns, 1941), Gilliland (1951), Hough (1957) and Helms (Helms et al., 1953). Of these only the Gilliland and Helms methods remain in common use. The Hough method tests for flocculation of aliquots of washed cells suspended in a solution of calcium chloride adjusted to pH 3.5 or pH 5.0. Yeast strains are classified based on whether flocculation occurs under these conditions. If yes, does addition of maltose disperse flocs? If no, does addition of ethanol result in flocculation? If no, does the addition of addition of a second yeast strain (NCYC 1108) result in coflocculation. In the Helms method a sample of pitching yeast is washed by suspension and centrifugation in a solution of calcium sulphate. The washed yeast is re-suspended in calcium sulphate adjusted to pH 4.5 in a graduated centrifuge tube. After incubation at 20ëC for 20 minutes flocculation is assessed based on the volume of sediment formed.
Both the Burns and Gilliland procedures assess the occurrence of flocculation after yeast is recovered from laboratory wort fermentations. In the Burns procedure, the extent of floc formation is recorded when the yeast is suspended in beer, distilled water and acetate buffer, pH 4.6. In the Gilliland method yeast is grown on agar medium to obtain separate colonies. Fifty colonies are picked off the plate and each is inoculated into 5ml trub-free hopped wort. After three days static incubation, at 27 ëC, each culture is examined for the formation of sediment. After pouring off all but 0.5 ml of the liquid the yeast is gently agitated and examined. Gilliland classified yeast into four groups on the basis of their flocculence characteristics. Class I types were completely dispersed throughout. Class II yeast sediment towards the end of the incubation. The sediment is granular in appearance when re-suspended. Class III types behave similarly to the Class II but the sediment is more difficult to re-suspend and forms large flakes. Class IV yeast sediments very early in the growth phase. The sediment re-suspends to form loose flakes.

Results (Vietnamese) 1:

13.10.3 thử nghiệm dựa trên thuộc tính bề mặt tế bàoCác thuộc tính bề mặt của tế bào nấm men làm nền tảng cho hai loại khác biệt bài kiểm tra. Đây là thứ nhất, những người đánh giá tài sản miễn dịch tế bào và thứ hai, những người mà đo lường chất.Miễn dịch phân tích dựa trên các tương tác giữa các kháng nguyên (tế bào nấm men hay phần đó) và kháng thể. Sau này được thu được bằng cách trước khi tiêm phòng của phần kháng nguyên vào một máy chủ phù hợp động vật có vú, thường là một con thỏ. Kháng thể được nâng lên để đáp ứng với kháng nguyên và đây có thể được cô lập và tinh khiết. Thành phần của vách tế bào nấm men, chủ yếu mannan bên chuỗi, đã hoạt động kháng nguyên (phần 11.6.1). Phản ứng giữa các kháng nguyên và kháng thể được cụ thể. Tổ hợp thành lập có thể được hình dung bởi khớp nối một phân tử huỳnh quang để kháng thể. Một phương pháp sử dụng nhiều là kỹ thuật ELISA (liên kết với enzyme miễn dịch-thấm khảo nghiệm), trong đó một màng được phủ một lớp của kháng thể, đó là phản ứng với các kháng nguyên quan tâm. Hỗn hợp kháng nguyên được thêm vào các màng tế bào. Các màng tế bào sau đó rửa sạch, mà loại bỏ tất cả, nhưng các kháng nguyên bị ràng buộc. Các phức tạp sau đó được điều trị với một lô thứ hai gồm kháng thể, giống như gắn liền với các màng tế bào, mặc dù trong trường hợp này nó chia với một loại enzyme. Phần thứ hai của kháng thể liên kết với khu phức hợp kháng thể kháng nguyên. Sau khi rửa một thứ hai để loại bỏ các kháng thể toạc, một chất nền được thêm vào, đó hoạt động sau khi bởi enzyme và trong việc mang lại một sự thay đổi màu sắc. Thay đổi màu sắc này cho phép các kiểu trực quan và định lượng của ràng buộc kháng nguyên.Phương pháp đánh giá nấm men flocculence có một lịch sử lâu dài. Họ không thể được sử dụng để cung cấp một nhận dạng tích cực nhưng có ích dù sao cho đảm bảo rằng chủng nấm men đang có hành vi thông thường. Bốn phương pháp đã được chấp nhận trong ngành công nghiệp bia. Đây là các thủ tục của Burns (Burns, năm 1941), Gilliland (1951), Hough (1957) và Helms (Helms và ctv., 1953). Của những chỉ các phương pháp Gilliland và Helms chung vẫn sử dụng. Các cuộc thử nghiệm phương pháp Hough cho chất aliquots của rửa các tế bào bị đình chỉ trong dung dịch canxi clorua điều chỉnh cho độ pH 3,5 hoặc pH 5.0. Chủng nấm men được phân loại dựa trên việc chất xảy ra dưới những điều kiện này. Nếu có, hiện bổ sung maltose phân tán flocs? Nếu không, để bổ sung các ethanol kết quả trong chất? Nếu không có, không bổ sung bổ sung một kết quả căng thẳng (NCYC 1108) nấm men thứ hai trong coflocculation. Trong phương pháp Helms một mẫu của bày nấm men được rửa sạch bằng hệ thống treo và số trong một giải pháp của canxi sunfat. Các men rửa là lại bị đình chỉ trong canxi sunfat điều chỉnh để pH 4.5 trong một ống máy ly tâm tốt nghiệp. Sau khi ủ bệnh lúc 20ëC 20 phút chất được đánh giá dựa trên khối lượng trầm tích được hình thành.Cả hai thủ tục bỏng và Gilliland đánh giá sự xuất hiện của chất sau khi nấm men bị thu hồi từ phòng thí nghiệm wort fermentations. Trong thủ tục Burns, mức độ hình thành floc được ghi lại khi các men bị đình chỉ trong bia, nước cất và bộ đệm axetat, pH 4.6. Trong Gilliland phương pháp nấm men được trồng trên agar phương tiện để có được các thuộc địa riêng biệt. Năm mươi thuộc địa được chọn ra các tấm và mỗi tiêm chủng vào 5ml trub miễn phí hopped wort. Sau ba ngày ấp trứng tĩnh, tại 27 ëC, mỗi nền văn hóa được kiểm tra cho sự hình thành của trầm tích. Sau khi đổ ra tất cả, nhưng cách 0.5 ml của chất lỏng các men nhẹ nhàng giao động và kiểm tra. Gilliland phân loại nấm men thành bốn nhóm trên cơ sở các đặc điểm flocculence của họ. Lớp tôi loại đã bị giải tán hoàn toàn trong suốt. Lớp trầm tích nấm men một II cuối là ủ bệnh. Trầm tích là chi tiết trong xuất hiện khi tái treo. Lớp III loại hành xử tương tự như vậy để Class II nhưng trầm tích là khó khăn hơn để tái đình chỉ và tạo thành mảnh lớn. Lớp IV nấm men trầm tích rất sớm trong giai đoạn tăng trưởng. Trầm tích lại đình chỉ để dạng lỏng mảnh.

Results (Vietnamese) 2:

13.10.3 Các xét nghiệm dựa trên tính chất bề mặt tế bào
Các tính chất bề mặt của các tế bào nấm men là nền tảng cho hai loại xét nghiệm khác biệt. Đây là đầu tiên, những người đánh giá các đặc tính miễn dịch của các tế bào và, thứ hai, những người mà đo lường kết bông.
Phân tích miễn dịch dựa trên các tương tác giữa kháng nguyên (các tế bào nấm men hoặc phần của chúng) và kháng thể. Sau này có được bằng cách tiêm phòng trước của phần kháng nguyên vào vật chủ động vật có vú thích hợp, thường là một con thỏ. Kháng thể được nâng lên để đáp ứng với các kháng nguyên và chúng có thể được phân lập và tinh khiết. Các thành phần của vách tế bào nấm men, chủ yếu chuỗi bên Mannan, có hoạt tính kháng nguyên (Phần 11.6.1). Phản ứng giữa kháng nguyên và kháng thể là cụ thể. Các khu phức hợp hình thành có thể được hình dung bằng cách kết hợp một phân tử huỳnh quang để các kháng thể. Một phương pháp được sử dụng nhiều, nhất là kỹ thuật ELISA (enzyme-linked miễn dịch thấm assay), trong đó một màng được phủ một lớp kháng thể, đó là phản ứng với kháng nguyên quan tâm. Các hỗn hợp kháng nguyên được thêm vào màng. Sau đó màng được rửa sạch, trong đó loại bỏ tất cả, nhưng các kháng nguyên ràng buộc. Khu phức hợp này sau đó được điều trị với một đợt thứ hai của kháng thể, giống như gắn vào màng, mặc dù trong trường hợp này nó được liên hợp với một enzyme. Phần thứ hai kháng thể liên kết với các phức hợp kháng nguyên-kháng thể. Sau khi rửa thứ hai để loại bỏ kháng thể cởi ra, một chất nền được thêm vào, mà chịu tác động của các enzyme và khi làm đem lại một sự thay đổi màu sắc. Thay đổi màu sắc này cho phép quan sát và định lượng các kháng nguyên ràng buộc.
Phương pháp đánh giá men flocculence có một lịch sử lâu dài. Họ không thể được sử dụng để cung cấp một xác định dương tính nhưng rất hữu ích tuy nhiên để đảm bảo rằng các chủng nấm men được cư xử bình thường. Bốn phương pháp đã được chấp nhận trong ngành công nghiệp sản xuất bia. Đây là những thủ tục của Burns (Burns, 1941), Gilliland (1951), Hough (1957) và Helms (Helms et al., 1953). Trong số này chỉ có các phương pháp Gilliland và Helms vẫn được sử dụng phổ biến. Các xét nghiệm phương pháp Hough cho keo tụ của phân ước của các tế bào rửa lơ lửng trong dung dịch canxi clorua được điều chỉnh pH 3,5 hoặc pH 5.0. Chủng nấm men được phân loại dựa vào việc keo tụ xảy ra dưới những điều kiện này. Nếu có, thì việc bổ sung các maltose tán flocs? Nếu không, không bổ sung các kết quả ethanol trong keo tụ? Nếu không, làm việc bổ sung thêm một chủng nấm men thứ hai (NCYC 1108) dẫn đến coflocculation. Trong phương pháp Helms một mẫu của nấm men bày được rửa sạch bởi hệ thống treo và ly tâm trong một dung dịch canxi sunfat. Các men rửa được tái lơ lửng trong calcium sulphate để điều chỉnh pH 4,5 trong ống ly tâm tốt nghiệp. Sau khi ủ ở 20ëC cho 20 phút keo tụ được đánh giá dựa trên khối lượng trầm tích hình thành.
Cả hai thủ tục Burns và Gilliland đánh giá sự xuất hiện của chất keo tụ sau nấm men được thu hồi từ quá trình lên men dịch nha trong phòng thí nghiệm. Trong thủ tục Burns, mức độ hình thành các bông keo tụ được ghi nhận khi các men bị đình chỉ trong bia, nước cất và đệm acetate, pH 4,6. Trong phương pháp men Gilliland được trồng trên môi trường thạch để có được các thuộc địa riêng biệt. Năm mươi thuộc địa được chọn ra đĩa và từng được cấy vào 5ml trub miễn wort nhảy. Sau ba ngày ủ tĩnh, tại 27 EC, mỗi nền văn hóa được kiểm tra cho sự hình thành các trầm tích. Sau khi đổ tất cả trừ 0,5 ml dung dịch nấm men là nhẹ nhàng kích động và kiểm tra. Gilliland phân loại nấm men thành bốn nhóm trên cơ sở đặc điểm flocculence của họ. Các loại lớp tôi đã hoàn toàn phân tán khắp. Class II men trầm tích vào cuối thời gian ủ bệnh. Các trầm tích hạt trong xuất hiện khi đang bị đình chỉ. Class III loại hành xử tương tự như các lớp II nhưng các trầm tích là khó khăn hơn để tái đình và tạo vảy lớn. Class IV men trầm tích rất sớm trong giai đoạn tăng trưởng. Các trầm tích lại đình chỉ để tạo thành vảy lỏng.