4. Discussion4.1. Smoke chemistryTh

4. Discussion
4.1. Smoke chemistry

The incorporation of eugenol up to an addition level of +10%, i.e., 71 mg eugenol/cigarette, to an American-blended cigarette led to an increase in TPM of up to +30%, i.e., 3.0 mg TPM/cigarette. Eugenol is found practically exclusively in the particulate phase of MS (Polzin et al., 2007) and has a high transfer rate into the smoke. Eugenol in the blend and MS of these cigarettes resulted in a transfer rate of approximately 12%, i.e., up to 4.6 mg eugenol/cigarette (even when measured several months after the completion of the study). This figure is practically the same obtained from the other experimental cigarettes that show a transfer of approximately 12% of the eugenol from the cloves or clove components into the MS. As such, this increase in TPM can be explained completely by a dilution effect resulting from the transfer of eugenol into the MS. When replacing 71 mg of the tobacco by eugenol, 642 mg tobacco/cigarette is left. Assuming a conversion rate of 1.3% for tobacco into TPM, 8.3 mg TPM/cigarette from tobacco would be expected. Together with the amount of eugenol in TPM (4.6 mg/cigarette), this sums up to an expected 12.9 mg TPM/cigarette. This is consistent with the 12.3 mg TPM/cigarette determined. Analyzing the yields of smoke toxicants on a per mg TPM basis, the situation is less clear. Decreases were found down to approximately 60% for N-nitrosodimethylamine but some toxicants such as HCN were only reduced by 5%. Tobacco smoke-derived TPM accounts for 2/3 of the TPM. Accordingly, some changes in the burning characteristics have to be postulated. Unexpectedly, the yield of nicotine per cigarette was not affected although up to 10% of the tobacco was replaced by eugenol. This suggests that the mechanism requires further investigation.

The addition of approximately +30% SC, i.e., cloves where the oleoresin had been extracted, resulted in an increased yield of benzene, phenolics, and PAHs of the same percentage on a per cigarette basis. Replenishment of the SC either with eugenol or with the complete oleoresins did not alter this increased yield. This might be seen as in contradiction to the decreases observed for the cigarettes where only eugenol was included. However, at an addition level of 5% pure eugenol in the tobacco, the decreases were not very obvious. However, they were distinctly obvious at an addition level of 10% eugenol in the tobacco. The eugenol content in the cigarettes where the SC were replenished with eugenol or the complete oleoresin or where full cloves were used was less than 4%; a eugenol concentration where a distinct effect of the eugenol would not be expected. The TPM yield was significantly increased up to +35% in the order SC, SC plus eugenol, SC plus oleoresins, and full cloves. This was accompanied by decreased concentrations in TPM for some analytes to the levels found for tobacco without any clove components, for others smoke toxicant levels the reductions were more distinct, e.g., a −30% decrease for the aldehydes and TSNAs. The absolute increase in TPM due to the addition of unchanged cloves was 8 mg per cigarette. The eugenol in TPM accounted for 5 mg per cigarette. Obviously, the decreased concentrations of the toxicants in TPM cannot fully be explained by a simple dilution by the eugenol, which would result in a decrease of −20%. The combustion of organic materials always results in the production of toxicants (Sallsten et al., 2006). As such, the combustion of cloves should also have generated some aldehydes. In summary, the decreased toxicant concentrations in MS are the result of a dilution by eugenol and some changes in the burning characteristics and/or interactions of combustion products of clove with tobacco smoke components.

On a per mg TPM basis, the comparison of the American-blended reference cigarette 2R4F without cloves with the American-blended cigarette with unchanged cloves showed the same decreases in smoke toxicant concentrations as seen for the cigarettes with Indonesian tobacco. Obviously, the choice of the tobacco blend is of minor importance when investigating the effects of tobacco ingredients. This is in accordance with the literature. Several authors studying the addition of the same ingredients to control cigarettes made from different blends have reached the same conclusion (Baker et al., 2004, Renne et al., 2006 and Rustemeier et al., 2002).
4.2. In vitro mammalian cell cytotoxicity

For the TPM, cytotoxicity could be found around 200 mg/l for the reference cigarette 2R4F on a per mg TPM basis. Cytotoxic concentrations of eugenol in vitro have been reported to be around 150 mg/l culture medium ( Chang et al., 2000, Ho et al., 2006 and Schnitzler et al., 2008) to 400 mg/l ( Maralhas et al., 2006 and Prashar et al., 2006). As such, the toxicity of eugenol is similar to that of TPM on an equal weight basis. Accordingly, a pure dilution effect due to the eugenol in the TPM is unlikely as a cause for the slightly, approximately −10%, decreased cytotoxicity of the TPM of the cigarettes with the addition of eugenol. Another explanation beside the reduced toxicity due to a reduction of unknown toxic combustion products, might be the antioxidant and radical-scavenging activity of eugenol ( Atsumi et al., 2001, Fujisawa et al., 2000, Fujisawa et al., 2002 and Kadoma et al., 2007). Other components of the oleoresins, especially β-caryophyllene, exhibit the same chemical properties to a significant extent ( Chang et al., 2013 and Siani et al., 2013).

For the GVP, the decreased yield of smoke toxicants as a function of the eugenol addition was accompanied by a significant decrease (up to −40% to −50%) of the in vitro cytotoxicity. However, with the exception of acrolein, the GVP constituents measured in the smoke contribute only to a minor degree to the cytotoxicity as measured in the NRU assay ( Tewes et al., 2003). Tewes et al. determined for acrolein a contribution of 42% for the GVP cytotoxicity of the University of Kentucky standard reference cigarette 1R4F. In our laboratory, the long-term EC50 value for acrolein is 0.0308 μmol/ml or 1.73 μg/ml. The EC50 value for the GVP of the control cigarette (US-0) turned out to be 0.202 mg TPM/ml and the acrolein yield 5.41 μg/mg TPM, i.e., 1.09 μg/0.202 mg TPM. Thus, assuming simply linear relationships and no interactions of smoke constituents, the contribution of acrolein to the GVP cytotoxicity was 63% ((1.09 × 100)/1.73). Compared to the control cigarette, the cigarette with the incorporation of 10% eugenol showed a 40% lower acrolein yield per mg TPM and a decrease in cytotoxicity by 37%. Performing the same simplified calculation as above, the contribution of acrolein to the cytotoxicity is practically the same, i.e., 61%. However, one would expect a reduction of cytotoxicity due to the reduced acrolein by 40 × 61/100 = 24%. Obviously, the reduction in acrolein does not explain the effect completely. As the analysis of eugenol in the GVP fails to provide any detectable analyte signal by GC/MS ( Polzin et al., 2007), it therefore seems unlikely that pure eugenol with its antioxidant and radical-scavenging activity is responsible for this effect. Pyrolysis products of eugenol are also unlikely to be the cause of the effect as eugenol, due to its volatility, should be nearly completely transferred without decomposition to MS similar to other compounds with similar physical–chemical characteristics ( Baker and Bishop, 2004). It remains a possibility that eugenol may change the burning characteristics of the cigarette towards the production of less smoke toxicants.

The addition of cloves or clove components did not alter the cytotoxicity of the TPM of the smoke. The addition of spent cloves, showed a reduction in the cytotoxicity of the GVP. A replenishment of the spent cloves with eugenol or the complete oleoresins did add to this effect. Addition of unchanged cloves showed the highest reduction. There was a tendency for increasing reductions in the order the cigarette compositions are mentioned above. The reductions in GVP toxicity correlate with the eugenol content in the blend. As for the series with the addition of pure eugenol (see above), a dilution effect and a change in the burning characteristic with a consequent change in smoke toxicant levels might be a reasonable explanation.
4.3. In vitro bacterial mutagenicity

Eugenol is not mutagenic in the Ames assay as confirmed in several laboratories (Azizan and Blevins, 1995, Dorange et al., 1977, Sekizawa and Shibamoto, 1982, Stea et al., 1994 and To et al., 1982). Therefore, increases in the Ames mutagenicity due to the contribution from unchanged eugenol transferred from the cigarette filler into the smoke TPM are not expected. On the other hand, considering the large decreases (up to 50%) in mutagenicity due to the addition of eugenol to the tobacco, pure dilution effects can be excluded as well, as eugenol may account only for up to one third of the TPM mass. It might be speculated that a combination of a reduced formation of toxicants by combustion and the antioxidant and radical-scavenging activity of eugenol is responsible for this effect. Actually, eugenol as a pure substance has been reported to inhibit TPM induced Ames-mutagenicity. However, the doses necessary for this reduction suggest a minor contribution to the reductions seen in our studies (Sukumaran and Kuttan, 1995).

The addition of spent cloves showed a reduction in the mutagenicity of the TPM. A replenishment of the spent cloves with eugenol or the complete oleoresins did add to this effect. Addition of full cloves, depending on the tester strain, further increased the effect or did not lead to a further reduction compared to spent cloves. The reductions in mutagenicity correlate fairly well with the eugenol content in the blend. As in case of the cigarettes with the addition of pure eugenol, a combination of a dilution, a

Results (Thai) 1:

4. สนทนา4.1. ควันเคมีจดทะเบียนของยูเจนอลถึงระดับการเพิ่มของ + 10% เช่น 71 มิลลิกรัมยูเจนอล/บุหรี่ ต้องการบุหรี่ผสมอเมริกันที่นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของ TPM ถึง +30% เช่น 3.0 มิลลิกรัม TPM/บุหรี่ ยูเจนอลอยู่ในทางปฏิบัติโดยเฉพาะในระยะฝุ่นของ MS (Polzin et al., 2007) และมีอัตราการถ่ายโอนข้อมูลสูงในควัน ยูเจนอลในการผสมผสานและ MS ของบุหรี่เหล่านี้ส่งผลให้อัตราการถ่ายโอนของประมาณ 12% เช่น ถึง 4.6 มิลลิกรัมยูเจนอล/บุหรี่ (แม้วัดหลายเดือนหลังเสร็จสิ้นการศึกษา) ตัวเลขนี้เป็นจริงเหมือนที่ได้รับจากอื่นทดลองบุหรี่ที่แสดงการโอนประมาณ 12% ของยูเจนอลจะจากกลีบหรือส่วนประกอบของกานพลูเป็น MS ดัง เพิ่มใน TPM สามารถถูกอธิบายอย่างสมบูรณ์ โดยผลเจือจางเกิดจากการโอนย้ายของยูเจนอลเป็น MS เมื่อแทน 71 มิลลิกรัมของยาสูบที่ โดยยูเจนอล 642 มิลลิกรัมยาสูบ/บุหรี่ที่เหลือ สมมติว่าอัตราแปลง 1.3% สำหรับยาสูบใน TPM, 8.3 mg TPM/บุหรี่ จากยาสูบจะคาดหวัง พร้อมกับจำนวนของยูเจนอลใน TPM (4.6 มิลลิกรัม/บุหรี่), นี้ผลรวมถึงการ mg 12.9 คาด TPM/บุหรี่ สอดคล้องกับ mg 12.3 TPM/บุหรี่ กำหนดอยู่ การวิเคราะห์อัตราผลตอบแทนของ toxicants ควันบนเป็นเกณฑ์มิลลิกรัม TPM สถานการณ์จะน้อย ลดลงพบลงประมาณ 60% N-nitrosodimethylamine แต่บาง toxicants เช่น HCN ได้เฉพาะลดลง 5% TPM มาควันยาสูบบัญชีสำหรับ 2/3 ของ TPM ตามลำดับ เปลี่ยนแปลงบางอย่างในลักษณะเขียนได้เป็น postulated โดยไม่คาดคิด ผลตอบแทนของนิโคตินต่อบุหรี่จึงไม่เกิดแม้ว่าถึง 10% ของยาสูบถูกแทนที่ ด้วยยูเจนอล นี้ชี้ให้เห็นว่า กลไกที่ต้องสอบสวนเพิ่มเติมการเพิ่มประมาณ +30% SC เช่น กลีบที่ oleoresin ที่ได้ถูกดึง ส่งผลให้ผลตอบแทนเพิ่มขึ้นของเบนซีน phenolics และ PAHs เปอร์เซ็นต์เดียวกันบนพื้นฐานต่อบุหรี่ เติมของ SC กับยูเจนอล หรือ กับ oleoresins สมบูรณ์ไม่เปลี่ยนแปลงผลผลิตที่เพิ่มขึ้นนี้ นี้อาจจะเห็นในความขัดแย้งจะลดลงที่สังเกตสำหรับบุหรี่ที่ยูเจนอลเท่านั้นไม่รวม อย่างไรก็ตาม ที่ระดับการเพิ่มของ eugenol บริสุทธิ์ 5% ในการสูบบุหรี่ การลดลงได้ไม่ชัด อย่างไรก็ตาม พวกเขาได้ชัดเจนอย่างเห็นได้ชัดที่ระดับการเพิ่มของยูเจนอล 10% ในการสูบบุหรี่ เนื้อหายูเจนอลในบุหรี่ SC ถูกเติม ด้วยยูเจนอลหรือ oleoresin สมบูรณ์ หรือ ที่ใช้กลีบเต็มไม่น้อยกว่า 4% ยูเจนอลเข้มข้นที่ผลความแตกต่างของยูเจนอลจะไม่คาดหวัง ผลผลิต TPM ได้อย่างมากเพิ่มขึ้นถึง +35% ตามลำดับ SC, SC และยูเจนอล SC บวก oleoresins และเต็มไปด้วยกลีบ นี้พร้อมกับ โดยลดความเข้มข้นใน TPM สำหรับ analytes บางระดับที่พบในยาสูบโดยโซลูชันกานพลู สำหรับคนสูบบุหรี่ toxicant ระดับ การลดแตกต่างกันมาก เช่น −30% ลด aldehydes และ TSNAs เพิ่มขึ้นแน่นอนใน TPM เนื่องจากการเพิ่มของกลีบไม่มี 8 มิลลิกรัมต่อบุหรี่ ยูเจนอลใน TPM คิดเป็น 5 มิลลิกรัมต่อบุหรี่ อย่างชัดเจน ความเข้มข้นลดลงของ toxicants ใน TPM ไม่เต็มสามารถอธิบาย โดยเจือจางอย่าง โดยยูเจนอล ซึ่งจะส่งผลในการลด% −20 การสันดาปของวัสดุอินทรีย์ผลเสมอในการผลิตของ toxicants (Sallsten และ al., 2006) เช่น การสันดาปของกลีบควรยังมีขึ้นบาง aldehydes ในสรุป ความเข้มข้น toxicant ลดลงใน MS เป็นผลของการเจือจางโดยยูเจนอลและการเปลี่ยนแปลงบางอย่างในลักษณะเขียนหรือโต้ตอบผลิตภัณฑ์เผาไหม้กานพลูกับคอมโพเนนต์การสูบบุหรี่ในการเกณฑ์มิลลิกรัม TPM การเปรียบเทียบ 2R4F บุหรี่ผสมอเมริกันอ้างอิงไม่มีกลีบกับบุหรี่ผสมอเมริกันมีกลีบที่ไม่เปลี่ยนแปลงแสดงให้เห็นว่าลดลงเหมือนกันในความเข้มข้น toxicant ควันเห็นสำหรับบุหรี่กับอินโดนีเซียสูบบุหรี่ อย่างชัดเจน หลากหลายผสมยาสูบได้ของสำคัญเพียงเล็กน้อยเมื่อตรวจสอบผลกระทบของยาสูบ อยู่ตามวรรณกรรม หลายผู้เขียนศึกษาการเพิ่มส่วนผสมเดียวกันการควบคุมบุหรี่ที่ทำจากผสมแตกต่างกันได้ถึงข้อสรุปเดียวกัน (al. et เบเกอร์ 2004, Renne et al., 2006 และ Rustemeier และ al., 2002)4.2. การเพาะเลี้ยงเซลล์ mammalian cytotoxicityสำหรับ TPM, cytotoxicity พบประมาณ 200 mg/l สำหรับ 2R4F บุหรี่อ้างอิงในการเกณฑ์ TPM มิลลิกรัม Cytotoxic ความเข้มข้นของยูเจนอลการเพาะเลี้ยงได้รับรายงานว่า รอบสื่อวัฒนธรรม 150 mg/l (ช้างร้อยเอ็ด al., 2000 โฮจิมินห์และ al., 2006 และ Schnitzler et al., 2008) ใน 400 mg/l (Maralhas และ al., 2006 และ Prashar และ al., 2006) เช่น ความเป็นพิษของยูเจนอลจะคล้ายคลึงกับของ TPM ตามมีน้ำหนักเท่ากัน ตาม ผลเจือจางบริสุทธิ์เนื่องจากยูเจนอลใน TPM ไม่น่าเป็นสาเหตุสำหรับเล็กน้อย การลดลงของประมาณ −10%, cytotoxicity ของ TPM ของบุหรี่ที่มีการเพิ่มของยูเจนอล อาจอธิบายอื่นนอกจากความเป็นพิษลดลงเนื่องจากลดการสันดาปไม่รู้จักพิษผลิตภัณฑ์ สารต้านอนุมูลอิสระและอนุมูล scavenging กิจกรรมของยูเจนอล (Atsumi et al., 2001 ฟุจิซะและ al., 2000 ฟุจิซะและ al., 2002 และ Kadoma et al., 2007) ส่วนประกอบอื่น ๆ ของ oleoresins โดยเฉพาะอย่างยิ่งβ-caryophyllene แสดงคุณสมบัติทางเคมีเหมือนกันระดับสำคัญ (ช้างร้อยเอ็ด al., 2013 และ Siani et al., 2013)สำหรับ GVP ผลผลิตที่ลดลงของ toxicants ควันเป็นฟังก์ชันเพิ่มยูเจนอลถูกพร้อม ด้วยลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (ถึง −40% −50%) ของ cytotoxicity เพาะเลี้ยง อย่างไรก็ตาม ยกเว้น acrolein, constituents GVP วัดควันร่วมเฉพาะระดับเล็กน้อยถึง cytotoxicity วัดในวิเคราะห์ NRU (Tewes et al., 2003) กำหนด Tewes et al. สำหรับ acrolein สัดส่วน 42% สำหรับ cytotoxicity GVP ของมหาวิทยาลัยเคนทักกีอ้างอิงมาตรฐานบุหรี่ 1R4F ในห้องปฏิบัติการของเรา ค่า EC50 ระยะยาวสำหรับ acrolein คือ 0.0308 μmol/ml หรือ 1.73 μg/ml ค่า EC50 ของ GVP ของบุหรี่ควบคุม (สหรัฐอเมริกา-0) กลายเป็นมิลลิกรัม 0.202 TPM/ml และ acrolein ผลผลิต 5.41 μg/มิลลิกรัม TPM เช่น 1.09 μg/0.202 มิลลิกรัม TPM ดังนั้น สมมติว่าความสัมพันธ์เพียงเชิงเส้นและไม่โต้ตอบของ constituents ควัน ของ acrolein เพื่อ GVP cytotoxicity ได้ 63% ((1.09 × 100)/1.73) เมื่อเทียบกับควบคุมบุหรี่ บุหรี่กับการจดทะเบียนของยูเจนอล 10% แสดงให้เห็นว่าเป็น 40% ต่ำกว่า acrolein ผลตอบแทนต่อมิลลิกรัม TPM และ cytotoxicity ลดลง 37% ดำเนินการคำนวณภาษาเดียวกันกับข้างบน ของ acrolein เพื่อ cytotoxicity ที่ได้จริงเหมือน เช่น 61% อย่างไรก็ตาม หวังลด cytotoxicity จาก acrolein ลดจาก 40 × 61/100 = 24% อย่างชัดเจน การลดใน acrolein ไม่อธิบายผลสมบูรณ์ เป็นการวิเคราะห์ของยูเจนอลในล้มเหลว GVP analyte ใด ๆ สามารถตรวจสอบได้ให้สัญญาณ โดย GC/MS (Polzin et al., 2007), จึงดูเหมือนว่าไม่น่าที่ยูเจนอลบริสุทธิ์กับการต้านอนุมูลอิสระ และอนุมูล scavenging กิจกรรมรับผิดชอบสำหรับลักษณะพิเศษนี้ ผลิตภัณฑ์ชีวภาพของยูเจนอลก็ไม่น่าจะเป็นสาเหตุของผลเป็นยูเจนอล เนื่องจากความผันผวนของ เกือบทั้งหมดโอนย้ายโดยไม่แยกส่วนประกอบจะคล้ายคลึงกับสารประกอบอื่น ๆ ที่มีลักษณะทางกายภาพ – เคมีคล้าย (เบเกอร์และบาทหลวง 2004) MS มันยังคงเป็นความเป็นไปได้ที่ยูเจนอลอาจเปลี่ยนลักษณะการเขียนของบุหรี่ต่อการผลิตของ toxicants ควันน้อยนอกจากนี้กลีบหรือคอมโพเนนต์กานพลูไม่เปลี่ยน cytotoxicity ของ TPM ของควัน การเพิ่มกลีบใช้จ่าย แสดงให้เห็นว่าลดใน cytotoxicity ของ GVP เติมของกลีบใช้จ่ายกับยูเจนอลหรือ oleoresins สมบูรณ์ได้เพิ่มลักษณะพิเศษนี้ เพิ่มกลีบไม่เปลี่ยนแปลงแสดงให้เห็นว่าการลดสูงสุด มีแนวโน้มในการเพิ่มลดตามลำดับกล่าวถึงข้างต้นจนก้น ลดความเป็นพิษ GVP ในเชื่อมโยงกับเนื้อหายูเจนอลในการผสมผสาน สำหรับชุดที่ มีการเพิ่มของยูเจนอลบริสุทธิ์ (ดูข้างต้น), ผลเจือจาง และการเปลี่ยนแปลงในลักษณะการเขียน มีการเปลี่ยนแปลงผลลัพธ์ในระดับควัน toxicant อาจเป็นคำอธิบายที่สมเหตุสมผล4.3 การศึกษาเพาะเลี้ยงแบคทีเรียยูเจนอลไม่ mutagenic ในวิเคราะห์เอมส์เป็นยืนยันในห้องปฏิบัติการต่าง ๆ (Azizan และ Blevins, 1995, Dorange et al., 1977, Sekizawa และ Shibamoto, 1982, Stea et al., 1994 และถึงร้อยเอ็ด al., 1982) ดังนั้น เพิ่มการศึกษาเอมส์เนื่องจากผลจากโอนย้ายจากฟิลเลอร์บุหรี่ใน TPM ควันยูเจนอลที่ไม่เปลี่ยนแปลงไม่คาดว่า บนมืออื่น ๆ พิจารณาขนาดใหญ่ลดลง (สูงสุด 50%) ในการศึกษาเนื่องจากการเพิ่มของยูเจนอลกับการสูบบุหรี่ ผลเจือจางบริสุทธิ์สามารถแยกด้วย เป็นยูเจนอลอาจบัญชีสำหรับถึงหนึ่งในสามของมวล TPM เท่านั้น มันอาจจะคาดว่า ก่อตัวที่ลดลงของ toxicants โดยการเผาไหม้ และสารต้านอนุมูลอิสระและอนุมูล scavenging กิจกรรมของยูเจนอลรับผิดชอบสำหรับลักษณะพิเศษนี้ จริง มีรายงานยูเจนอลเป็นสารบริสุทธิ์ยับยั้ง TPM เกิดเอมส์ศึกษา อย่างไรก็ตาม ปริมาณที่จำเป็นสำหรับการลดนี้แนะนำบริจาครองลดที่เห็นในการศึกษาของเรา (Sukumaran และ Kuttan, 1995)การเพิ่มกลีบใช้จ่ายพบว่าลดในศึกษาของ TPM เติมของกลีบใช้จ่ายกับยูเจนอลหรือ oleoresins สมบูรณ์ได้เพิ่มลักษณะพิเศษนี้ เพิ่มเต็มกลีบ ขึ้นอยู่กับพันธุ์ทดสอบ เพิ่มผล หรือไม่ได้ทำให้ลดการเปรียบเทียบกับกลีบใช้จ่ายเพิ่มเติม การลดในการศึกษาซึ่ง มีเนื้อหายูเจนอลในการผสมผสานอย่างดี ในกรณีของบุหรี่แห่งยูเจนอลบริสุทธิ์ ใช้เจือจาง การ

Results (Thai) 2:

4. อภิปราย
4.1 เคมีควันรวมตัวกันของ eugenol ถึงการเพิ่มขึ้นของระดับ + 10% คือ 71 มิลลิกรัม eugenol / บุหรี่การสูบบุหรี่อเมริกันผสมนำไปสู่การเพิ่มขึ้นใน TPM ได้ถึง 30% คือ 3.0 มิลลิกรัม TPM / บุหรี่ . eugenol พบจริงเฉพาะในช่วงอนุภาคของ MS (Polzin et al., 2007) และมีอัตราการถ่ายโอนสูงขึ้นไปในควันบุหรี่ eugenol ในการผสมผสานและ MS ของบุหรี่เหล่านี้ส่งผลให้อัตราการถ่ายโอนประมาณ 12% คือได้ถึง 4.6 มิลลิกรัม eugenol / บุหรี่ (แม้เมื่อวัดหลายเดือนหลังจากเสร็จสิ้นการศึกษา) ตัวเลขนี้เป็นจริงเหมือนกันที่ได้รับจากการสูบบุหรี่การทดลองอื่น ๆ ที่แสดงการโอนประมาณ 12% ของ eugenol จากกานพลูหรือส่วนประกอบกานพลูลงใน MS เช่นการเพิ่มขึ้นนี้ใน TPM สามารถอธิบายได้อย่างสมบูรณ์โดยผลกระทบที่เกิดจากการโอน eugenol เป็น MS เมื่อเปลี่ยน 71 มิลลิกรัมของยาสูบโดย eugenol, 642 มก. ยาสูบ / บุหรี่ที่เหลือ สมมติว่าอัตราการแปลง 1.3% สำหรับยาสูบเป็น TPM 8.3 มิลลิกรัม TPM / บุหรี่จากยาสูบจะคาดว่า ร่วมกับปริมาณของ eugenol ใน TPM (4.6 mg / บุหรี่) นี้จำนวนมากขึ้นอย่างที่คาดไว้ 12.9 มิลลิกรัม TPM / บุหรี่ ซึ่งสอดคล้องกับ 12.3 มิลลิกรัม TPM / บุหรี่กำหนด การวิเคราะห์ผลตอบแทนของสารพิษควันบนพื้นฐานต่อมิลลิกรัม TPM สถานการณ์ที่ไม่ชัดเจน การลดลงของเขาถูกพบลงไปประมาณ 60% N-nitrosodimethylamine แต่สารพิษบางอย่างเช่น HCN ลดลงเพียง 5% ควันบุหรี่ที่ได้จากบัญชี TPM สำหรับ 2/3 ของ TPM ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงบางอย่างในลักษณะการเผาไหม้จะต้องมีการตั้งสมมติฐาน ไม่คาดคิดอัตราผลตอบแทนของนิโคตินต่อบุหรี่ที่ไม่ได้รับผลกระทบแม้ว่าถึง 10% ของยาสูบถูกแทนที่ด้วย eugenol นี้แสดงให้เห็นว่ากลไกที่จำเป็นต้องตรวจสอบต่อไป. นอกจากนี้ประมาณ 30% SC คือกลีบที่ oleoresin ได้รับการสกัดส่งผลให้อัตราผลตอบแทนที่เพิ่มขึ้นของเบนซินฟีนอลและสาร PAHs ร้อยละเดียวกันบนพื้นฐานต่อบุหรี่ การเติมเต็มของ SC ทั้งที่มี eugenol หรือ oleoresins สมบูรณ์ไม่ได้ปรับเปลี่ยนอัตราผลตอบแทนที่เพิ่มขึ้นนี้ นี้อาจถูกมองว่าเป็นความขัดแย้งที่จะลดลงสังเกตสำหรับบุหรี่ที่มีเพียง eugenol ถูกรวม แต่อยู่ในระดับที่นอกเหนือจาก 5% eugenol บริสุทธิ์ยาสูบลดลงไม่ได้ที่เห็นได้ชัดมาก แต่พวกเขาก็เห็นได้ชัดอย่างชัดเจนในระดับที่เพิ่มขึ้นของ eugenol 10% ในยาสูบ เนื้อหา eugenol ในบุหรี่ที่ SC ถูกเติมเต็มด้วย eugenol หรือ oleoresin สมบูรณ์หรือที่กลีบเต็มรูปแบบถูกนำมาใช้เป็นน้อยกว่า 4%; ความเข้มข้น eugenol ซึ่งผลกระทบที่แตกต่างของ eugenol จะไม่ได้คาดหวัง ผลผลิต TPM เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญถึง + 35% ในการสั่งซื้อ SC, SC บวก eugenol, SC บวก oleoresins และกลีบเต็ม นี้มาพร้อมกับความเข้มข้นลดลงใน TPM สำหรับวิเคราะห์บางส่วนให้อยู่ในระดับที่พบสำหรับยาสูบโดยไม่มีชิ้นส่วนใด ๆ กานพลูสำหรับคนอื่น ๆ สูบบุหรี่ระดับสารพิษลดลงอยู่ที่แตกต่างกันมากขึ้นเช่นการลดลง -30% สำหรับลดีไฮด์และ TSNAs เพิ่มขึ้นแน่นอนใน TPM เนื่องจากการเพิ่มขึ้นของการเปลี่ยนแปลงกลีบเป็น 8 มิลลิกรัมต่อบุหรี่ eugenol ใน TPM คิดเป็น 5 มิลลิกรัมต่อบุหรี่ เห็นได้ชัดว่ามีความเข้มข้นลดลงของสารพิษใน TPM ไม่สามารถอธิบายได้โดยง่ายโดยการเจือจาง eugenol ซึ่งจะส่งผลในการลดลง -20% การเผาไหม้ของวัสดุอินทรีย์ผลเสมอในการผลิตสารพิษ (Sallsten et al., 2006) เช่นการเผาไหม้ของกลีบนอกจากนี้ยังควรมีการสร้างลดีไฮด์บาง ในการสรุปความเข้มข้นของสารพิษลดลงใน MS เป็นผลมาจากการลดสัดส่วนโดย eugenol และการเปลี่ยนแปลงบางอย่างในลักษณะการเผาไหม้และ / หรือการโต้ตอบของผลิตภัณฑ์การเผาไหม้ของกานพลูที่มีส่วนประกอบของควันบุหรี่. เกี่ยวกับต่อมพื้นฐาน TPM เปรียบเทียบของอเมริกัน บุหรี่อ้างอิง -blended 2R4F โดยไม่ต้องกลีบกับบุหรี่อเมริกันผสมกับกลีบแสดงให้เห็นว่าไม่มีการเปลี่ยนแปลงลดลงเหมือนกันในความเข้มข้นของสารพิษควันที่เห็นสำหรับบุหรี่ที่มียาสูบอินโดนีเซีย เห็นได้ชัดว่าทางเลือกของการผสมผสานยาสูบมีความสำคัญรองลงมาเมื่อตรวจสอบผลกระทบของส่วนผสมยาสูบ ซึ่งเป็นไปตามที่มีวรรณกรรม ผู้เขียนหลายการศึกษาที่มีองค์ประกอบเดียวกันในการควบคุมการสูบบุหรี่ที่ทำจากผสมที่แตกต่างกันได้มาถึงข้อสรุปเดียวกัน (เบเกอร์, et al., 2004, Renne et al., 2006 และ Rustemeier et al., 2002). 4.2 ในความเป็นพิษเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนมหลอดทดลองสำหรับ TPM, พิษอาจจะพบได้ประมาณ 200 mg / l บุหรี่อ้างอิง 2R4F บนพื้นฐานต่อมิลลิกรัม TPM ความเข้มข้นของ cytotoxic eugenol ในหลอดทดลองที่ได้รับรายงานจะอยู่ที่ประมาณ 150 mg / l กลางวัฒนธรรม (ช้าง, et al., 2000, โฮ et al., 2006 และ Schnitzler et al., 2008) ถึง 400 mg / l (Maralhas และคณะ 2006 และ Prashar et al., 2006) เช่นความเป็นพิษของ eugenol จะคล้ายกับที่ของ TPM บนพื้นฐานน้ำหนักที่เท่ากัน ดังนั้นผลกระทบบริสุทธิ์เนื่องจาก eugenol ใน TPM ไม่น่าเป็นสาเหตุสำหรับเล็กน้อยประมาณ -10% ลดความเป็นพิษของ TPM ของบุหรี่ด้วยนอกเหนือจาก eugenol คำอธิบายข้างพิษลดลงเนื่องจากการลดลงของการเผาไหม้ที่เป็นพิษที่ไม่รู้จักอาจจะมีสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์รุนแรง-ไล่ของ eugenol (Atsumi et al., 2001, Fujisawa et al., 2000 Fujisawa et al., 2002 และ Kadoma et al., 2007) ส่วนประกอบอื่น ๆ ของ oleoresins โดยเฉพาะอย่างยิ่งβ-caryophyllene, แสดงคุณสมบัติทางเคมีเหมือนกันในระดับที่มีนัยสำคัญ (ช้าง et al., 2013 และ Siani et al., 2013). สำหรับ GVP, อัตราผลตอบแทนที่ลดลงของสารพิษควันเป็นหน้าที่ของ นอกจาก eugenol มาพร้อมกับการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (ถึง -40% ถึง -50%) ในหลอดทดลองความเป็นพิษ แต่ด้วยข้อยกเว้นของ acrolein, องค์ประกอบ GVP วัดในควันมีส่วนร่วมเพียงในระดับรองลงมาจะเป็นพิษเป็นวัดในการทดสอบ NRU (เทเวศร์ et al., 2003) เทเวศร์และคณะ พิจารณา acrolein มีส่วนร่วมของ 42% สำหรับพิษ GVP ของมหาวิทยาลัยเคนตั๊กกี้มาตรฐานบุหรี่อ้างอิง 1R4F ในห้องปฏิบัติการของเราในระยะยาวค่า EC50 สำหรับ acrolein เป็น 0.0308 ไมโครโมล / ml หรือ 1.73 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ค่า EC50 สำหรับ GVP ของบุหรี่ควบคุม (US-0) เปิดออกมาเป็น 0.202 มิลลิกรัม TPM / ml และ acrolein ผลผลิต 5.41 ไมโครกรัม / มิลลิกรัม TPM คือ 1.09 ไมโครกรัม / 0.202 มิลลิกรัม TPM ดังนั้นสมมติว่าความสัมพันธ์เชิงเส้นเพียงและการมีปฏิสัมพันธ์ขององค์ประกอบควันไม่มีส่วนร่วมของ acrolein จะเป็นพิษต่อเซลล์ GVP เป็น 63% ((1.09 × 100) /1.73) เมื่อเทียบกับบุหรี่ควบคุมบุหรี่ที่มีการรวมตัวกันของ eugenol 10% แสดงให้เห็นว่า 40% ของผลผลิต acrolein ลดลงต่อมิลลิกรัม TPM และการลดลงของความเป็นพิษ 37% การแสดงการคำนวณง่ายเช่นเดียวกับข้างต้นมีส่วนร่วมของ acrolein จะเป็นพิษเป็นจริงเหมือนกันคือ 61% แต่ใครจะคาดหวังว่าการลดลงของความเป็นพิษเนื่องจาก acrolein ลดลง 40 × 61/100 = 24% เห็นได้ชัดว่าการลดลงของ acrolein ไม่ได้อธิบายผลที่สมบูรณ์ การวิเคราะห์ของ eugenol ใน GVP ไม่ให้สัญญาณที่ตรวจพบสารใด ๆ โดย GC / MS (Polzin et al., 2007) ดังนั้นจึงดูเหมือนว่าไม่น่าที่ eugenol บริสุทธิ์ที่มีสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์รุนแรง-ไล่ตนเป็นผู้รับผิดชอบต่อผลกระทบนี้ ผลิตภัณฑ์ของไพโรไลซิ eugenol นี้ยังไม่น่าจะเป็นสาเหตุของการเกิดผลกระทบที่เป็น eugenol เนื่องจากความผันผวนของมันควรจะโอนเกือบสมบูรณ์โดยไม่ต้องสลายตัวไปยัง MS คล้ายกับสารอื่น ๆ ที่มีลักษณะทางกายภาพและทางเคมีที่คล้ายกัน (เบเกอร์และบิชอป, 2004) มันยังคงเป็นไปได้ว่าอาจมีการเปลี่ยนแปลง eugenol ลักษณะการเผาไหม้ของบุหรี่ที่มีต่อการผลิตสารพิษควันน้อย. นอกเหนือจากกานพลูหรือส่วนประกอบกานพลูไม่ได้เปลี่ยนแปลงความเป็นพิษของ TPM ของควัน นอกจากนี้การใช้จ่ายของกลีบแสดงให้เห็นในการลดความเป็นพิษของ GVP การเติมเต็มของกานพลูที่ใช้กับ eugenol หรือ oleoresins สมบูรณ์ไม่เพิ่มดังต่อไปนี้ นอกเหนือจากกลีบแสดงให้เห็นว่าไม่มีการเปลี่ยนแปลงลดลงสูงสุด มีแนวโน้มในการเพิ่มการลดลงขององค์ประกอบในการสั่งซื้อบุหรี่ที่กล่าวถึงข้างต้นคือ ลดความเป็นพิษ GVP ความสัมพันธ์กับเนื้อหา eugenol ในการผสมผสาน ในฐานะที่เป็นซีรีส์ด้วยนอกเหนือจาก eugenol บริสุทธิ์ (ดูด้านบน) ผลกระทบและการเปลี่ยนแปลงในลักษณะการเผาไหม้กับการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นในระดับสารพิษควันอาจจะมีคำอธิบายที่เหมาะสม. 4.3 ในหลอดทดลองฤทธิ์ก่อกลายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียEugenol ไม่ได้ต่อการกลายพันธุ์ในการทดสอบเอมส์ได้รับการยืนยันในห้องปฏิบัติการหลายคน (Azizan และ Blevins, 1995, Dorange et al., 1977, Sekizawa และ Shibamoto, 1982, Stea et al., 1994 และเพื่อ et al., 1982 ) ดังนั้นการเพิ่มขึ้นของการกลายพันธุ์อาเมเนื่องจากการมีส่วนร่วมจาก eugenol เปลี่ยนแปลงโอนมาจากบรรจุบุหรี่เป็น TPM ควันไม่ได้คาดว่า ในทางตรงกันข้ามเมื่อพิจารณาจากการลดลงของขนาดใหญ่ (ถึง 50%) ในการกลายพันธุ์เนื่องจากการเพิ่มขึ้นของ eugenol ยาสูบผลกระทบเจือจางบริสุทธิ์สามารถยกเว้นเช่นกัน eugenol อาจบัญชีเท่านั้นได้ถึงหนึ่งในสามของมวล TPM . มันอาจจะมีการคาดการณ์ว่าการรวมกันของการก่อตัวที่ลดลงของสารพิษจากการเผาไหม้และสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์รุนแรง-ไล่ของ eugenol เป็นผู้รับผิดชอบต่อผลกระทบนี้ ที่จริง eugenol เป็นสารบริสุทธิ์ได้รับการรายงานในการยับยั้งการเหนี่ยวนำให้เกิดอาเมส TPM-ก่อกลายพันธุ์ แต่ปริมาณที่จำเป็นสำหรับการลดลงนี้แสดงให้เห็นการมีส่วนร่วมเล็กน้อยเพื่อลดการมองเห็นในการศึกษาของเรา (Sukumaran และ Kuttan, 1995). นอกจากนี้การใช้จ่ายของกลีบแสดงให้เห็นว่าการลดลงของการกลายพันธุ์ของ TPM การเติมเต็มของกานพลูที่ใช้กับ eugenol หรือ oleoresins สมบูรณ์ไม่เพิ่มดังต่อไปนี้ นอกเหนือจากกลีบเต็มรูปแบบขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ทดสอบเพิ่มเติมที่เพิ่มขึ้นมีผลหรือไม่ได้นำไปสู่การลดลงต่อไปเมื่อเทียบกับการใช้จ่ายกลีบ ลดการก่อกลายพันธุ์สัมพันธ์ค่อนข้างดีที่มีเนื้อหา eugenol ในการผสมผสาน เช่นในกรณีของการสูบบุหรี่ด้วยนอกเหนือจาก eugenol บริสุทธิ์, การรวมกันของการลดสัดส่วน,

Results (Thai) 3:

4 . การอภิปราย
4.1 . สูบเคมี

การสำหรับขึ้น นอกจากนี้ระดับ 10 % คือ 71 มิลลิกรัม / มวนบุหรี่ สำหรับการผสมอเมริกันนำไปสู่การเพิ่มขึ้นใน TPM ถึง 30% คือ 3.0 มก. TPM / บุหรี่ สำหรับพบจริงเฉพาะในเฟสของอนุภาค MS ( polzin et al . , 2007 ) และมีอัตราการถ่ายโอนสูงเข้าไปในกลุ่มควันสำหรับในการผสมผสานและ MS ของบุหรี่เหล่านี้มีผลในการถ่ายโอนอัตราประมาณ 12% เช่น ถึง 4.6 มิลลิกรัม สำหรับบุหรี่ / ( แม้เมื่อวัดหลายเดือน หลังจากจบการศึกษา ) รูปนี้เป็นเกือบเดียวกันที่ได้จากการทดลองบุหรี่อื่น ๆที่แสดงการโอนประมาณ 12% ของยูจีนอลจากกานพลู กานพลู หรือส่วนประกอบที่เป็นคุณเช่น เพิ่มใน TPM นี้สามารถอธิบายได้อย่างสมบูรณ์โดยเจือจางผลที่เกิดจากการโอน สำหรับในคุณเมื่อแทน 71 มิลลิกรัมของยาสูบโดยยูจีนอล 642 มก. / มวนยาสูบ , ซ้าย สมมติว่าอัตราการแปลงของ 1.3% ยาสูบใน TPM , 8.3 มก. TPM / บุหรี่จากยาสูบจะคาดหวัง พร้อมกับปริมาณยูจีนอลใน TPM ( บุหรี่ 4.6 มิลลิกรัม )นี้ผลรวมถึงคาดว่า 12.9 มิลลิกรัม TPM / บุหรี่ ซึ่งสอดคล้องกับ 12.3 มก. TPM / บุหรี่มุ่งมั่น การวิเคราะห์ปริมาณสารพิษควันบนพื้นฐานต่อ TPM มิลลิกรัม สถานการณ์มีความชัดเจนน้อยลง ลดจำนวนลงประมาณ 60% สำหรับ n-nitrosodimethylamine แต่บางสารพิษเช่นกรดไฮโดรไซยานิกแค่ลดลง 5% ควันบุหรี่ที่บัญชีสำหรับ 2 / 3 ของ TPM TPM .ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงบางอย่างในการเขียนลักษณะต้องสรุปได้ . แต่ผลของนิโคตินต่อการสูบบุหรี่ไม่ได้รับผลกระทบแม้ว่าถึง 10% ของยาสูบที่ถูกแทนที่โดยสำหรับ . นี้แสดงให้เห็นว่ากลไกที่ต้องมีการสอบสวนเพิ่มเติม

เพิ่มประมาณ 30 % SC คือ กลีบที่โอลีโอเรซินถูกสกัด ,มีผลในการเพิ่มผลผลิตของเบนซิน โพลีฟีนอล และไฮโดรคาร์บอนร้อยละเดียวกันบนพื้นฐานต่อบุหรี่ การเติมของ SC ด้วย สำหรับหรือกับ - สมบูรณ์ไม่ได้เปลี่ยน เพิ่มผลผลิต นี้อาจจะเห็นเป็นในความขัดแย้งกับการลดลงของสังเกตสำหรับบุหรี่ที่แค่สำหรับถูกรวม อย่างไรก็ตามระดับนอกจากนี้สำหรับบริสุทธิ์ 5% ในยาสูบที่ลดไม่ได้ชัดเจนมาก อย่างไรก็ตาม พวกเขามีเอกลักษณ์ที่ชัดเจนในระดับการเพิ่ม 10% สำหรับในยาสูบ วัน สำหรับเนื้อหาในบุหรี่ที่ SC ถูกเติมด้วยยูจีนอลหรือ Oleoresin สมบูรณ์หรือที่เต็มกลีบใช้น้อยกว่า 4% ;มีความเข้มข้นที่แตกต่างกัน สำหรับผลของยูจีนอลจะไม่คาดหวัง ด้าน TPM ผลผลิตเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญถึง 35 % ในการสั่งซื้อ SC , SC บวก eugenol , SC บวก - และเต็มกลีบ นี้มาพร้อมกับความเข้มข้นลดลงในบางกรณี TPM เพื่อระดับพบว่าไม่มียาสูบกานพลูส่วนประกอบสำหรับคนอื่น ๆควันระดับพิษลดลงได้ชัดเจนมากขึ้น เช่น ลด 30% −เพื่อ aldehydes และ 17.9% ) . เพิ่มขึ้นแน่นอนใน TPM เนื่องจากการเพิ่มของไม่เปลี่ยนแปลงกลีบ 8 มิลลิกรัม / มวน ที่ในคิดสำหรับ TPM 5 มิลลิกรัม / มวน เห็นได้ชัดว่า ค่าความเข้มข้นของสารพิษใน TPM ไม่เต็มที่สามารถอธิบายได้โดยง่าย โดยสำหรับเจือจาง ,ซึ่งจะส่งผลในการลดลงของ− 20 % การเผาไหม้ของวัสดุอินทรีย์ผลเสมอในการผลิตสารพิษ ( sallsten et al . , 2006 ) เช่น การเผาไหม้ของกลีบก็ควรจะสร้างบางอัลดีไฮด์ . กล่าวโดยสรุปการลดพิษของ MS ที่เป็นผลจากการเจือจางโดยยูจีนอลและการเปลี่ยนแปลงบางอย่างในการเขียนลักษณะและ / หรือปฏิกิริยาของการเผาไหม้ผลิตภัณฑ์ของกานพลูกับยาสูบส่วนประกอบควัน

บนพื้นฐานต่อ TPM มิลลิกรัมการเปรียบเทียบของอเมริกันผสมบุหรี่กานพลู 2r4f โดยไม่อ้างอิงกับอเมริกันผสมบุหรี่กานพลูกับไม่เปลี่ยนแปลงแสดงลดลงเดียวกันในควันพิษความเข้มข้นตามที่เห็นในบุหรี่กับอินโดนีเซียยาสูบ เห็นได้ชัดว่าทางเลือกของการผสมยาสูบเป็นผู้เยาว์ความสำคัญเมื่อศึกษาผลของส่วนผสมของใบยาสูบนี้จะสอดคล้องกับวรรณกรรม ผู้เขียนหลายเรียนเพิ่มส่วนผสมเดียวกันในการควบคุมบุหรี่ที่ทำจากการผสมแตกต่างกันมีข้อสรุปแบบเดียวกัน ( Baker et al . 2004 เรน et al . , 2006 และ rustemeier et al . , 2002 ) .
4.2 . การเพาะเลี้ยงเซลล์มะเร็ง

สำหรับ TPM ,เซลล์อาจจะพบประมาณ 200 มิลลิกรัม / ลิตร สำหรับ 2r4f บุหรี่อ้างอิงบนพื้นฐานต่อ TPM มิลลิกรัม สำหรับความเข้มข้นของพิษในหลอดทดลองมีการรายงานเป็นรอบ 150 มก. / ล. อาหารเลี้ยงเชื้อ ( ชาง et al . , 2000 , โฮ et al . , 2006 และชนิตสเลอร์ et al . , 2008 ) 400 mg / l ( maralhas et al . , 2006 และ prashar et al . , 2006 ) เช่น