MATERIALS AND METHODSStudy Area: Th

MATERIALS AND METHODS
Study Area: This study was conducted in Facultry of marine science, Annmalai University, Parangipettai, Tamilnadu, India.Samples were collected from Vellar Estury in Tamil Nadu, India. The river Vellar flowing on the southeast coast of India originates in the Shervaryan Hills of Salem District,Tamilnadu,India. After meandering through a distance of 480 kms, it forms the estuarine system at Parangipettai, before it joints the Bay of Bengal. The Vellar estuary is always open with the Bay of Bengal and it said to be a “true estuary” as there is no complete closure of the mouth.
Isolation of Strain: Soil sample were collected from Vellar Estury in Tamil Nadu, India.samples were serially diluted and inoculated in to a Potato Dextrose agar plate (Hi-media) and incubated for 5 days at 37°C.
Strain Improvement by U-V: Aspergillus niger strains were exposed to u-v light for 2hr,4hr,6hr,8hr. They were analyzed for the production of citric acid. They named as A1,A2,A3,A4 respectively. Unexposed wild strain was named as A.
Citric Acid Production Medium: Strains were screened for citric acid production in liquid culture which contained sucrose (g/l) 120g,NaNO3 -5g, KH2PO4 - 2g, MgSO4.7H2O -1g, CuSO4.7H2O-0.02g,FeSO4.7H2O - 1g, ZnSO4.7H2O-1g, 50% Seawater-1000ml. The pH of medium was adjusted to 6.5 [25].
Selection of Strain: A,A1,A2,A3,A4 Strains were inoculated in a production broth and incubated at 37°c for 5 days then analyzed for the citric acid production.
Citric Acid Determination: Citric acid (CA) was determined titrimetrically [26] by using 0.1 N NaOH and phenolphthalin as indicator and calculated as % according to the following formula:
%CA = Normality ×volume of NaOH ×Equiv. wt. of CA/ Weight of sample × 10
Effect of Cabon Source: Production medium with the following composition was used with different carbon sources such as 1%, sucrose, fructose, glucose, dextrose, lactose. NANO3 -5g,KH2PO4 - 0.2g, MgSO4.7H2O -0.1g, CuSO4.7H2O -0.02g,FeSO4.7H2O - 0.1g, ZnSO4.7H2O-0.1g, at pH-6.5,50% Seawater- 100 ml of broth was prepared in a Erlenmeyer shaker flask(250ml)and inoculated 1ml of A2 spore suspension.Flask was incubated in a roatery shaker at 150 rpm for 5 days at 37°C.
Effect of Nitrogen Source: Medium with different nitrogen sources such as 2 g of ammonium nitrate, peptone, yeast extract, used as nitrogen source with production media at pH-6.5 100 ml was taken in a Erlenmyer shaker flask(250ml)and inoculated 1ml of A2 spore suspension.flask was incubated in a roatery shaker at 150 rpm for 5 days at 37°c.
Effect of Ph: Production medium with different pH- 4,5,6,7,8,9 was used. About100 ml of production media was taken in a Erlenmyer shaker flask (250ml) and inoculated 1ml of strain A2 spore suspension.Flasks were incubated in a roatery shaker at 150 rpm for 5 days at 37°C.

Results (Thai) 1:

วัสดุและวิธีการ
พื้นที่การศึกษา: การศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการใน facultry ของวิทยาศาสตร์ทางทะเลมหาวิทยาลัย annmalai, Parangipettai, Tamilnadu, india.samples ถูกเก็บรวบรวมจาก estury vellar ในทมิฬนาฑู, อินเดีย vellar แม่น้ำที่ไหลอยู่บนชายฝั่งตะวันออกเฉียงใต้ของอินเดียมาในภูเขาของอำเภอ shervaryan salem, ทมิฬนาฑู, อินเดีย หลังจากที่คดเคี้ยวผ่านระยะทาง 480 กิโลเมตร,มันเป็นระบบน้ำเค็มที่ Parangipettai ก่อนที่มันจะข้อต่อของอ่าวเบงกอล ปากน้ำ vellar อยู่เสมอเปิดกับอ่าวเบงกอลและก็กล่าวว่าจะเป็น "ปากน้ำจริง" ในขณะที่ไม่มีการปิดที่สมบูรณ์ของปาก
แยกสายพันธุ์. ตัวอย่างดินที่เก็บได้จาก estury vellar ในทมิฬนาฑู, อินเดียตัวอย่างที่ถูกปรับลดลำดับและเชื้อในจานเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่ง (hi-สื่อ) และบ่มเป็นเวลา 5 วันที่ 37 ° c
การปรับปรุงสายพันธุ์โดยยูวี. สายพันธุ์ไนเจอร์ Aspergillus ถูกสัมผัสกับแสงยูวีเพื่อ 2 ชม. , 4hr, 6hr, 8HR . พวกเขาถูกนำมาวิเคราะห์สำหรับการผลิตกรดซิตริก พวกเขาตั้งชื่อเป็น a1, a2, A3, A4 ตามลำดับ ยังไม่ได้ถ่ายสายพันธุ์ป่าถูกเสนอชื่อเป็น
มะนาวกลางการผลิตกรด.สายพันธุ์ที่ถูกคัดเลือกสำหรับการผลิตกรดซิตริกในวัฒนธรรมของของเหลวที่มีน้ำตาลซูโครส (g / l) 120, Nano3-5g, kh2po4 - 2g, mgso4.7h2o-1g, cuso4.7h2o-0.02g, feso4.7h2o - 1g, znso4.7h2o -1g 50% น้ำทะเล 1000ml ph ของกลางมีการปรับ 6.5 [25]
การเลือกสายพันธุ์., a1, A2, A3,a4 สายพันธุ์ได้รับเชื้อในน้ำซุปการผลิตและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วันแล้วสำหรับการวิเคราะห์การผลิตกรดซิตริก
ซิตริกกำหนดกรด. กรดซิตริก (แคลิฟอร์เนีย) ถูกกำหนด titrimetrically [26] โดยใช้ 0.1 n NaOH และ phenolphthalin เป็นตัวบ่งชี้ และคำนวณเป็น% ตามสูตรต่อไปนี้
% แคลิฟอร์เนีย = ปกติ×ปริมาณของ NaOH เทียบเท่า× น.น. แคลิฟอร์เนีย / น้ำหนักของตัวอย่าง× 10ผลกระทบของแหล่ง cabon: กลางการผลิตที่มีองค์ประกอบดังต่อไปนี้ถูกนำมาใช้กับแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกันเช่น 1%, น้ำตาลฟรุกโตสกลูโคสเดกซ์โทรส, แลคโตส Nano3-5g, kh2po4 - 0.2g, mgso4.7h2o-0.1g, cuso4.7h2o-0.02g, feso4.7h2o - 0.1g, znso4.7h2o-0.1g ที่ ph-6.5, 50% น้ำทะเล-100 มล. ของน้ำซุป ถูกจัดทำขึ้นในขวด erlenmeyer ปั่น (250ml) และ 1ml เชื้อของระบบกันสะเทือน a2 สปอร์ขวดได้รับการบ่มในเครื่องปั่น roatery ที่ 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 วันที่ 37 ° c
ผลกระทบของแหล่งไนโตรเจน. กลางที่มีแหล่งไนโตรเจนที่แตกต่างกันเช่น 2 กรัมแอมโมเนียมไนเตรต, เปปโตนสารสกัดจากยีสต์ใช้เป็นแหล่งไนโตรเจนกับสื่อที่ผลิต ph-6.5 100 ml ถูกนำมาในขวด erlenmyer ปั่น (250ml) และ 1ml เชื้อของระบบกันสะเทือน a2 สปอร์ขวดได้รับการบ่มในเครื่องปั่น roatery ที่ 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 วันที่ 37 ° c
ผลของพีเอช. กลางการผลิตที่แตกต่างกัน ph-4,5,6,7,8,9 ถูกนำมาใช้ about100 มล. ของสื่อถูกนำมาผลิตในขวด erlenmyer ปั่น (250ml) และ 1ml เชื้อของสายพันธุ์ a2 suspension.flasks สปอร์ถูกบ่มในเครื่องปั่น roatery ที่ 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 วันที่ 37 องศาเซลเซียส

Results (Thai) 2:

วิธีการและวัสดุ
พื้นที่ศึกษา: การศึกษานี้ได้ดำเนินการใน Facultry ของวิทยาศาสตร์ทางทะเล มหาวิทยาลัย Annmalai, Parangipettai, Tamilnadu, India.Samples ถูกเก็บรวบรวมจาก Estury Vellar ในภาษาทมิฬ Nadu อินเดีย แม่น้ำ Vellar ไหลบนชายฝั่งตะวันออกเฉียงใต้ของอินเดียมีต้นกำเนิดในภูเขา Shervaryan ของ Salem, Tamilnadu อินเดีย หลังจากผ่านระยะทาง 480 กิโลเมตร meandering จากรูปแบบระบบขีดที่ Parangipettai ก่อนมัน joints อ่าวเบงกอล ห้อง Vellar จะเปิดกับอ่าวเบงกอล และได้กล่าวว่า เป็น "ห้องจริง" มีการปิดไม่สมบูรณ์ของปาก
แยกต้องใช้: ตัวอย่างดินที่เก็บจาก Estury Vellar ในภาษาทมิฬ Nadu อินเดียตัวอย่าง serially ผสม และ inoculated ในการจานมันฝรั่งขึ้น agar (Hi-สื่อ) และ incubated 5 วันที่ 37 ° C.
ต้องใช้การปรับปรุง โดยสายพันธุ์ Aspergillus U-v คัมภีร์:ไนเจอร์ได้สัมผัสแสงคุณ v 2 ชั่วโมง 4 ชั่วโมง 6 ชั่วโมง 8 ชั่วโมง พวกเขาได้วิเคราะห์สำหรับการผลิตของกรดซิตริก พวกเขาตั้งชื่อเป็น A1, A2, A3, A4 ตามลำดับ ต้องใช้ป่า unexposed ถูกตั้งชื่อเป็น A.
สื่อผลิตกรดซิตริก: สายพันธุ์ที่ฉายสำหรับผลิตกรดซิตริกในวัฒนธรรมของเหลวที่ประกอบด้วยซูโครส (g/l) 120g, NaNO3-5 g, KH2PO4 - 2 g, MgSO4.7H2O-1 g, CuSO4.7H2O-0.02 g, FeSO4.7H2O - 1 g, ZnSO4.7H2O - 1 g, 50% น้ำทะเล - 1000 ml มีปรับ pH ของตัวกลาง 6.5 [25] .
เลือกต้องใช้: A, A1, A2, A3สายพันธุ์ A4 ถูก inoculated ในซุปผลิต และ incubated 5 วันที่ 37° c แล้ววิเคราะห์การผลิตกรดซิตริก
กำหนดกรดซิตริก: กรดซิตริก (CA) ได้กำหนด titrimetrically [26] โดยใช้ 0.1 N NaOH และ phenolphthalin เป็นตัวบ่งชี้ และคำนวณเป็น%ตามสูตรต่อไปนี้:
% CA = Normality ×ปริมาตรของ NaOH การเทียบเท่าปริมาณของ CA / น้ำหนักของตัวอย่าง× 10
ผลของ Cabon แหล่ง: ผลิตสื่อกับองค์ประกอบต่อไปนี้ใช้กับแหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกันเช่น 1% ซูโครส ฟรักโทส กลูโคส ขึ้น แล็กโทส NANO3-5 g, KH2PO4 - 0.2 g, MgSO4.7H2O-0.1 g, CuSO4.7H2O - 0.02 g, FeSO4.7H2O - 0.1 g, ZnSO4.7H2O-0.1 g ที่ pH-6.5,50% ทะเล - 100 ml ของซุปเตรียมไว้ในการ Erlenmeyer เชคเกอร์ flask(250ml) และ inoculated 1 ml ของ A2 สปอร์ระงับหนาวถูก incubated ใน roatery เชคเกอร์ 150 รอบต่อนาทีที่ 5 วันที่ 37 ° C.
ผลแหล่งไนโตรเจน: แหล่งกลางกับไนโตรเจนแตกต่างกันเช่น 2 กรัมแอมโมเนีย peptone สารสกัด จากยีสต์ ใช้เป็นแหล่งไนโตรเจนกับผลิตสื่อที่ pH 6.5 ml 100 ถ่าย flask(250ml) เชคเกอร์เป็น Erlenmyer และ inoculated 1 ml ของ A2 สปอร์ระงับหนาวถูก incubated ใน roatery เชคเกอร์ 150 รอบต่อนาทีที่ 5 วันที่ 37 องศาเซลเซียส
ผล Ph: ใช้ผลิตสื่อกับ 4,5,6,7,8,9 ค่า pH แตกต่างกัน Ml About100 ผลิตสื่อถ่ายหนาว Erlenmyer เชคเกอร์ (250 มล.) และ inoculated 1ml ของต้องใช้ระงับสปอร์ A2น้ำถูก incubated ใน roatery เชคเกอร์ 150 รอบต่อนาทีที่ 5 วันที่ 37 องศาเซลเซียส

Results (Thai) 3:

วัสดุวิธีการพื้นที่
ซึ่งจะช่วยการศึกษาและการศึกษานี้ได้รับการศึกษาใน facultry ของวิทยาศาสตร์ทางทะเล annmalai มหาวิทยาลัย parangipettai , Karnataka ,อินเดีย.ตัวอย่างได้จากการเก็บข้อมูลจาก vellar estury ในทมิฬนาฑูประเทศอินเดีย vellar แม่น้ำที่ไหลผ่านบนชายฝั่งด้านทิศตะวันออกเฉียงใต้ของประเทศอินเดียเริ่มต้นใน shervaryan เนินเขาของเซเลมเขต, Karnataka ,อินเดีย หลังจากที่คดเคี้ยวผ่านระยะทางถึง 480 กิโลเมตรเป็นระบบแบบกดคังที่ parangipettai ก่อนที่จะข้อ Bay ของเบงกอลตะวันตก อ่าว vellar ที่เปิดอยู่เสมอพร้อมด้วยอ่าวเบงกอลตะวันตกและของที่ว่าเป็น"ปากอ่าวเป็นจริง"เนื่องจากไม่มีการปิดทั้งหมดของปาก.
แยกการดึงตัวอย่างดินจะถูกรวบรวมจาก vellar estury ในทมิฬนาฑูประเทศอินเดียตัวอย่างเป็นแบบอนุกรมเจือจางและ inoculated ในมันฝรั่งน้ำตาลเดคซ - ทโรซสาหร่ายแผ่น( Hi - สื่อ)และ incubated สำหรับ 5 วันนับแต่วันที่ 37 ° C
ความเมื่อยล้าจากการปรับปรุง u - V : aspergillus ไนเจอร์พันธุ์ได้รับ u - v เบาๆสำหรับ 2 hr, 4 hr, 6 hr, 8 / HR . ก็วิเคราะห์สำหรับการผลิตกรดมะนาว เขาเป็นที่ 1 ที่ 2 ที่ 3 ที่ 4 ตามลำดับ ดึงป่ายังไม่เปิดได้รับการขนานนามว่าเป็นกรดการผลิตขนาดกลาง
มะนาวความตึงเครียดได้คัดสรรสำหรับการผลิตกรดมะนาวในของเหลววัฒนธรรมที่มีอยู่ซูโครส( G / L ) 120 กรัม, iPod nano 3 - 5 G , KH 2 PO 4 - 2 G , mgso 4.7 H 2 O - 1 G , cuso 4.7 H 2 O -0.02 G , feso 4.7 H 2 O - 1 G , znso 4.7 H 2 O - 1 G , 50% ทะเล - 1000 มล. pH ที่มีขนาดกลางมีการปรับเป็น 6.5 [ 25 ].
ทางเลือกของสายพันธุ์หนึ่งที่ 1 ที่ 2 ที่ 3ที่ 4 พันธุ์คือ inoculated ในการผลิตน้ำซุปและ incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 5 วันจากนั้นจึงทำการวิเคราะห์เพื่อการผลิตกรดมะนาว.
มะนาวน้ำกรดการกำหนด:มะนาวกรด( CA )ก็ถูกกำหนด titrimetrically [ 26 ]โดยใช้ 0.1 n โซดาไฟและ phenolphthalin เป็นสัญลักษณ์และคำนวณเป็น%ตามสูตรต่อไปนี้::
:ไม่=ปกติเครื่องหมาย×ระดับเสียงของโซดาไฟเครื่องหมาย×เทียบเท่า.น้ำหนักของ CA /น้ำหนักของตัวอย่าง× 10
มีผลบังคับใช้ cabon แหล่งที่มาของการผลิตขนาดกลางพร้อมด้วยการเขียนต่อไปนี้ถูกใช้กับแหล่งคาร์บอนแตกต่างกันไปเช่น 1% ซูโครสกลูโคสน้ำตาลเดคซ - ทโรซน้ำตาลฟรัค - โทซแลคโตส. รางวัล iPod nano ขนาด 3 - 5 G , KH 2 PO 4 - 0.2 G , mgso 4.7 H 2 O -0.1 G , cuso 4.7 H 2 O -0.02 G , feso 4.7 H 2 O - 0.1 G , znso 4.7 H 2 O -0.1 G , pH - 6.5 , 50% ทะเล - 100 มล.ของน้ำซุปก็เตรียมไว้ในเครื่องเขย่าที่ erlenmeyer กระติกน้ำ( 250 มล.)และ inoculated 1 มล.ที่ 2 สปอร์ระบบกันสะเทือน.ภาชนะ เก็บน้ำเป็น incubated ใน roatery เครื่องเขย่าที่ 150 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 วันนับแต่วันที่ 37 ° C
ผลของไนโตรเจนที่มา:ขนาดกลางมีความแตกต่างกันแหล่งไนโตรเจนเช่น 2 G ของ its ammonium ดินประสิว,เนื้อยุ่ยเมื่อถูกเพพซิน,ยีสต์สกัด,ใช้เป็นธาตุไนโตรเจนที่มีการผลิตสื่อที่ pH -6.5 100 มล.ได้ถูกนำตัวไปที่เครื่องเขย่า erlenmyer กระติกน้ำ( 250 มล.)และ inoculated 1 มล.ของที่ 2 สปอร์ระบบกันสะเทือนแบบ.ภาชนะ เก็บน้ำเป็น incubated ในเครื่องเขย่า roatery ที่ 150 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 วันนับแต่วันที่ 37 ° C
ผลของค่า pH ขนาดกลางมีความแตกต่างกันการผลิต pH - 4,5,6,7,8,9 ถูกใช้ เกี่ยวกับ 100 มล.ของการผลิตสื่อได้ถูกนำตัวไปที่เครื่องเขย่า erlenmyer กระติกน้ำ( 250 มล.)และ inoculated 1 มล.ของความเมื่อยล้าที่ 2 สปอร์แขวน.ใบลูกปืนหลายคน incubated ใน roatery เครื่องเขย่าที่ 150 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 วันนับแต่วันที่ 37 ° C