In this study we established the im

In this study we established the importance of myristoylation in C. elegans and also in a parasitic nematode responsible for lymphatic filariasis. Our finding of highly conserved NMT sequences in the genomes of many nematode species suggests that myristoylation is likely required for the synthesis of functional nematode proteins. Comparative sequence and structural analyses between nematode and T. brucei NMT enzymes enabled us to consider a drug repurposing strategy using the prototypic TbNMT inhibitor, DDD85646, which has potent activity against T. brucei enzyme and cells in culture (nM range) [19], [23]. The compound is also active against T. cruzi, although ~10–20 -fold more compound is required for enzyme inhibition, and ~1000-fold more (µM range) to inhibit parasite growth [40]. The cause for the reduced potency against intact T. cruzi is not known but differences in the rate of plasma membrane turnover, cellular pharmacokinetics of drug uptake or efflux, or differences in other essential biological functions requiring N-myristoylation have been proposed [40]. DDD85646 and DDD100870 are potent inhibitors of the nematode enzymes (nM range), and possess activity against larval stages and adult worms of B. malayi (µM range). Interestingly, despite comparable IC50 values for both compounds in C. elegans NMT enzyme assays, only compound DDD100870 showed micromolar activity against intact C. elegans. The need for substantially more compound to detect activity against the nematode has also been reported in other enzyme-based screening campaigns for new filarial leads [41]–[43]. It is thought that the outermost layer of the cuticle is the main barrier to penetration of drugs, stains, and other chemicals [44], [45]. Further studies are needed to determine the physicochemical factors that favor the absorption of compounds in nematodes. This knowledge would facilitate confirming the linkage between enzyme inhibition and organism activity, and greatly expedite the discovery and optimization of anthelmintic leads.

We also pursued a genetic approach to assess the requirement of the enzyme in C. elegans. Knockdown of endogenous activity using RNAi resulted in severe growth defects and larval arrest, and gene deletion caused maternal effect lethality with no viable worms present in the F2 population. The importance of the gene in B. malayi can be inferred from our RNAi analysis since there is good concordance between the phenotypes resulting from RNAi knockdown of orthologous genes in parasitic nematodes and C. elegans [46]–[48].

Essential roles for NMT have also been genetically validated in other pathogens including pathogenic fungi Candida albicans [49] and Cryptococcus neoformans [50], and the kinetoplastid protozoan parasites L. major [51], [52], L. donovani [21], T. cruzi [40], and T. brucei [52]. Overexpression of NMT in T. brucei causes gross changes in parasite morphology, including the subcellular accumulation of lipids, leading to cell death [51]. In Drosophila, a null mutation of the single NMT gene causes disruption of the actin cytoskeleton and ectopic apoptosis in embryos, possibly attributed to loss of function of myristoylated tyrosine kinases [53].

Detailed studies performed in T. brucei indicate that inhibition of myristoylation of multiple substrates accounts for the effectiveness of NMT inhibitors in cell culture and in vivo [19]. While there remains incomplete knowledge of the targets of NMT in T. brucei and their subsequent downstream effects, trypanosomatids mainly use myristate for incorporation into glycol-phosphatidylinositol (GPI) anchors that tether the major surface glycoproteins and glycoconjugates to the external surface of the plasma membrane [54]. Recent bioinformatics analysis suggests there are in excess of 60 potential substrates in this organism [55]. Similar genome sequence analysis has identified 62 putative protein substrates for N-myristoylation in L. major [51], [56] and more than 40 substrates in P. falciparum [22]. Many of the malaria targets have been validated experimentally in a recent study [37].

In humans and other eukaryotes, including C. elegans, approximately 0.5–0.8% of all proteins in the genome are myristoylated [57]. The biological role of myristoylation in nematodes is poorly understood and the effect of NMT inhibition in these organisms is probably complex, likely involving the functionality of many proteins that are essential for viability. This is consistent with our genetic studies in C. elegans and the finding that the majority of the predicted substrates in C. elegans display multiple developmental defects and impaired survival in RNAi screens. We predicted potential substrates in B. malayi encompassing a range of functions, including SRC-1 which encodes a non-receptor tyrosine kinase involved in cell signaling pathways specifying cell fate and division in C. elegans [58], [59]. The majority of the substrates are present in the proteome of one or more developmental stages of B. malayi [60]. Collectively, these data provide evidence for the importance of NMT activity in nematodes and provide some insight into the many diverse pathways that are likely dependent on myristoylated proteins. For further development of NMT as a drug target it would be of great interest to identify these proteins and evaluate the impact of inhibition of NMT activity resulting from genetic or chemical knockdown of the enzyme.

Myristoylation is an unexplored area for drug discovery in nematodes. Our studies have shown for the first time that NMT is a potential drug target in filarial parasites. The discovery of a related family of lead molecules, originally identified as protozoan NMT inhibitors, with activity against microfilariae and adult worms is particularly exciting and highlights the potential value of a repurposing approach to new drug discovery for filarial parasites.

Results (Thai) 1:

ในการศึกษานี้ เรากำหนดความสำคัญของ myristoylation ใน C. elegans และ ในแบบเสียงฟู่เหมือนกาฝากนีมาโทดาชอบโรค ค้นหาของเราขอนำลำดับ NMT ใน genomes ของนีมาโทดาหลายชนิดแนะนำ myristoylation ที่อาจจำเป็นสำหรับการสังเคราะห์ของโปรตีนนีมาโทดาทำงาน ลำดับเปรียบเทียบและวิเคราะห์โครงสร้างระหว่างนีมาโทดาและต. brucei NMT เอนไซม์ช่วยให้เราสามารถพิจารณายาแม้กลยุทธ์ใช้ผล TbNMT prototypic, DDD85646 ซึ่งมีกิจกรรมที่มีศักยภาพจากต. brucei เอนไซม์และเซลล์ในวัฒนธรรม (ช่วง nM) [19], [23] บริเวณมีการใช้งานกับต. cruzi แม้ว่า ~ 10-20-พับผสมเพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็นในการยับยั้งเอนไซม์ และ ~ 1000-fold เพิ่มเติม (µM ช่วง) ยับยั้งการเจริญเติบโตของปรสิต [40] ไม่ทราบสาเหตุที่สมรรถภาพลดลงเทียบกับ cruzi ต.เหมือนเดิม แต่ความแตกต่างในอัตราการหมุนเวียนพลาสมาเมมเบรน โทรศัพท์มือถือเภสัชจลนศาสตร์ของยาดูดซับหรือ efflux หรือความแตกต่างของฟังก์ชันชีวภาพอื่น ๆ จำเป็นต้องใช้ N myristoylation ได้เสนอ [40] DDD85646 และ DDD100870 inhibitors มีศักยภาพของเอนไซม์นีมาโทดา (ช่วง nM), และมีกิจกรรมกับระยะ larval และผู้ใหญ่เวิร์มของเกิด malayi (µM ช่วง) เป็นเรื่องน่าสนใจ แม้ มีค่า IC50 เทียบสำหรับทั้งสาร C. elegans NMT เอนไซม์ assays เฉพาะผสม DDD100870 พบกิจกรรม micromolar กับ C. elegans เหมือนเดิม รายงานต้องการสารประกอบหลักฐานเพิ่มเติมเพื่อตรวจสอบกิจกรรมจากนีมาโทดาในแคมเปญสำหรับลูกค้าเป้าหมาย filarial ใหม่ [41] คัดกรองโดยใช้เอนไซม์อื่น ๆ ยัง – [43] มันเป็นความคิดที่ ชั้นนอกสุดของกำพร้าเป็นอุปสรรคหลักต่อการเจาะของยาเสพติด คราบ และเคมีภัณฑ์อื่น ๆ [44], [45] ศึกษาเพิ่มเติมจะต้องกำหนดปัจจัย physicochemical ที่ชอบดูดซึมสารประกอบใน nematodes ความรู้นี้จะช่วยยืนยันความเชื่อมโยงระหว่างกิจกรรมมีชีวิตและยับยั้งเอนไซม์ และเร็วมากการค้นพบ และนำไปสู่การเพิ่มประสิทธิภาพของ anthelminticนอกจากนี้เรายังติดตามวิธีพันธุกรรมในการประเมินความต้องการของเอนไซม์ใน C. elegans ผล knockdown ของ endogenous กิจกรรมใช้ RNAi ในข้อบกพร่องของการเจริญเติบโตอย่างรุนแรง และจับ larval และลบยีนเกิดผลแม่ lethality กับเวิร์มไม่ได้อยู่ในประชากร F2 ความสำคัญของยีนใน malayi เกิดสามารถสรุปจากการวิเคราะห์ RNAi ของเราเนื่องจากมีความสอดคล้องที่ดีระหว่างฟีเกิดจาก RNAi knockdown ของยีน orthologous ในเสียงฟู่เหมือนกาฝาก nematodes และ C. elegans [46] – [48]บทบาทสำคัญสำหรับ NMT ได้ยังรับแปลงพันธุกรรมการตรวจสอบในโรคอื่น ๆ รวมทั้งอุบัติการเชื้อรา Candida albicans [49] Cryptococcus neoformans [50], และปรสิต protozoan ของ kinetoplastid L. หลัก [51], [52], L. donovani [21], ต. cruzi [40], และต. brucei [52] Overexpression ของ NMT ในต. brucei ก่อให้เกิดเปลี่ยนแปลงรวมในสัณฐานวิทยาปรสิต รวมทั้งรวบรวม subcellular ของโครงการ การนำไปสู่การตายของเซลล์ [51] ในแมลง การกลายพันธุ์เป็น null ของยีน NMT เดียวทำให้ทรัพย cytoskeleton แอกตินและ apoptosis ectopic ในโคลน อาจเกิดจากการสูญเสียการทำงานของ myristoylated tyrosine kinases [53]ศึกษารายละเอียดในต. brucei ระบุว่า ยับยั้ง myristoylation ได้หลายบัญชีสำหรับประสิทธิภาพของ NMT inhibitors ในงานเพาะเลี้ยงเซลล์และในสัตว์ทดลอง [19] ในขณะที่ยังคงมีความรู้สมบูรณ์เป้าหมายของ NMT brucei ต.และผลปลายน้ำของพวกเขาตามมา trypanosomatids ใช้ myristate ส่วนใหญ่สำหรับการจดทะเบียนเป็นจุดยึดเอทิ-phosphatidylinositol (GPI) ที่โยงหลักผิว glycoproteins และ glycoconjugates พื้นผิวภายนอกของเมมเบรนพลาสม่า [54] ล่าสุด bioinformatics วิเคราะห์แนะนำมีเกินกว่า 60 พื้นผิวที่อาจเกิดขึ้นในสิ่งมีชีวิตนี้ [55] การวิเคราะห์คล้ายจีโนมมีระบุพื้นผิวโปรตีน putative 62 สำหรับ N-myristoylation ใน L. หลัก [51], [56] และพื้นผิวมากกว่า 40 ใน P. falciparum [22] เป้าหมายมาลาเรียจำนวนมากได้รับการตรวจสอบ experimentally ในการศึกษาล่าสุด [37]ในมนุษย์และอื่น ๆ eukaryotes รวม C. elegans ประมาณ 0.5 – 0.8% ของโปรตีนทั้งหมดในกลุ่มมี myristoylated [57] ไม่ดีคือเข้าใจบทบาทของ myristoylation ใน nematodes ชีวภาพ และผลของ NMT ยับยั้งในสิ่งมีชีวิตเหล่านี้จะซับซ้อนอาจ อาจจะเกี่ยวข้องกับการทำงานของโปรตีนต่าง ๆ ที่จำเป็นสำหรับชีวิต สอดคล้องกับการศึกษาพันธุกรรมของ C. elegans และค้นหาว่า ส่วนใหญ่ของพื้นผิวคาดการณ์ใน C. elegans แสดงหลายพัฒนาข้อบกพร่องและความอยู่รอดในหน้าจอ RNAi อยู่ เราคาดการณ์ได้อาจเกิดขึ้นในเกิด malayi ครอบคลุมช่วงของฟังก์ชัน รวม 1 นายซึ่งจแมป kinase tyrosine ไม่ใช่ตัวรับในเซลล์ตามปกติมนต์ระบุชะตากรรมเซลล์และฝ่ายใน C. elegans [58], [59] ส่วนใหญ่ของพื้นผิวมีอยู่ใน proteome ของ น้อยพัฒนาระยะของ malayi เกิด [60] โดยรวม ข้อมูลเหล่านี้แสดงหลักฐานความสำคัญของกิจกรรม NMT nematodes และให้เป็นมนต์หลากหลายมากมายที่น่าจะขึ้นอยู่กับโปรตีน myristoylated สำหรับการพัฒนาเพิ่มเติมของ NMT เป็นเป้าหมายของยา มันจะน่าสนใจมากเพื่อจำแนกโปรตีนเหล่านี้ และผลกระทบของกิจกรรม NMT เกิดจากพันธุกรรม หรือสารเคมี knockdown ของเอนไซม์ยับยั้งMyristoylation เป็นพื้นที่สำหรับการค้นพบยาเสพติดใน nematodes unexplored การศึกษาของเราได้แสดงเป็นครั้งแรกที่ NMT ในปรสิต filarial เป้าหมายยาเสพติดอาจเกิดขึ้น การค้นพบของครอบครัวที่เกี่ยวข้องของลูกค้าเป้าหมายโมเลกุล เดิมเป็น NMT protozoan inhibitors กับกิจกรรม microfilariae และหนอนผู้ใหญ่เป็นที่น่าตื่นเต้นอย่างยิ่ง และเน้นค่าศักยภาพของวิธี repurposing การค้นพบยาใหม่สำหรับ filarial ปรสิต

Results (Thai) 2:

ในการศึกษานี้เราสร้างความสำคัญของการ myristoylation ใน elegans ซีและยังอยู่ในไส้เดือนฝอยพยาธิรับผิดชอบในการโรคเท้าช้าง การค้นพบของเราในการอนุรักษ์สูง NMT ลำดับในจีโนมของสายพันธุ์ไส้เดือนฝอยจำนวนมากแสดงให้เห็นว่า myristoylation จะต้องมีโอกาสสำหรับการสังเคราะห์โปรตีนไส้เดือนฝอยทำงาน ลำดับเปรียบเทียบและการวิเคราะห์โครงสร้างระหว่างไส้เดือนฝอยและเอนไซม์ T. brucei NMT ช่วยให้เราที่จะต้องพิจารณากลยุทธ์การใช้ยาเสพติดประสงค์ยับยั้งต้นแบบ TbNMT, DDD85646 ซึ่งมีกิจกรรมที่มีศักยภาพกับ T. brucei เอนไซม์และเซลล์ในวัฒนธรรม (ช่วงนาโนเมตร) [19] [23] สารนี้ยังมีการใช้งานกับ cruzi ตันแม้ว่า ~ 10-20 เท่าสารมากขึ้นเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการยับยั้งเอนไซม์และ ~ 1,000 เท่าเพิ่มเติม (ช่วงไมครอน) เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของปรสิต [40] ทำให้เกิดการลดแรงต่อต้าน cruzi ตันเหมือนเดิมไม่เป็นที่รู้จัก แต่ความแตกต่างในอัตราการหมุนเวียนของเมมเบรนพลาสม่า, ยาเซลล์ของการดูดซึมยาเสพติดหรือไหลหรือความแตกต่างในการทำงานทางชีวภาพอื่น ๆ ที่จำเป็นต้องใช้ N-myristoylation ได้รับการเสนอ [40] DDD85646 และ DDD100870 มีสารยับยั้งเอนไซม์ที่มีศักยภาพของไส้เดือนฝอย (ช่วงนาโนเมตร) และมีกิจกรรมกับขั้นตอนตัวอ่อนและตัวเต็มวัยของ B. malayi (ช่วงไมครอน) ที่น่าสนใจแม้จะมีค่า IC50 เปรียบสำหรับสารประกอบทั้งใน C. elegans ตรวจเอนไซม์ NMT เพียงสารประกอบ DDD100870 แสดงให้เห็นว่ากิจกรรม micromolar กับ C. elegans เหมือนเดิม ความจำเป็นในการผสมมากขึ้นในการตรวจสอบกิจกรรมกับไส้เดือนฝอยยังได้รับรายงานการตรวจคัดกรองในแคมเปญเอนไซม์ที่ใช้อื่น ๆ สำหรับนำไปสู่ ​​filarial ใหม่ [41] - [43] มันเป็นความคิดที่ชั้นนอกสุดของหนังกำพร้าเป็นอุปสรรคหลักในการรุกของยาเสพติดคราบและสารเคมีอื่น ๆ [44] [45] การศึกษาต่อที่มีความจำเป็นในการกำหนดปัจจัยทางเคมีกายภาพที่เห็นชอบในการดูดซึมของสารในไส้เดือนฝอย ความรู้นี้จะอำนวยความสะดวกในการยืนยันการเชื่อมโยงระหว่างการยับยั้งเอนไซม์และกิจกรรมการมีชีวิตและช่วยเร่งการค้นพบและนำไปสู่การเพิ่มประสิทธิภาพของพยาธิ. นอกจากนี้เรายังไล่ตามวิธีทางพันธุกรรมเพื่อประเมินความต้องการของเอนไซม์ในซี elegans ล้มลงของกิจกรรมภายนอกโดยใช้ RNAi ส่งผลให้การเจริญเติบโตของข้อบกพร่องที่รุนแรงและการจับกุมตัวอ่อนและการลบยีนก่อให้เกิดผลกระทบตายของมารดาที่มีหนอนที่ทำงานได้ไม่มีอยู่ในประชากร F2 ความสำคัญของยีนใน B. malayi จะสามารถสรุปจากการวิเคราะห์ของเรา RNAi เนื่องจากมีความสอดคล้องที่ดีระหว่าง phenotypes ที่เกิดจากการล้มลง RNAi ของยีนใน orthologous ไส้เดือนฝอยศัตรูและ C. elegans [46] -. [48] บทบาทที่จำเป็นสำหรับการ NMT ยังได้รับการตรวจสอบทางพันธุกรรมในโรคอื่น ๆ รวมทั้งเชื้อราที่ทำให้เกิดโรค Candida albicans [49] และ Cryptococcus neoformans [50] และปรสิตโปรโตซัว kinetoplastid ลิตรที่สำคัญ [51], [52] แอล donovani [21], T. cruzi [ 40] และ T. brucei [52] แสดงออกของ NMT ใน T. brucei ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงขั้นต้นในลักษณะทางสัณฐานวิทยาพยาธิรวมทั้งการสะสมของไขมันในเซลล์ที่นำไปสู่การตายของเซลล์ [51] ในแมลงหวี่, การกลายพันธุ์ null ของยีน NMT เดียวที่ทำให้เกิดการหยุดชะงักของโครงร่างของเซลล์โปรตีนและการตายของเซลล์ตัวอ่อนในมดลูกอาจจะนำมาประกอบกับการสูญเสียของการทำงานของไคเนสซายน์ myristoylated [53]. การศึกษารายละเอียดของการดำเนินการใน T. brucei แสดงให้เห็นว่าการยับยั้งการ myristoylation ของ พื้นผิวหลายบัญชีสำหรับประสิทธิภาพของสารยับยั้ง NMT ในเซลล์เพาะเลี้ยงและในร่างกาย [19] ในขณะที่ยังคงมีความรู้ที่ไม่สมบูรณ์ของเป้าหมายของ NMT ใน T. brucei และผลกระทบต่อเนื่องที่ตามมาของพวกเขาส่วนใหญ่ใช้ trypanosomatids myristate สำหรับการรวมตัวเข้าไปในคอล-phosphatidylinositol (GPI) แองเคอที่โยงไกลโคโปรตีนที่สำคัญและพื้นผิว glycoconjugates กับพื้นผิวภายนอกของเมมเบรนพลาสม่า [54] เมื่อเร็ว ๆ นี้แสดงให้เห็นการวิเคราะห์ชีวสารสนเทศที่มีอยู่ในส่วนที่เกินจาก 60 พื้นผิวที่อาจเกิดขึ้นในชีวิตนี้ [55] จีโนมที่คล้ายกันวิเคราะห์ลำดับมีการระบุ 62 พื้นผิวโปรตีนสมมุติสำหรับ N-myristoylation ในแอลที่สำคัญ [51], [56] และอื่น ๆ กว่า 40 พื้นผิวในพี falciparum [22] หลายเป้าหมายมาลาเรียได้รับการตรวจสอบทดลองในการศึกษาล่าสุด [37]. ในมนุษย์และยูคาริโออื่น ๆ รวมทั้ง elegans ซีประมาณ 0.5-0.8% ของโปรตีนทั้งหมดในจีโนมจะ myristoylated [57] บทบาททางชีวภาพของไส้เดือนฝอยใน myristoylation เป็นที่เข้าใจได้ไม่ดีและผลของการยับยั้ง NMT ในสิ่งมีชีวิตเหล่านี้อาจจะมีความซับซ้อนน่าจะเกี่ยวข้องกับการทำงานของโปรตีนหลายอย่างที่มีความจำเป็นสำหรับการมีชีวิต ซึ่งสอดคล้องกับการศึกษาทางพันธุกรรมของเราในซี elegans และพบว่าส่วนใหญ่ของพื้นผิวที่คาดการณ์ไว้ใน elegans ซีแสดงข้อบกพร่องหลายพัฒนาการและความอยู่รอดบกพร่องในหน้าจอ RNAi เราคาดการณ์พื้นผิวที่มีศักยภาพใน B. malayi ครอบคลุมช่วงของการทำงานรวมทั้ง SRC-1 ซึ่ง encodes ไคเนสซายน์ไม่รับเกี่ยวข้องกับทางเดินในเซลล์ส่งสัญญาณระบุชะตากรรมของเซลล์และในส่วน elegans ซี [58] [59] ส่วนใหญ่ของพื้นผิวที่มีอยู่ในโปรตีนของหนึ่งหรือมากกว่าระยะการพัฒนาของ B. malayi [60] เรียกรวมกันว่าข้อมูลเหล่านี้ให้หลักฐานสำหรับความสำคัญของกิจกรรมใน NMT ไส้เดือนฝอยและให้ข้อมูลเชิงลึกบางอย่างในทางเดินที่หลากหลายมากที่มีแนวโน้มขึ้นอยู่กับโปรตีน myristoylated สำหรับการพัฒนาต่อไปของ NMT เป็นเป้าหมายยาเสพติดก็จะเป็นที่น่าสนใจมากที่จะระบุโปรตีนเหล่านี้และประเมินผลกระทบของการยับยั้งของกิจกรรม NMT ที่เกิดจากพันธุกรรมหรือสารเคมีล้มลงของเอนไซม์. Myristoylation เป็นพื้นที่สำรวจสำหรับการค้นพบยาเสพติดในไส้เดือนฝอย การศึกษาของเราได้แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่า NMT เป็นเป้าหมายยาเสพติดที่มีศักยภาพใน filarial ปรสิต การค้นพบของครอบครัวของโมเลกุลที่เกี่ยวข้องนำไปสู่การระบุ แต่เดิมเป็นสารยับยั้งโปรโตซัว NMT มีกิจกรรมกับ microfilariae และเวิร์มสำหรับผู้ใหญ่โดยเฉพาะอย่างยิ่งเป็นที่น่าตื่นเต้นและไฮไลท์ค่าศักยภาพของวิธีประสงค์ที่จะค้นพบยาใหม่สำหรับ filarial ปรสิต

Results (Thai) 3:

ในการศึกษานี้เราสร้างความสำคัญของ myristoylation ถิ่นใน C และในพยาธิตัวกลมรับผิดชอบโรคเท้าช้าง . หาของที่มีการอนุรักษ์ลำดับจีโนมของสายพันธุ์ที่เข้าร่วมในงานมากมาย บ่งบอกว่า myristoylation มีแนวโน้มที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์โปรตีน โดยการทํางานการเปรียบเทียบและวิเคราะห์โครงสร้างระหว่างไส้เดือนฝอยและ ต. brucei NMT เอนไซม์ที่ช่วยให้เราสามารถพิจารณายาค้นกลยุทธ์การใช้สารยับยั้ง tbnmt prototypic ddd85646 ซึ่งมีกิจกรรมที่มีศักยภาพ กับ ต. brucei เอนไซม์และเซลล์ในวัฒนธรรม ( nm ช่วง ) [ 19 ] , [ 23 ] สารประกอบยังใช้งานกับ cruzi ที ,ถึงแม้ว่า ~ 10 – 20 - พับผสมเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการยับยั้งเอนไซม์และ ~ 1000 พับมากขึ้น ( µ M ช่วง ) ยับยั้งปรสิตเจริญเติบโต [ 40 ] สาเหตุที่ลดความแรงต่อเหมือนเดิม ต. cruzi ไม่เป็นที่รู้จัก แต่ความแตกต่างในอัตราการหมุนเวียนพลาสมาเมมเบรนของเซลล์ เภสัชจลนศาสตร์ของยา หรือ การสะสม ,หรือความแตกต่างในทางอื่นที่จำเป็น n-myristoylation ฟังก์ชันที่ต้องการได้รับการเสนอ [ 40 ] และ ddd85646 ddd100870 ที่มีศักยภาพยับยั้งเอนไซม์ของไส้เดือนฝอย ( nm ช่วง ) และมีกิจกรรมกับระยะหนอนและหนอนผู้ใหญ่ของ มาลาไย ( µ M ช่วง ) ทั้งนี้ แม้ค่า ic50 เทียบเคียงทั้งสารประกอบของ C . ถิ่นตรวจเอนไซม์ NMT ,เพียงผสมโลหะ ddd100870 แสดงกิจกรรมต่อต้านถิ่นเหมือนเดิม . . . ต้องผสมอย่างเต็มที่มากขึ้นเพื่อตรวจสอบกิจกรรมกับไส้เดือนฝอยยังได้รับรายงานในเอนไซม์อื่น ๆตามการแคมเปญใหม่ filarial นัก [ 41 ] - [ 43 ] มันเป็นความคิดที่ชั้นนอกสุดของหนังกำพร้าคืออุปสรรคหลักในการเจาะของยาเสพติด , คราบ , และสารเคมีอื่น ๆ [ 44 ] , [ 45 ]การศึกษาเพิ่มเติมจะต้องพิจารณาปัจจัยและช่วยการดูดซึมของสารประกอบในพยาธิไส้เดือนตัวกลม ความรู้นี้จะช่วยยืนยันความเชื่อมโยงระหว่างกิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์และสิ่งมีชีวิต และช่วยเร่งการค้นพบและการเพิ่มประสิทธิภาพของยาขับพยาธินัก

เรายังติดตามวิธีการทางพันธุกรรมเพื่อประเมินความต้องการของเอนไซม์ในซีถิ่น .น็อคดาวน์ของกิจกรรมภายในการใช้ RNAi ทำให้เกิดข้อบกพร่องการเจริญเติบโตอย่างรุนแรงและหนอนจับและลบที่เกิดจากผลของยีน Lethality ไม่มีได้หนอนอยู่ในประชากร F2 ความสำคัญของยีนในพ.มาลาไยสามารถ inferred จากการวิเคราะห์หาของเราเนื่องจากมีความสอดคล้องที่ดีระหว่างฟีโนไทป์ของยีนที่เกิดจาก RNAi knockdown orthologous ไส้เดือนฝอยปรสิตและ C ในถิ่น [ 46 ] - [ 48 ] .

สรุปบทบาทย่านได้รับพันธุกรรมที่ต้องการรวมทั้งเชื้อโรคเชื้อรา Candida albicans เชื้อโรคอื่น ๆ [ 49 ] และ [ 50 บ้อหุ้น ]และโปรโตซัวปรสิต L . สาขา [ คิเนโทพลา ิด 51 ] , [ 52 ] , L . donovani [ 21 ] , ต. cruzi [ 40 ] , และ ต. brucei [ 52 ] overexpression ของ NMT ใน ต. brucei ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงต่อพยาธิวิทยา รวมถึงการสะสมตําแหน่งภายในเซลล์ของไขมัน ทำให้เซลล์ตายได้ [ 51 ] ในบ้าน ,การกลายพันธุ์ในยีนเดี่ยวของ NMT ทำให้เกิดการหยุดชะงักของ actin และไซโทสเกเลตอน ( ectopic ในตัวอ่อนอาจจะเกิดจากการสูญเสียการทำงานของ myristoylated ยาซีน [ 53 ] .

รายละเอียดการศึกษาดำเนินการใน ต. brucei แสดงว่าการยับยั้ง myristoylation พื้นผิวหลายบัญชีสำหรับประสิทธิภาพของ NMT inhibitors ในเซลล์เพาะเลี้ยงในหลอดทดลอง [ และ 19 ]ในขณะที่ยังคงมีความรู้ที่สมบูรณ์ของเป้าหมายของ NMT ใน ต. brucei และผลกระทบที่ตามมาจาก 30 องศาเซล trypanosomatids ส่วนใหญ่ใช้สำหรับเข้าไปในไกลคอล ฟอสฟาทิดิลอิโนซิทอล ( GPI ) เบรกที่โยงจากไกลโคโปรตีนที่สำคัญผิวและไกลโคค จูเกตกับพื้นผิวภายนอกของเยื่อหุ้มเซลล์ [ 54 ]การวิเคราะห์ล่าสุดพบว่ามีเกิน 60 ศักยภาพพื้นผิวในสิ่งมีชีวิต [ 55 ] การวิเคราะห์ลำดับเบสจีโนมซึ่งมีสารอาหารโปรตีนซึ่งระบุ 62 สำหรับ n-myristoylation แอลเอสาขา [ 51 ] [ 56 ] และมากกว่า 40 สารอาหารในหน้าใหม่ [ 22 ] หลายของมาลาเรียเป้าหมายได้รับการตรวจสอบผลการศึกษาล่าสุดใน [ 37 ] .

ในมนุษย์และยูแคริโอต อื่น ๆ , รวมทั้ง C ถิ่น ประมาณ 0.5 – 0.8% ของโปรตีนทั้งหมดในจีโนมมนุษย์เป็น myristoylated [ 57 ] ชีวภาพ ในบทบาทของ myristoylation ไส้เดือนฝอยจะไม่ค่อยเข้าใจ และผลของการยับยั้ง NMT ในสิ่งมีชีวิตเหล่านี้อาจซับซ้อน อาจเกี่ยวข้องกับการทำงานของโปรตีนหลายชนิดที่จำเป็นเพื่อความอยู่รอด .ซึ่งสอดคล้องกับการศึกษาทางพันธุกรรมของเราในซีถิ่นและพบว่าส่วนใหญ่ของพื้นผิวของ C . คาดการณ์ถิ่นแสดงพัฒนาการบกพร่องหลายข้อบกพร่องและการอยู่รอดใน RNAi หน้าจอ เราคาดการณ์ที่อาจเกิดขึ้นเมื่อพุทธศักราช มาลาไย ครอบคลุมช่วงของฟังก์ชันรวม src-1 ที่ encodes ไม่ใช่ตัวรับ ไทโรซินไคเนสเกี่ยวข้องกับสัญญาณมือถือรับชะตากรรม และระบุเซลล์ถิ่นกอง C . [ 58 ] , [ 59 ] ส่วนใหญ่ของสารอาหารที่มีอยู่ในโปรตีนของหนึ่งหรือมากกว่าตามขั้นตอนของ มาลาไย [ 60 ] โดยรวมแล้วข้อมูลเหล่านี้มีหลักฐานสำหรับความสำคัญของการเข้าร่วมกิจกรรม ไส้เดือนฝอย และให้ความเข้าใจบางอย่างในหลายหลากหลายเส้นทางที่มักจะขึ้นอยู่กับ myristoylated โปรตีนสำหรับการพัฒนาต่อไปของ NMT เป็นยาเป้าหมาย มันจะน่าสนใจมากที่จะระบุโปรตีนเหล่านี้ และศึกษาผลกระทบของกิจกรรมการยับยั้งของ NMT ที่เกิดจากพันธุกรรมหรือน็อคดาวน์ เคมีของเอนไซม์

myristoylation เป็นรวจพื้นที่สำหรับการค้นพบยาเสพติดในพยาธิไส้เดือนตัวกลม การศึกษาของเราได้แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่า NMT เป็นเป้าหมายยาที่มีศักยภาพในปรสิต filarial .การค้นพบที่เกี่ยวข้องกับครอบครัวของโมเลกุลของตะกั่ว แต่เดิมที่ระบุว่าเป็นโปรโตซัว NMT inhibitors กับกิจกรรมกับไมโครฟิลาเรีย และหนอนวัยที่น่าตื่นเต้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งและไฮไลท์ค่าศักยภาพของค้นวิธีการค้นพบยาใหม่สำหรับปรสิต filarial .