Although we were able to detect phe

Although we were able to detect phenotypic differences between H63T and its nearest neighbours using long- established methods, it can be difficult to distinguish Legionella species based on the biochemical tests that are typically done, because various species give similar reactions in many of the tests. For example, L.lansingensis cannot be distinguished from Legionella micdadei and Legionella maceachernii based on standard biochemical profiling . For this reason,
we examined 10 additional characteristics that we have recently found to be expressed variably within the genus Legionella . To that end, cell-free supernatants from late-exponential BYE broth cultures were analysed for protease, acid phosphatase and lipase activities as measured by azocasein, p-nitrophenyl phosphate and p-nitrophenyl palmitate hydrolysis, respectively. Strain H63T was positive for both protease and phosphatase activities but lacked lipase activity, a finding that distinguished it from all nine of its nearest neighbours (Table 2). That H63T had these activities in BYE culture supernatants suggests that the strain has a functional type-II protein secretion system, as has been documented extensively in L.pneumophila . Interestingly, in L.pneumophila, a functional type-II secretion system has also been linked to sliding on low-agar media and growth at low temperature . H63T exhibited swimming motility by wet-mount microscopy of 3-day-old BCYE agar-grown cultures, but did not show sliding motility (surface translocation) and its associated surfactant when grown on 0.5 % agar BCYE plates incubated at 30 uC for 14 days . These data indicated further differences between H63T and L.brunensis, L.londiniensis, L.feeleii and L.pneumophila (Table 2). Strain H63T was unable to grow at 17 uC on BCYE agar, differentiating it from eight of its nine nearest neighbours; L.londiniensis was the only other species in the panel that did not grow under this low- temperature condition (Table 2). That H63T did not exhibit sliding motility nor grow at 17 uC on BCYE agar would suggest that it lacks those type-II-dependent factors asso- ciated with sliding and low-temperature growth. Unlike L.brunensis, L.erythra, L.dresdenensis, L.rubrilucens, L.feeleii, L.pneumophila and L.birminghamensis, H63T grew very poorly at 37 uC on BCYE agar depleted for iron by the addition of 14mM deferoxamine mesylate (Table 2) . This result suggested that the strain has a higher-than-average iron requirement and/or a reduced ability to scavenge iron. In support of this hypothesis, H63T, unlike most of its nearest neighbours, showed poor growth in deferrated chemically defined medium (CDM) at 37 uC, and cell-free supernatants obtained 15 h post-inoculation showed no evidence of siderophore activity as measured by the chrome azurol S assay (Table 2) . Interestingly, strain H63T secreted a yellow pigment upon culturing in CDM, and its supernatants displayed a green fluorescence under UV light (not shown). We also observed that H63T was more sensitive to the presence of 100 mM NaCl on BCYE agar at 37 uC than were some of the other species (Table 2), as described previously . In L.pneumophila, salt-sensitivity is correlated with a type-IV secretion system known as Dot/Icm . In summary, the results from these additional chemotaxonomic assays provide strong evidence for H63T being phenotypically distinct from its phylogeneti- cally nearest neighbours.

Results (Thai) 1:

ถึงแม้ว่าเราไม่สามารถตรวจพบการแตก H63T และของเพื่อนใช้ยาวขึ้นวิธีไทป์ จะสามารถยากที่จะแยกพันธุ์ Legionella ตามทดสอบชีวเคมีที่จะทำ เนื่องจากสายพันธุ์ต่าง ๆ ให้ปฏิกิริยาเหมือนกันในการทดสอบ ตัวอย่าง L.lansingensis ไม่แตกต่างไปจาก Legionella micdadei และ Legionella maceachernii ตามมาตรฐานชีวเคมีการรวบรวมสถานะ ด้วยเหตุนี้we examined 10 additional characteristics that we have recently found to be expressed variably within the genus Legionella . To that end, cell-free supernatants from late-exponential BYE broth cultures were analysed for protease, acid phosphatase and lipase activities as measured by azocasein, p-nitrophenyl phosphate and p-nitrophenyl palmitate hydrolysis, respectively. Strain H63T was positive for both protease and phosphatase activities but lacked lipase activity, a finding that distinguished it from all nine of its nearest neighbours (Table 2). That H63T had these activities in BYE culture supernatants suggests that the strain has a functional type-II protein secretion system, as has been documented extensively in L.pneumophila . Interestingly, in L.pneumophila, a functional type-II secretion system has also been linked to sliding on low-agar media and growth at low temperature . H63T exhibited swimming motility by wet-mount microscopy of 3-day-old BCYE agar-grown cultures, but did not show sliding motility (surface translocation) and its associated surfactant when grown on 0.5 % agar BCYE plates incubated at 30 uC for 14 days . These data indicated further differences between H63T and L.brunensis, L.londiniensis, L.feeleii and L.pneumophila (Table 2). Strain H63T was unable to grow at 17 uC on BCYE agar, differentiating it from eight of its nine nearest neighbours; L.londiniensis was the only other species in the panel that did not grow under this low- temperature condition (Table 2). That H63T did not exhibit sliding motility nor grow at 17 uC on BCYE agar would suggest that it lacks those type-II-dependent factors asso- ciated with sliding and low-temperature growth. Unlike L.brunensis, L.erythra, L.dresdenensis, L.rubrilucens, L.feeleii, L.pneumophila and L.birminghamensis, H63T grew very poorly at 37 uC on BCYE agar depleted for iron by the addition of 14mM deferoxamine mesylate (Table 2) . This result suggested that the strain has a higher-than-average iron requirement and/or a reduced ability to scavenge iron. In support of this hypothesis, H63T, unlike most of its nearest neighbours, showed poor growth in deferrated chemically defined medium (CDM) at 37 uC, and cell-free supernatants obtained 15 h post-inoculation showed no evidence of siderophore activity as measured by the chrome azurol S assay (Table 2) . Interestingly, strain H63T secreted a yellow pigment upon culturing in CDM, and its supernatants displayed a green fluorescence under UV light (not shown). We also observed that H63T was more sensitive to the presence of 100 mM NaCl on BCYE agar at 37 uC than were some of the other species (Table 2), as described previously . In L.pneumophila, salt-sensitivity is correlated with a type-IV secretion system known as Dot/Icm . In summary, the results from these additional chemotaxonomic assays provide strong evidence for H63T being phenotypically distinct from its phylogeneti- cally nearest neighbours.

Results (Thai) 2:

ถึงแม้ว่าเราจะมีความสามารถในการตรวจสอบความแตกต่างระหว่างฟีโนไทป์ H63T และเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุดของการใช้วิธีการที่จัดตั้งขึ้นยาวก็สามารถยากที่จะแยกแยะสายพันธุ์เชื้อ Legionella จากการทดสอบทางชีวเคมีที่เกิดขึ้นมักจะเพราะหลายชนิดให้เกิดปฏิกิริยาที่คล้ายกันในหลายของการทดสอบ ยกตัวอย่างเช่น L.lansingensis ไม่สามารถประสบความสำเร็จจาก micdadei Legionella และ Legionella maceachernii อยู่บนพื้นฐานของมาตรฐานทางชีวเคมีโปรไฟล์ ด้วยเหตุนี้เราตรวจสอบ 10 ลักษณะเพิ่มเติมที่เราได้พบเมื่อเร็ว ๆ นี้ที่จะแสดงความแตกภายในสกุล Legionella
ไปสิ้นสุดที่ supernatants มือถือฟรีจากปลายชี้แจงวัฒนธรรมน้ำซุป BYE วิเคราะห์สำหรับโปรติเอส, กรดฟอสฟาและกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสเป็นวัดโดย azocasein ฟอสเฟตพี Nitrophenyl และพี Nitrophenyl จองจำ palmitate ตามลำดับ H63T สายพันธุ์เป็นบวกทั้งกิจกรรมโปรติเอสและฟอสฟา แต่ขาดกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส, การค้นพบที่ได้จากความโดดเด่นทั้งเก้าของประเทศเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุด (ตารางที่ 2) H63T ที่มีกิจกรรมเหล่านี้ใน BYE supernatants วัฒนธรรมแสดงให้เห็นว่าสายพันธุ์ที่มีการทำงานประเภท-II ระบบการหลั่งโปรตีนตามที่ได้รับการรับรองอย่างกว้างขวางใน L.pneumophila ที่น่าสนใจใน L.pneumophila ระบบการหลั่งประเภท-II ทำงานยังได้รับการเชื่อมโยงกับการเลื่อนบนสื่อต่ำวุ้นและการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่ำ H63T แสดงการเคลื่อนไหวของน้ำโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เปียก-mount ของวัฒนธรรม 3 วันเก่า BCYE วุ้นปลูก แต่ไม่ได้แสดงให้เห็นการเคลื่อนไหวเลื่อน (โยกย้ายพื้นผิว) และลดแรงตึงผิวที่เกี่ยวข้องเมื่อปลูกใน 0.5% แผ่น BCYE วุ้นบ่มที่ 30 UC เป็นเวลา 14 วัน . ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นความแตกต่างระหว่าง H63T และ L.brunensis, L.londiniensis, L.feeleii และ L.pneumophila (ตารางที่ 2) H63T สายพันธุ์ก็ไม่สามารถที่จะเติบโตที่ 17 UC ในอาหารเลี้ยงเชื้อ BCYE แตกต่างจากแปดเก้าของประเทศเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุดของตน L.londiniensis เป็นสายพันธุ์อื่น ๆ เฉพาะในแผงที่ไม่ได้เติบโตภายใต้สภาพอุณหภูมิต่ำนี้ (ตารางที่ 2) H63T ที่ไม่ได้แสดงการเคลื่อนไหวเลื่อนหรือเติบโตที่ 17 UC ในอาหารเลี้ยงเชื้อ BCYE ขอแนะนำว่าผู้ที่ขาดปัจจัยประเภทที่สองขึ้นอยู่กับ asso- ciated กับการเลื่อนและการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่ำ ซึ่งแตกต่างจาก L.brunensis, L.erythra, L.dresdenensis, L.rubrilucens, L.feeleii, L.pneumophila และ L.birminghamensis, H63T เติบโตอย่างต่ำที่ 37 UC ในอาหารเลี้ยงเชื้อ BCYE หมดเหล็กโดยนอกเหนือจาก 14mm Deferoxamine mesylate ( ตารางที่ 2) ผลที่ได้นี้ชี้ให้เห็นว่าความเครียดมีความต้องการเหล็กที่สูงขึ้นกว่าค่าเฉลี่ยและ / หรือความสามารถลดลงไปไล่เหล็ก ในการสนับสนุนสมมติฐานนี้ H63T แตกต่างมากที่สุดของประเทศเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุดของการเจริญเติบโตที่ยากจนใน deferrated กำหนดเคมีปานกลาง (CDM) ที่ 37 UC และ supernatants มือถือฟรีได้ 15 ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีนแสดงให้เห็นหลักฐานของกิจกรรม siderophore ไม่มีวัดจาก ทดสอบโครเมี่ยม azurol S (ตารางที่ 2) ที่น่าสนใจ H63T ความเครียดหลั่งสีเหลืองเมื่อเพาะเลี้ยงใน CDM และ supernatants ที่แสดงการเรืองแสงสีเขียวภายใต้แสงยูวี (ไม่แสดง) นอกจากนี้เรายังตั้งข้อสังเกตว่าเป็น H63T มีความไวต่อการปรากฏตัวของ 100 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ในอาหารเลี้ยงเชื้อ BCYE ที่ 37 UC กว่าบางส่วนของสายพันธุ์อื่น ๆ (ตารางที่ 2) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ใน L.pneumophila เกลือไวมีความสัมพันธ์กับระบบการหลั่งประเภท-IV ที่รู้จักกันเป็นจุด / Icm ในการสรุปผลที่ได้จากการตรวจ chemotaxonomic เหล่านี้เพิ่มเติมให้หลักฐานที่แข็งแกร่งสำหรับ H63T เป็นลักษณะภายนอกแตกต่างจาก phylogeneti- ของเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุด cally

Results (Thai) 3:

ถึงแม้ว่าเราสามารถตรวจพบความแตกต่างระหว่าง h63t ใกล้เคียงและใกล้เพื่อนบ้านใช้นานขึ้น วิธีการ มันสามารถยากที่จะแยกแยะชนิด Legionella ขึ้นอยู่กับชีวเคมีทดสอบที่มักจะทำเพราะสัตว์ต่างๆให้ปฏิกิริยาที่คล้ายกันในหลายการทดสอบ ตัวอย่างเช่น Llansingensis ไม่สามารถแยกแยะจาก Legionella และ micdadei Legionella maceachernii ตามมาตรฐานทางชีวเคมีที่โปรไฟล์ ด้วยเหตุนี้
เราตรวจสอบ 10 คุณลักษณะเพิ่มเติมที่เราได้พบเมื่อเร็ว ๆ นี้สามารถแสดงการเปลี่ยนแปลงภายในสกุลลีจิโอเนลลา . ไปสิ้นสุดที่ supernatants จากการสังเคราะห์สายชี้แจงบายน้ำวัฒนธรรม วิเคราะห์หาโปรเอนไซม์แอซิดฟอสฟาเตส และกิจกรรมต่างๆ ซึ่งวัดโดย azocasein p-nitrophenyl , ฟอสเฟตและ p-nitrophenyl Palmitate hydrolysis ตามลำดับ h63t สายพันธุ์บวกสำหรับกิจกรรมทั้งโปรตีนและเอนไซม์ฟอสฟาเตส แต่ขาดกิจกรรม , หาที่แตกต่างจากเพื่อนบ้านที่ใกล้ที่สุดของเก้าทั้งหมด ( ตารางที่ 2 )ที่ h63t มีกิจกรรมเหล่านี้ใน supernatants วัฒนธรรมบาย ชี้ให้เห็นว่า ความเครียดมีการทำงานของระบบการหลั่งโปรตีนชนิดที่ 2 ที่ได้รับการบันทึกไว้อย่างกว้างขวางใน l.pneumophila . แต่ใน l.pneumophila การทํางานแบบ 2 ระบบการหลั่งยังถูกเชื่อมโยงกับการเลื่อนบนสื่อวุ้นน้อยและการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิต่ำh63t จัดแสดงว่าย motility ด้วยกล้องจุลทรรศน์ภูเขาเปียกของ 3-day-old bcye วุ้นปลูกวัฒนธรรม แต่ไม่ได้แสดงการเคลื่อนที่ ( เลื่อนโยกย้ายผิว ) และที่เกี่ยวข้องสารลดแรงตึงผิวเมื่อเติบโต 0.5% แผ่นวุ้น bcye บ่มที่ 30 เป็นต้น สำหรับ 14 วัน ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นความแตกต่างระหว่าง h63t เพิ่มเติมและ l.londiniensis l.brunensis , และ , l.feeleii l.pneumophila ( ตารางที่ 2 )