13.5.2 Laboratory yeast propagation

13.5.2 Laboratory yeast propagation
The aim of laboratory propagation is to grow a pure culture of yeast of sufficient volume to pitch the first brewery scale propagation vessel. The process is performed using traditional microbiological techniques and mainly glass apparatus, preferably by skilled personnel. The importance of this stage is often underestimated. Ensuring that the culture is pure is of paramount importance. Although it is customary to confirm that the culture is free from contamination the test results may not be obtained until after the first brewery stage has been pitched.
To generate the terminal laboratory propagation culture it is necessary to grow a series of intermediate cultures of progressively increasing volume. A typical protocol is shown in Fig. 13.8. Scale up factors are usually around 1:10. The initial stages use a generalpurpose yeast medium such as yeast extract, peptone glucose (YEPG). The terminal phase uses sterile brewery wort. The whole process takes around two weeks. Growth of yeast is promoted by continuous aeration. Terminal yeast counts should be within the range 150±200 106 cells per ml at a viablity greater than 98%. The sub-terminal culture is carried out using an aspirator flask. The culture is aerated via a glass sinter fitted with a sterile gas filter. Good rates of oxygen transfer are encouraged by mechanical agitation using a magnetic follower. The outlet on the aspirator is fitted with silicone tubing and a
Slope culture
Wash all growth off slope with sterile YEPG medium
10 ml YEPG
Static incubation for 24h at 20°C
100 ml YEPG
Incubate on flask shaker for three days at 25°C
2l YEPG
Incubate for three days at 25°C with continuous agitation and aeration
20l sterile wort
Incubate for three days at 25°C with continuous agitation and aeration
Brewery seed vessel
Fig. 13.8 Protocol for the laboratory phase of yeast propagation. All stages except the terminal step use a semi-defined medium (YEPG: yeast extract, 5 g/l; peptone, 10 g/l; glucose, 20 g/l).
coupling for attachment to the inoculation port on the apparatus used for growing the terminal laboratory culture. The latter piece of apparatus must fulfil three functions. It must be able to withstand autoclaving during sterilization of the wort. It must be suitable for growing pure cultures of yeast to high concentration without risk of contamination. It must be suitable for transferring yeast from the laboratory to the brewery, therefore it must be of robust construction to withstand the rigours of the production environment.
Suitable apparatus for carrying out the terminal phase of laboratory propagation is shown in Fig. 13.9. The flask has a total capacity of approximately 25 litres and is constructed from stainless steel. Several ports traverse a top plate that can be removed for filling with wort and for cleaning. These ports are attached to lines for inoculation, sampling, gas inlet and outlet and transfer to the brewery seed vessel. During the growth phase the wort is aerated using air delivered via a sterile gas filter and a stainless steel sinter. The wort is agitated using a magnetic follower. Transfer of the culture to the brewery seed vessel is achieved using a gas cylinder to provide motor gas delivered via the exhaust line. All gas lines are protected with sterile filters and all other lines are fitted with connectors, which are wrapped during sterilization. These are used to make aseptic connections when transfers are made.

Results (Vietnamese) 1:

13.5.2 phòng thí nghiệm nấm men tuyên truyềnMục đích của tuyên truyền phòng thí nghiệm là để phát triển một nền văn hóa tinh khiết của nấm men các khối lượng đủ để pitch đầu tiên nhà máy bia quy mô tuyên truyền tàu. Quá trình được thực hiện bằng cách sử dụng kỹ thuật vi sinh truyền thống và chủ yếu là bộ máy thủy tinh, tốt nhất là nhân viên có tay nghề cao. Tầm quan trọng của giai đoạn này thường đánh giá thấp. Đảm bảo rằng các nền văn hóa là tinh khiết là hết sức quan trọng. Mặc dù nó là phong tục để xác nhận rằng các nền văn hóa là miễn phí từ ô nhiễm nhưng kết quả kiểm tra có thể không được lấy cho đến sau khi giai đoạn nhà máy bia đầu tiên đã được pitched.Để tạo ra các nền văn hóa tuyên truyền phòng thí nghiệm thiết bị đầu cuối, nó là cần thiết để phát triển một loạt các nền văn hóa Trung gian của dần dần tăng khối lượng. Một giao thức tiêu biểu được thể hiện trong hình 13.8. Quy mô lên yếu tố là thường khoảng 1:10. Các giai đoạn ban đầu sử dụng một phương tiện nấm men generalpurpose chẳng hạn như men giải nén, chế phẩm peptone glucose (YEPG). Giai đoạn thiết bị đầu cuối sử dụng vô trùng brewery wort. Toàn bộ quá trình mất khoảng hai tuần. Tăng trưởng của nấm men được khuyến khích bởi thoáng liên tục. Thiết bị đầu cuối nấm men tính nên là trong phạm vi 150±200 106 tế bào / ml ở một viablity lớn hơn 98%. Thiết bị đầu cuối tiểu văn hóa được thực hiện bằng cách sử dụng một lọ bình. Các nền văn hóa có ga thông qua một sinter thủy tinh được trang bị với một bộ lọc khí vô trùng. Các tỷ lệ tốt của oxy chuyển được khuyến khích bởi cơ khí kích động bằng cách sử dụng một đi theo từ. Các cửa hàng trên lọ được trang bị với silicone ống và mộtĐộ dốc văn hóaRửa tất cả tăng trưởng ra dốc với vô trùng YEPG phương tiện10 ml YEPGTĩnh ấp cho 24h ở 20° C100 ml YEPGẤp cho nở trên flask shaker trong ba ngày ở 25° C2l YEPGẤp cho nở trong ba ngày ở 25° C với kích động liên tục và thoáng20l vô trùng wortẤp cho nở trong ba ngày ở 25° C với kích động liên tục và thoángNhà máy bia hạt giống tàuHình 13.8 các giao thức cho giai đoạn phòng thí nghiệm của nấm men tuyên truyền. Các giai đoạn tất cả ngoại trừ bước thiết bị đầu cuối sử dụng một phương tiện bán được xác định (YEPG: nấm men chiết xuất, 5 g/l chế phẩm peptone, 10 g/l; glucose, 20 g/l).bộ kéo cho tập tin đính kèm vào cổng tiêm chủng trên bộ máy được sử dụng cho việc phát triển văn hóa phòng thí nghiệm thiết bị đầu cuối. Phần thứ hai của bộ máy phải thực hiện ba chức năng. Nó phải có khả năng chịu được khử trùng trong khử trùng wort. Nó phải được thích hợp cho phát triển nền văn hóa tinh khiết của nấm men các nồng độ cao mà không có nguy cơ ô nhiễm. Nó phải phù hợp để chuyển các nấm men từ phòng thí nghiệm để các nhà máy bia, do đó nó phải xây dựng mạnh mẽ để withstand rigours của môi trường sản xuất.Suitable apparatus for carrying out the terminal phase of laboratory propagation is shown in Fig. 13.9. The flask has a total capacity of approximately 25 litres and is constructed from stainless steel. Several ports traverse a top plate that can be removed for filling with wort and for cleaning. These ports are attached to lines for inoculation, sampling, gas inlet and outlet and transfer to the brewery seed vessel. During the growth phase the wort is aerated using air delivered via a sterile gas filter and a stainless steel sinter. The wort is agitated using a magnetic follower. Transfer of the culture to the brewery seed vessel is achieved using a gas cylinder to provide motor gas delivered via the exhaust line. All gas lines are protected with sterile filters and all other lines are fitted with connectors, which are wrapped during sterilization. These are used to make aseptic connections when transfers are made.

Results (Vietnamese) 2:

13.5.2 Phòng thí nghiệm nấm men nhân giống
Mục đích của công tác tuyên truyền phòng thí nghiệm là để phát triển một nền văn hóa thuần túy của men của đủ khối lượng để pitch tàu tuyên truyền quy mô nhà máy bia đầu tiên. Quá trình này được thực hiện bằng cách sử dụng kỹ thuật vi sinh truyền thống và chủ yếu là bộ máy thủy tinh, tốt nhất bởi nhân viên có tay nghề cao. Tầm quan trọng của giai đoạn này thường được đánh giá thấp. Đảm bảo rằng văn hóa là tinh khiết là hết sức quan trọng. Mặc dù nó là phong tục để xác nhận rằng văn hóa là không bị nhiễm bẩn các kết quả kiểm tra có thể đạt được cho đến sau khi giai đoạn nhà máy bia đầu tiên đã được dốc.
Để tạo ra các thiết bị đầu cuối văn hóa tuyên truyền phòng thí nghiệm nó là cần thiết để phát triển một loạt các nền văn hóa trung gian tăng dần âm lượng. Một giao thức điển hình được hiển thị trong hình. 13.8. Mở rộng quy mô các yếu tố thường là khoảng 1:10. Các giai đoạn ban đầu sử dụng một phương tiện men generalpurpose như nấm men, glucose peptone (YEPG). Các thiết bị đầu cuối sử dụng nhà máy bia pha wort vô trùng. Toàn bộ quá trình mất khoảng hai tuần. Tăng trưởng của nấm men được thăng bằng sục khí liên tục. Đếm nấm men bị đầu cuối cần phải nằm trong phạm vi 150 ± 200 106 tế bào trên mỗi ml tại một viablity lớn hơn 98%. Các tiểu văn hóa-thiết bị đầu cuối được thực hiện bằng cách sử dụng một bình cái ống hút. Các nền văn hóa được phun qua một túp kính trang bị với một bộ lọc khí vô trùng. Giá tốt chuyển oxy được khuyến khích bởi rung động cơ học bằng cách sử dụng một người theo dõi từ. Các ổ cắm trên máy hút bụi được trang bị ống silicone và một
nền văn hóa Slope
Rửa tất cả các tăng trưởng off dốc với trung YEPG vô trùng
10 ml YEPG
ủ tĩnh trong 24h ở 20 ° C
100 ml YEPG
Ủ vào bình shaker trong ba ngày ở 25 ° C
2l YEPG
Ủ trong ba ngày ở 25 ° C với khuấy liên tục và sục khí
20l wort vô trùng
Ủ trong ba ngày ở 25 ° C với khuấy liên tục và sục khí
tàu hạt Brewery
hình. 13.8 Nghị định thư cho giai đoạn phòng thí nghiệm nhân giống nấm men. Tất cả các giai đoạn, ngoại trừ các bước thiết bị đầu cuối sử dụng một phương tiện bán được xác định (YEPG: chiết xuất nấm men, 5 g / l; peptone, 10 g / l; glucose, 20 g / l).
Khớp nối để gắn vào cổng cấy trên loại thiết bị dùng cho phát triển văn hóa phòng thí nghiệm thiết bị đầu cuối. Các mảnh sau của bộ máy phải thực hiện ba chức năng. Nó phải có khả năng chịu được hấp khử trùng trong các dịch nha. Nó phải phù hợp cho việc phát triển nền văn hóa thuần túy của nấm men nồng độ cao mà không có nguy cơ ô nhiễm. Nó phải phù hợp để chuyển men từ phòng thí nghiệm đến nhà máy bia, do đó nó phải được xây dựng mạnh mẽ để chịu được sự khắc nghiệt của môi trường sản xuất.
Bộ máy Thích hợp để thực hiện giai đoạn cuối của công tác tuyên truyền phòng thí nghiệm được thể hiện trong hình. 13.9. Bình có tổng công suất khoảng 25 lít và được xây dựng từ thép không gỉ. Một số cảng đi qua một tấm hàng đầu mà có thể được loại bỏ để làm đầy với wort và làm sạch. Những cổng này được gắn liền với dòng cho tiêm, lấy mẫu, khí vào và đầu ra và chuyển giao cho các tàu hạt giống nhà máy bia. Trong giai đoạn tăng trưởng dịch nha được phun sử dụng không khí giao thông qua một bộ lọc khí vô trùng và một túp thép không gỉ. Các wort được kích động bằng cách sử dụng một người theo dõi từ. Chuyển giao văn hóa để các tàu hạt giống sản xuất bia là đạt được bằng cách sử dụng một xi lanh khí để cung cấp khí đốt động cơ được cung cấp qua các đường ống xả. Tất cả các dòng khí được bảo vệ với các bộ lọc vô trùng và tất cả các dòng khác được gắn với đầu nối, được bọc trong khử trùng. Chúng được sử dụng để làm cho các kết nối vô trùng khi giao dịch chuyển được thực hiện.