The following protocol was employed

The following protocol was employed to extract good quality
genomic DNA from young leaves of longan: (1 ) The extraction
buffer was preheated at 65°C. (2) 2-3 g of leaf sample and 0.25 g of
PVPP (polyvingypyrrolidone) (solid powder) were placed together in
a pre-cooled pestle and mortar and ground to a fine powder using
liquid nitrogen; (3) The powdered leaf sample was transfer to a 15
ml centrifuge tube and 5 ml of hot extraction buffer added to the
tube before the frozen powder starts to thaw. (4) The tube was
several times inverted to mix the ingredients thoroughly and
incubated at 65°C for 60 min. (5) An equal volume of chloroformisoamyl alcohol (24:1, v/v) was added and mix gently by inverting
the tube to form an emulsion. (6) It was spined for 7 min at 10,000
rpm at room temperature. (7) The supernatant (top aqueous phase)
was carefully transfered to a new centrifuge tube, and 1/10 volume
of CTAB/NaCl added to equal volume of chloroform-isoamyl alcohol
(24:1, v/v), and mix gently by inverting the tube to form an emulsion.
(8) It was spun for 10 min at 10,000 rpm at room temperature. (9)
The supernatant (top aqueous phase) was carefully transferred to a
new centrifuge tube, 5 ml of chilled isopropanol added, and mix
gently by inverting the tube. Tubes were placed at −20°C for 30 min (the precipitated DNA will be visible at this step). (10) It was spun at
10,000 rpm for 5 min and discarded the supernatant. (11) Wash the
pellets 2-3 times with 75% ethanol. (12) The tube was inverted on a paper towel and the pellets air-dried. (13) The DNA in 500 μl TE
buffer was resuspended, and treated with 25 μl RNase A, and
incubated at 37°C for 30 min. (14) 500 μl of chloroform-isoamyl
alcohol was added and mixed gently. (15) It was spun for 10 min at
10,000 rpm and the supernatant transferred into a new 1.5 ml
eppendorf tube. (16) 1/10 volume 3 M sodium acetate was added,
mix and precipitate the DNA with two volumes of chilled 100%
ethanol precipitated. (17) It was spun for 5 min at 8000 rpm,
supernatant discarded, and the pellet washed with 75% ethanol.
(18) The pellet was air-dried and dissolved in 200 μl TE. (19) The
DNA concentration was measured by taking absorbance at 260 nm
or by running aliquots on a 1% agarose gel. (20) The DNA
concentration and purity of these samples were determined by
estimating the ratio of absorbance at 260 nm to that at 280 nm
(A260/A280).
The extracted DNA was validated for PCR application as
described by Mei et al. (2004). Preparation of polyacrylamide gel
and electrophoresis of PCR products were carried out according to
Benbouza et al. (2006). Gels were silver stained according to the
steps described by Liang et al. (2014)

Results (Vietnamese) 1:

Các giao thức được sử dụng để trích xuất các chất lượng tốtgen DNA từ trẻ lá của longan: (1) việc khai thácbộ đệm được preheated ở 65° C. (2) 2-3 g của lá mẫu và 0.25 gPVPP (polyvingypyrrolidone) (rắn bột) đã được đặt lại với nhau trongtrước khi làm mát bằng pestle và vữa và mặt đất đến một bột mịn bằng cách sử dụngnitơ lỏng; (3) các mẫu bột lá đã là chuyển giao cho một 15ml máy ly tâm ống và 5 ml nóng khai thác bộ đệm được thêm vào cácống trước khi đông lạnh bột bắt đầu để làm tan băng. (4) ốngnhiều lần ngược để pha trộn các thành phần triệt để vàủ tại 65° C trong 60 phút (5) một khối lượng tương đương của chloroformisoamyl rượu (24:1, v/v) đã được thêm vào và trộn nhẹ nhàng bằng cách đảo ngượcống để tạo thành một nhũ tương. (6) đó là spined trong 7 phút tại 10.000vòng/phút ở nhiệt độ phòng. (7) supernatant (giai đoạn đầu của dung dịch)cẩn thận có thể chuyển sang một máy ly tâm ống mới, và khối lượng 1/10của CTAB/NaCl thêm khối lượng bằng clorofom-isoamyl rượu(24:1, v/v), và trộn nhẹ nhàng bằng cách đảo ngược ống để tạo thành một nhũ tương.(8) nó được tách cho 10 phút tại 10.000 vòng/phút ở nhiệt độ phòng. (9)Cẩn thận, supernatant (giai đoạn đầu của dung dịch nước) được chuyển đến mộtMáy ly tâm ống mới, 5 ml isopropanol ướp lạnh thêm, và pha trộnnhẹ nhàng bằng cách đảo ngược ống. Ống được đặt ở nhiệt độ-20 ° C trong 30 phút (DNA sản sẽ được hiển thị tại bước này). (10) nó spun tại10.000 vòng/phút trong 5 phút và loại bỏ supernatant. (11) rửa cácviên nén 2 - 3 lần với 75% ethanol. (12) các ống ngược trên khăn giấy và bột viên air-dried. (13) DNA trong 500 μl TEbộ đệm được resuspended, và được điều trị với 25 μl RNase A, vàủ ở 37° C cho 30 phút (14) 500 μl của cloroform-isoamylrượu đã được thêm vào và trộn nhẹ nhàng. (15) nó được tách cho 10 phút tại10.000 rpm và supernatant việc chuyển vào một mới 1.5 mlEppendorf ống. (16) 1/10 lượng 3 M natri axetat được bổ sung,trộn và kết tủa DNA với hai tập ướp lạnh 100%ethanol kết tủa. (17) nó spun trong 5 phút tại 8000 rpm,supernatant bỏ đi, và miếng rửa với 75% ethanol.(18) miếng đã được air-dried và giải tán năm 200 μl TE. (19)DNA nồng độ được đo bằng việc hấp thu tại 260 nmhoặc bằng cách chạy aliquots trên gel agarose 1%. (20 DNA)nồng độ và độ tinh khiết của các mẫu đã được xác định bởiước tính tỷ lệ hấp thu tại 260 nm cho rằng tại 280 nm(A260/A280).DNA chiết xuất đã được xác nhận cho ứng dụng của PCR làđược mô tả bởi Mei et al. (2004). Chuẩn bị của polyacrylamide gelvà electrophoresis sản phẩm PCR được tiến hành theoBenbouza et al. (2006). Gel đã bạc màu theo cácCác bước được mô tả bởi lương et al. (2014)

Results (Vietnamese) 2:

Các giao thức dưới đây được sử dụng để trích xuất chất lượng tốt
DNA từ lá non của nhãn: (1) Việc khai thác
đệm đã được làm nóng trước ở 65 ° C. (2) 2-3 g mẫu lá và 0,25 g
PVPP (polyvingypyrrolidone) (bột rắn) được đặt lại với nhau trong
một cái chày trước nguội và vữa và mặt đất thành bột mịn sử dụng
nitơ lỏng; (3) Các mẫu lá bột đã chuyển đến 15
ống ml máy ly tâm và 5 ml đệm chiết nóng thêm vào
ống trước khi bột đông lạnh bắt đầu tan. (4) Các ống đã
nhiều lần ngược để pha trộn các thành phần kỹ lưỡng và
ủ ở 65 ° C trong 60 phút. (5) Một khối lượng bằng nhau của rượu chloroformisoamyl (24: 1, v / v) được thêm vào và trộn nhẹ nhàng bằng cách đảo ngược
ống để tạo thành một nhũ tương. (6) Nó được spined cho 7 phút ở 10.000
rpm ở nhiệt độ phòng. (7) Các dịch nổi (pha nước hàng đầu)
đã được chuyển giao một cách cẩn thận để một ống ly tâm mới, và 1/10 khối lượng
của CTAB / NaCl thêm vào khối lượng bằng nhau của rượu chloroform-isoamyl
(24: 1, v / v), và trộn nhẹ nhàng bằng cách đảo ngược ống để tạo thành một nhũ tương.
(8) Nó được tách trong 10 phút ở 10.000 rpm ở nhiệt độ phòng. (9)
Các dịch nổi (pha nước hàng đầu) đã được cẩn thận chuyển vào một
ống ly tâm mới, 5 ml isopropanol lạnh thêm, và trộn
nhẹ nhàng bằng cách đảo ngược ống. Ống được đặt ở -20 ° C trong 30 phút (DNA kết tủa sẽ được hiển thị ở bước này). (10) Nó được tách tại
10.000 rpm trong 5 phút và loại bỏ các bề mặt. (11) Rửa
viên 2-3 lần với 75% ethanol. (12) Ống này được đảo ngược trên một chiếc khăn giấy và bột viên không khí khô. (13) Các DNA trong 500 ml TE
đệm đã được lơ lửng, và điều trị với 25 ml RNase A, và
ủ ở 37 ° C trong 30 phút. (14) 500 ml cloroform-isoamyl
rượu được thêm vào và trộn nhẹ nhàng. (15) Nó được tách trong 10 phút ở
10.000 rpm và gạn chuyển vào 1,5 ml mới
Eppendorf ống. (16) 1/10 khối lượng 3 M sodium acetate được thêm vào,
trộn và kết tủa DNA với hai tập của ướp lạnh 100%
ethanol kết tủa. (17) Nó được tách trong 5 phút ở 8000 rpm,
gạn bỏ đi, và các viên rửa sạch với 75% ethanol.
(18) Các viên là không khí khô và hòa tan trong 200 ml TE. (19) Các
nồng DNA được đo bằng cách hấp thụ ở 260 nm
hoặc bằng cách chạy phần phân ước trên gel agarose 1%. (20) Các DNA
nồng độ và độ tinh khiết của các mẫu được xác định bằng cách
lập dự toán các tỷ lệ hấp thụ ở 260 nm đến đó ở 280 nm
(A260 / A280).
DNA chiết xuất đã được xác nhận cho ứng dụng PCR như
mô tả bởi Mei et al. (2004). Chuẩn bị gel polyacrylamide
và điện di sản phẩm PCR được thực hiện theo
Benbouza et al. (2006). Gel đã bạc màu theo các
bước được mô tả bởi Liang et al. (2014)