The infected fish was alive and act

The infected fish was alive and active when it was caught. Upon
reaching the laboratory, the fish was photographed and frozen immediately
until further observations. After thawing, it was observed
under a binocular microscope (SZX-7, Olympus, Tokyo, Japan) and
photographed (DP21, Olympus). For SEM observation, several parts
of the flesh near the body surface were excised with a knife, fixed in
glutaraldehyde (2% in 0.1 Mcacodylate buffer, pH 7.4), and dehydrated
through a graded ethanol series (50%, 70%, 90%, 95%, and 100% each for
5 min). Tissues were then dried in a t-butanol dryer (JFD-320, JEOL,
Tokyo, Japan) and coated with Pt in a coater (JFC-1600, JEOL). Observations
were made under a SEM (JSM-6390LV, JEOL). For histological observation,
the thawed fish tissue was fixed in 10% neutralized formalin
and embedded in paraffin according to routine procedures. The sections
were cut by a microtome and stained with hematoxylin and eosin solutions.
Formolecular identification, two green spots, each taken fromthe
body surface andwithin themuscles, and greenmucilage in the fish palatewere
retrieved with knives. Theywere directly transferred to 1.5 ml
microtubes and total DNAwas extracted using a plant DNA isolation reagent
(Takara-Bio, Shiga, Japan). A total 20 ng of DNA was subjected to
PCR and 18S rRNA genewas amplified using 16S1N and 16S2N primers
[1], following a PCR protocol by Takishita et al. [2]. The purified PCR
amplicons were cloned using a TOPO TA Cloning Kit (Invitrogen, Carlsbad,
CA, USA). Ten clones for each green spot were then sequenced
using an ABI Genetic Analyzer 3130xl (PE Applied Biosystems, Foster
City, CA, USA) using a BigDye™ Terminator Cycle Sequencing Ready
Reaction Kit (PE Applied Biosystems). According to this primary
analysis, the present algae were related with a group within the genus
Desmodesmus. Further taxonomic identification was carried out based
on the internal transcribed spacer (ITS)-2 region of rRNA gene, including
partial 5.8S rRNA gene according to El Semary [3] using primers
ITS-2 forward and ITS-2 reverse [4]. The sequences generated were
deposited in GenBank/EMBL/DDBJ under accession number AB818541
for 18S rRNA gene and AB818542 for 5.8S-ITS2.

Results (Thai) 1:

ปลาที่ติดเชื้อยังมีชีวิตอยู่และใช้งานเมื่อมันถูกจับได้ เมื่อถึงห้องปฏิบัติการ
ปลาถูกถ่ายภาพและแช่แข็งทันที
จนสังเกตต่อไป หลังจากละลายมันก็สังเกต
ภายใต้กล้องจุลทรรศน์กล้องสองตา (SZX-7, กล้อง Olympus, โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และถ่ายภาพ
(dp21, กล้อง Olympus) เพื่อ sem สังเกตหลายส่วน
ของเนื้อหนังอยู่ใกล้พื้นผิวของร่างกายถูกตัดด้วยมีดคงที่ใน
glutaraldehyde (2% ใน 0.1 บัฟเฟอร์ mcacodylate, ph 7.4) และแห้ง
ผ่านชุดเอทานอลให้คะแนน (50%, 70%, 90%, 95% และ 100% แต่ละ
5 นาที) เนื้อเยื่อแห้งในเครื่องเป่าเสื้อบิวทานอ (JFD-320, JEOL
โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และเคลือบด้วย pt ใน Coater (jfc-1600, JEOL)
สังเกตได้ทำภายใต้ sem (JSM-6390lv, JEOL) สำหรับการสังเกตเนื้อเยื่อ
เนื้อเยื่อปลาละลายได้รับการแก้ไขใน 10% ฟอร์มาล​​ินเป็นกลาง
และฝังตัวอยู่ในพาราฟินตามขั้นตอนตามปกติ ส่วนที่ถูกตัด
โดย microtome และย้อมด้วยสี hematoxylin และ eosin โซลูชั่น.
formolecular ระบุสองจุดสีเขียวแต่ละนำ fromthe
ผิวกาย andwithin themuscles และ greenmucilage ใน palatewere ปลา
เรียกด้วยมีดtheywere โอนโดยตรงกับ 1.5 มล.
ไมโครและ dnawas รวมสกัดโดยใช้โรงงานการแยกดีเอ็นเอสาร
(TAKARA ชีวภาพชิ, ญี​​่ปุ่น) รวม 20 ng ของ dna ก็จะถูก
pcr และ genewas rrna 18s ขยายการใช้ 16s1n และ 16s2n ไพรเมอร์
[1] ต่อไปนี้โปรโตคอล pcr โดย takishita ตอัล [2] บริสุทธิ์ pcr
amplicons ถูกโคลนใช้โทโป ta โคลนชุด (Invitrogen, คาร์ลส, แคลิฟอร์เนีย
,usa) สิบโคลนสำหรับจุดสีเขียวแต่ละมีลำดับขั้นตอนแล้ว
ใช้ ABI 3130xl วิเคราะห์ทางพันธุกรรม (PE ศาสตร์ใช้อุปถัมภ์
เมืองแคลิฟอร์เนีย, usa) โดยใช้ bigdye ™ลำดับวงจรท้ายพร้อมชุด
ปฏิกิริยา (PE ศาสตร์ประยุกต์) ตามการวิเคราะห์
หลักนี้สาหร่ายในปัจจุบันมีความสัมพันธ์กับกลุ่มภายในจำพวก
Desmodesmus ระบุการจัดหมวดหมู่ต่อไปคือการดำเนินการตาม
ในการคัดลอก spacer ภายใน (ของ) -2 ภูมิภาคของยีน rrna รวมทั้งบางส่วน
5.8S ยีน rrna ตามเอ semary [3] การใช้ไพรเมอร์ของ
-2 ไปข้างหน้าและย้อนกลับ-2 [4] ลำดับที่สร้างขึ้นถูก
ฝากไว้ใน genbank / EMBL / ddbj ภายใต้หมายเลขภาคยานุวัติ ab818541
เพื่อ 18s ยีน rrna และ ab818542 เพื่อ 5.8S-ITS2

Results (Thai) 2:

ปลาติดเชื้อมีชีวิตอยู่ และใช้งานเมื่อถูกจับ เมื่อ
ถึงห้องปฏิบัติการ ปลาถูกถ่าย และแช่แข็งทันที
จนข้อสังเกตเพิ่มเติม หลัง thawing มันถูกสังเกต
ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ส่องทางไกล (SZX-7 โอลิมปัส โตเกียว ญี่ปุ่น) และ
photographed (DP21 โอลิมปัส) สำหรับเก็บข้อมูล SEM หลายส่วน
ของเนื้อใกล้พื้นผิวของร่างกายถูก excised ด้วยมีด ถาวรใน
glutaraldehyde (2% ในบัฟเฟอร์ 0.1 Mcacodylate ค่า pH 7.4), และอบแห้ง
ผ่านชุดมีการจัดระดับเอทานอล (50%, 70%, 90%, 95% และ 100% แต่ละสำหรับ
5 นาที) เนื้อเยื่อถูกอบแห้งในตัว t-บิวทานอเป่า (JFD-320, JEOL,
โตเกียว ญี่ปุ่น) และเคลือบ ด้วย Pt ใน coater (JFC 1600, JEOL) สังเกต
ทำภายใต้ SEM (JSM 6390LV, JEOL) สำหรับการสังเกตสรีรวิทยา,
เนื้อเยื่อปลา thawed กำหนดใน 10% neutralized formalin
และฝังในพาราฟินตามขั้นตอนตามปกติ ส่วน
ตัด โดย microtome และสีกับ hematoxylin และ eosin โซลูชั่นการ
Formolecular รหัส สองสีเขียวจุด แต่ละถ่ายจาก
ร่างกายผิว andwithin themuscles และ greenmucilage ใน palatewere ปลา
เรียก ด้วยมีด โอนโดยตรงไป 1.5 ml Theywere
microtubes และรวม DNAwas สกัดโดยใช้รีเอเจนต์แยกดีเอ็นเอโรงงาน
(Takara ชีวภาพ ชิงะ ญี่ปุ่น) 20 รวม ng ของดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้
PCR และ genewas rRNA 18S ขยายโดยใช้ไพรเมอร์ 16S1N และ 16S2N
[1], ตามโพรโทคอ PCR โดย Takishita et al. [2] PCR บริสุทธิ์
amplicons ถูก cloned ใช้เดิน TA โคลนชุด (Invitrogen ลสแบ,
CA สหรัฐอเมริกา) โคลน 10 สำหรับแต่ละจุดสีเขียวแล้วก็เรียงลำดับ
ใช้ 3130xl การวิเคราะห์ทางพันธุกรรม ABI (Biosystems ใช้ PE ฟอสเตอร์
ซิตี้ CA, USA) โดยใช้การ BigDye ™เทอร์มิเนเตอร์วงจรลำดับเบสพร้อม
ชุดปฏิกิริยา (PE ใช้ Biosystems) ตามหลักนี้
วิเคราะห์ สาหร่ายปัจจุบันเกี่ยวข้องกับกลุ่มภายในตระกูลนี้
Desmodesmus ต่ออนุกรมวิธานรหัสถูกดำเนินตาม
ทับบนการภายในศัพท์เป็นตัวเว้นวรรคภูมิภาค-2 (ของ) ของยีนใน rRNA รวม
5.8S บางส่วนการยีน rRNA ตาม Semary เอล [3] ที่ใช้ไพรเมอร์
ของ-2 ข้างหน้าและ 2 ของย้อนหลัง [4] ลำดับที่สร้างถูก
ฝากใน GenBank/EMBL/DDBJ ภายใต้หมายเลขทะเบียน AB818541
18S rRNA ยีนและ AB818542 สำหรับ 5.8S-ITS2

Results (Thai) 3:

ปลาที่ติดที่ยังมีชีวิตอยู่และการใช้งานเมื่อถูกจับ
ซึ่งจะช่วยวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการเมื่อมาถึงที่ปลาจะได้ถ่ายรูปและแช่แข็งทันที
ซึ่งจะช่วยเพิ่มเติมจนกว่าการสังเกตการณ์ หลังจากละลายมันเห็น
อยู่ ภายใต้ กล้องส่องทางไกลกล้องจุลทรรศน์( szx - 7 ที่กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น Olympus )และ
ซึ่งจะช่วยถ่าย ภาพ ( DP 21 Olympus ) สำหรับการสังเกตการณ์ความหมายอย่างไรต่อหลายส่วนของเนื้อ
ซึ่งจะช่วยให้อยู่ใกล้กับพื้นผิวส่วนที่เป็น excised ด้วยมีดที่อยู่ใน
glutaraldehyde ( 2% ใน 0.1 mcacodylate บัฟเฟอร์ pH 7.4 )และความร้อน
ผ่านเอทานอลที่ผลิตไฟฟ้าราชบุรี( 50% 70% 90% 95% และ 100% ของแต่ละนาที
5 ) เนื้อเยื่อก็แห้งใน T - butanol เป่าผม( jfd -320 jeol
กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)และเคลือบด้วย PT ใน MMX ( jfc -1600 jeol )แล้ว การสังเกตการณ์
ซึ่งจะช่วยได้ถูกสร้างขึ้นตามความหมายอย่างไรต่อ( สำนักงาน -6390 LV jeol ) สำหรับการสังเกตการณ์เกี่ยวกับวิชาฮิซทอล - โอะจิ
ปลาที่เนื้อเยื่อละลายอยู่ 10% ค่าเป็นกลางผสมขมิ้นน้ำอ้อยลาเท็กซ์ฟอร์มาลิน
และฝังอยู่ในน้ำมันก๊าดตามขั้นตอนเป็นประจำ ส่วนที่
ก็ถูกตัดด้วยสีและ microtome พร้อมด้วย hematoxylin eosin และโซลูชัน.การระบุตัวตน
formolecular สองจุดสีเขียว themuscles andwithin จากเนื้อครีมจะลงบนพื้นผิว
ซึ่งจะช่วยนำตัวแต่ละตัวและ greenmucilage ใน palatewere ปลา
ซึ่งจะช่วยดึงข้อมูลด้วยมีดdnawas theywere โดยตรงจะพาท่านไปส่งถึงยัง 1.5 มล.
microtubes และทั้งหมดถูกแยกออกมาโดยใช้ยาซัด
(แยก DNA โรงงาน takara-bio shiga ญี่ปุ่น) 20 ไนจีเรียรวมของดีเอ็นเอที่ถูกเพื่อ
pcr และ 18 S rrna genewas แอมพลิฟายโดยใช้ primers 16 S 1 N และ 16 S 2 N
[ 1 ],โปรโตคอลต่อไปนี้: pcr โดย takishita et al . [ 2 ]. amplicons pcr
บริสุทธิ์ก็ถูกโคลนโดยใช้ TOPO ตาชุดการโคลนมนุษย์( invitrogen , Carlsbad Flower Fields
ไม่USA ) สิบโคลนสีเขียวสำหรับแต่ละจุดให้บริการอยู่แล้วอักษรเรียงลำดับ\
การใช้ที่ ABI ยีนตัววิเคราะห์ความสมบูรณ์ 3130 ขนาด XL ( PE ใช้ biosystems ,บุญธรรม
เมือง, CA , USA )โดยใช้ bigdye™ เพชฌฆาตขี่จักรยานการจัดลำดับพร้อม
ปฏิกริยาชุด( PE ใช้ biosystems ) ตามหลักการวิเคราะห์นี้พืชทะเลจำพวกเห็ดรา
ซึ่งจะช่วยในปัจจุบันที่มีความสัมพันธ์กับกลุ่มที่อยู่ ภายใน พืชที่
desmodesmus taxonomic เพิ่มเติมการระบุตัวตนก็ถูกหามออกมาใช้
ตามมาตรฐานภายใน ที่ถอดสคริปต์แล้วแผ่นคั่น() 2 - 2 พื้นที่ของยีน rrna รวมถึง
ยีนบางส่วน 5.8 S rrna ตาม El semary [ 3 ]โดยใช้ primers
2 - 2 ที่ส่งต่อและ 2 ย้อนกลับของพื้นที่[ 4 ]. ซีเควนซ์ที่สร้างขึ้นเป็น
ฝากไว้ในเลี้ยงดู ddbj / embl /ตาม ภาค ยานุวัติหมายเลข AB 818541
สำหรับ 18 S rrna ยีนและ AB 818542 สำหรับ 5.8 S - ที่ 2