PCR is usually performed on purifie

PCR is usually performed on purified DNA. However, the extraction of DNA from whole blood is time consuming and involves the risk of contamination at every step. Hence, it is desirable to amplify DNA directly from whole blood. Earlier, investigators tried to achieve this target by either pretreatment of whole blood samples with different agents or by altering the conventional thermal cyclic conditions. This would make the technique cumbersome and time consuming. Here, we describe a simple protocol to amplify DNA directly from whole blood without the need of pretreatment. PCR buffer system was optimized in the laboratory and Apolipoprotein B gene was used as a model for this experiment. 480 bp was the target site for amplification. Fresh whole blood samples were used both from healthy and diseased individuals (coronary artery disease patients). Successful amplification was achieved with 1 μl volume of whole blood and it was comparable to that of genomic DNA. No pretreatment of whole blood samples was required with the optimized buffer system. 3 mM concentration of MgCl2 was observed to be optimal and hence used in the reaction mixture. Amplification was relatively better with this buffer system as compared to that of commercially available PCR buffer. With the present technique, amplicon detection did not require the centrifugation/dilution of the PCR products which further saves time. Successful amplification was achieved in both the healthy and diseased blood samples, indicating the robustness of the technique as changed blood composition and presence of increased inhibitory molecules in the diseased state did not seem to affect the efficacy of the present technique. In conclusion, as compared to the existing protocols for whole blood PCR, the present technique is relatively novel, simple, requires minimal steps and eliminates the need for additional standardizations.

Results (Thai) 1:

pcr มักจะมีการดำเนินการเกี่ยวกับดีเอ็นเอบริสุทธิ์ แต่การสกัดดีเอ็นเอจากเลือดทั้งหมดจะใช้เวลานานและเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงของการปนเปื้อนในทุกขั้นตอน จึงเป็นที่พึงปรารถนาที่จะขยาย dna โดยตรงจากเลือด ก่อนหน้านี้นักวิจัยพยายามที่จะบรรลุเป้าหมายนี้โดยการปรับสภาพของตัวอย่างเลือดทั้งหมดที่มีตัวแทนที่แตกต่างกันอย่างใดอย่างหนึ่งหรือโดยการเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขการชุมนุมวงจรความร้อน นี้จะทำให้เทคนิคที่ยุ่งยากและใช้เวลานาน ที่นี่เราจะอธิบายโปรโตคอลที่ง่ายในการขยาย dna โดยตรงจากเลือดโดยไม่ต้องปรับสภาพระบบบัฟเฟอร์ pcr ถูกปรับให้เหมาะสมในห้องปฏิบัติการและ apolipoprotein ขยีนที่ใช้เป็นแบบจำลองสำหรับการทดลองนี้ 480 bp เป็นเว็บไซต์เป้าหมายสำหรับการขยาย ตัวอย่างเลือดสดทั้งหมดถูกนำมาใช้ทั้งจากบุคคลที่มีสุขภาพดีและมีอาการของโรค (ผู้ป่วยโรคหลอดเลือดหัวใจ) เครื่องขยายเสียงที่ประสบความสำเร็จได้รับการประสบความสำเร็จกับปริมาณ 1 ไมโครลิตรของเลือดและมันก็เปรียบกับของดีเอ็นเอจีโนมการปรับสภาพของตัวอย่างเลือดไม่ถูกต้องกับระบบบัฟเฟอร์ที่ดีที่สุด 3 มม. ความเข้มข้นของ MgCl2 ก็สังเกตเห็นจะเป็นที่ดีที่สุดและด้วยเหตุนี้การใช้ในการผสมปฏิกิริยา เครื่องขยายเสียงค่อนข้างดีขึ้นด้วยระบบบัฟเฟอร์นี้เมื่อเทียบกับที่ของบัฟเฟอร์ pcr ใช้ในเชิงพาณิชย์ ด้วยเทคนิคปัจจุบันตรวจสอบ amplicon ไม่จำเป็นต้องปั่น / ลดสัดส่วนของผลิตภัณฑ์ pcr ซึ่งต่อไปจะช่วยประหยัดเวลา เครื่องขยายเสียงที่ประสบความสำเร็จคือความสำเร็จทั้งในตัวอย่างเลือดมีสุขภาพดีและมีอาการของโรคแสดงให้เห็นความแข็งแรงของเทคนิคเป็นองค์ประกอบของเลือดที่มีการเปลี่ยนแปลงและการปรากฏตัวของโมเลกุลยับยั้งการเพิ่มขึ้นในการเป็นโรครัฐดูเหมือนจะไม่ส่งผลกระทบต่อการรับรู้ความสามารถของเทคนิคในปัจจุบันในการสรุปเมื่อเทียบกับโปรโตคอลที่มีอยู่ pcr เลือดทั้งเทคนิคในปัจจุบันที่ค่อนข้างใหม่ง่ายต้องใช้ขั้นตอนน้อยที่สุดและลดความจำเป็นในการกำหนดมาตรฐานเพิ่มเติม

Results (Thai) 2:

มักจะมีทำ PCR ในดีเอ็นเอบริสุทธิ์ อย่างไรก็ตาม การสกัดดีเอ็นเอจากเลือดทั้งหมดใช้เวลานาน และเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงจากการปนเปื้อนในทุกขั้นตอน ดังนั้น จะต้องขยายดีเอ็นเอจากเลือดทั้งหมด ก่อนหน้านี้ นักสืบพยายามที่จะบรรลุเป้าหมายนี้ โดยการ pretreatment เลือดทั้งตัวอย่างกับตัวแทนต่าง ๆ หรือเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขทุกรอบความร้อนธรรมดา นี้จะทำให้เทคนิคยุ่งยาก และใช้เวลานาน ที่นี่ เราอธิบายถึงโปรโตคอลอย่างขยายดีเอ็นเอจากเลือดทั้งหมดโดยไม่จำเป็นต้อง pretreatment ระบบบัฟเฟอร์ PCR ถูกปรับในห้องปฏิบัติการ และยีน Apolipoprotein B ถูกใช้เป็นแบบในการทดลองนี้ 480 bp มีไซต์เป้าหมายสำหรับขยาย ใช้ตัวอย่างเลือดทั้งสดทั้งจากบุคคลที่มีสุขภาพดี และป่วย (ผู้ป่วยโรคหลอดเลือดหัวใจ) ขยายความสำเร็จสำเร็จ ด้วย 1 μl ปริมาตรของเลือดทั้งหมด และก็เทียบได้กับที่ของ genomic DNA Pretreatment เลือดทั้งหมดอย่างไม่ถูกต้องกับระบบบัฟเฟอร์ให้เหมาะ มม. 3 ความเข้มข้นของ MgCl2 ที่สังเกตให้ดีที่สุด และใช้ส่วนผสมของปฏิกิริยาดังนั้น ขยายได้ค่อนข้างดีขึ้น ด้วยระบบบัฟเฟอร์นี้เมื่อเทียบกับของบัฟเฟอร์ PCR ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ ด้วยเทคนิคการนำเสนอ ตรวจ amplicon ไม่ได้ต้องการ centrifugation/เจือจาง ผลิตภัณฑ์ PCR ซึ่งประหยัดเวลาเพิ่มเติม ขยายความสำเร็จสำเร็จในตัวทั้งมีสุขภาพดี และเส้นเลือดอย่าง บ่งชี้เสถียรภาพเทคนิคเป็นองค์ประกอบของเลือดเปลี่ยนแปลง และสถานะของโมเลกุลเพิ่มลิปกลอสไขในเส้นไม่ได้ดูเหมือนไม่มีผลต่อประสิทธิภาพของเทคนิคการนำเสนอ เบียดเบียน เมื่อเทียบกับโพรโทคอที่มีอยู่ในเลือดทั้ง PCR เทคนิคการนำเสนอค่อนข้างนวนิยาย เรื่อง ต้องมีขั้นตอนน้อยที่สุด และการ standardizations เพิ่มเติม

Results (Thai) 3:

pcr จะมีการดำเนินการในดีเอ็นเอบริสุทธิ์โดยปกติแล้ว แต่ถึงอย่างไรก็ตามการที่ของดีเอ็นเอจากเลือดทั้งหมดเป็นเวลาต้องใช้เวลาและมีส่วนเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงของการปนเปื้อนในทุกขั้นตอน ดังนั้นจึงมีความเหมาะสมที่จะขยายดีเอ็นเอจากเลือดโดยตรงทั้งหมด ก่อนหน้าเจ้าหน้าที่สอบสวนพยายามที่จะบรรลุเป้าหมายนี้ได้โดยทุกอย่างใดอย่างหนึ่งของตัวอย่างเลือดทั้งหมดพร้อมด้วย Agent อื่นหรือโดยการเปลี่ยนแปลงเงื่อนไขวนระบายความร้อนทั่วไป โรงแรมแห่งนี้จะทำให้เทคนิคที่มีความยุ่งยากและเสียเวลา ณที่นี่เราอธิบายถึงโปรโตคอลแบบเรียบง่ายในการเพิ่มดีเอ็นเอจากเลือดโดยตรงทั้งหมดโดยไม่จำเป็นต้องมีทุกระบบ Buffer pcr เป็นการปรับแต่งในห้องปฏิบัติการและยีน apolipoprotein B ก็ใช้เป็นแบบอย่างสำหรับการทดลองนี้ 480 BP เป็นเป้าหมายสำหรับการขยายสัญญาณเสียง ตัวอย่างเลือดสดทั้งหมดได้ถูกนำมาใช้ทั้งจากผู้ใช้บริการแบบเฉพาะรายและมี สุขภาพ ดีมีโรค(ผู้ป่วยโรคหลอดเลือดหัวใจตีบ) ใช้การขยายเสียงประสบความสำเร็จเป็นความสำเร็จพร้อมด้วยระดับเสียง 1 μl เลือดทั้งหมดและอยู่ในระดับใกล้เคียงกับดีเอ็นเอที่ genomicไม่มีทุกตัวอย่างเลือดทั้งหมดจึงมีความจำเป็นพร้อมด้วยระบบ Buffer ที่ปรับแต่งได้ 3 มม.ของสมาธิ mgcl 2 พบว่าจะได้อย่างเต็ม ประสิทธิภาพ และดังนั้นจึงนำมาใช้ในการผสมผสานกันระหว่างการตอบสนอง ใช้การขยายเสียงเป็นอยู่ดีขึ้นด้วยระบบบัฟเฟอร์นี้เมื่อเทียบกับบัฟเฟอร์ pcr มีวางจำหน่ายที่ พร้อมด้วยเทคนิคปัจจุบันการตรวจจับ amplicon ไม่ต้องมัวหมองผลิตของ ผลิตภัณฑ์ pcr ซึ่งต่อไปจะช่วยประหยัดเวลา ใช้การขยายเสียงประสบความสำเร็จเป็นความสำเร็จในตัวอย่างเลือดและมี สุขภาพ ดีมีโรคที่แสดงถึงความแข็งแกร่งทั้งของเทคนิคที่เป็นการประชุมและการเขียนเรียงความเลือดการเปลี่ยนโมเลกุลของ inhibitory เพิ่มขึ้นในรัฐมีโรคที่ไม่มีผลกระทบต่อ ประสิทธิภาพ ของเทคนิคนี้ในบทสรุปเมื่อเทียบกับโปรโตคอลที่มีอยู่สำหรับ pcr เลือดทั้งเทคนิคในปัจจุบันที่มีลักษณะใหม่แบบเรียบง่ายจำเป็นต้องทำตามขั้นตอนไม่มากนักและไม่จำเป็นต้อง standardizations เพิ่มเติม