2.4. PCR-RFLP analysisThe 331-bp fr

2.4. PCR-RFLP analysis
The 331-bp fragments amplified with the CypbL/CypbH primer
set were used for RFLP analysis. All of the fragments were aligned
using the software DNAMAN (Lynnon Corporation, Quebec, Canada)
to detect restriction sites specific to each species (Chen et al.,
2012). Each RFLP reaction was performed in a 20-mL reaction volume
with 6 mL of the PCR product, 9 mL of sterilized ddH2O, 3 mL of
10 digestion buffer, and 1 mL each of the enzymes NlaIII (CATG;)
and MseI (T;TAA) (Fermentas, Ontario, Canada). The mixtures
were incubated for co-digestion at 37 C for 30 min followed by the
inactivation of the enzymes at 80 C for 5 min. The PCR-RFLP
products were stored at 20 C until further analysis

Results (Thai) 1:

2.4 การการวิเคราะห์ PCR-RFLP331 bp ชิ้นส่วนขยายกับพื้น CypbL/CypbHชุดที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ RFLP ชิ้นส่วนทั้งหมดถูกจัดโดยใช้ซอฟต์แวร์ DNAMAN (Lynnon Corporation ควิเบก แคนาดา)เพื่อตรวจสอบเว็บไซต์ข้อจำกัดเฉพาะของแต่ละสายพันธุ์ (Chen et al.,2012) การทำปฏิกิริยาแต่ละ RFLP ในปริมาณ 20 มล.ปฏิกิริยากับ 6 mL ผลิตภัณฑ์ PCR, 9 mL ของ sterilized ddH2O, mL 3 ของบัฟเฟอร์ย่อยอาหาร 10 และ 1 mL แต่ละเอนไซม์ NlaIII (CATG;)และ MseI (Tแหลมยายณี) (Fermentas, Ontario ประเทศแคนาดา) ส่วนผสมมี incubated สำหรับย่อยอาหารร่วมที่ 37 C สำหรับ 30 นาทีตามด้วยการยกเลิกการเรียกเอนไซม์ที่ 80 C สำหรับ 5 นาที PCR-RFLPสินค้าถูกเก็บไว้ที่ 20 C จนถึงการวิเคราะห์ต่อไป

Results (Thai) 2:

2.4 การวิเคราะห์ PCR-RFLP
ชิ้นส่วน 331-BP ขยายด้วยไพรเมอร์ CypbL / CypbH
ชุดถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ RFLP ทุกชิ้นส่วนถูกจัดชิด
โดยใช้ซอฟแวร์ DNAMAN (Lynnon คอร์ปอเรชั่นควิเบก, แคนาดา)
ในการตรวจสอบสถานที่ จำกัด เฉพาะในแต่ละชนิด (เฉิน et al.,
2012) ปฏิกิริยา RFLP แต่ละคนได้ดำเนินการในปริมาณปฏิกิริยา 20 มิลลิลิตร
มี 6 มิลลิลิตรของผลิตภัณฑ์ PCR, 9 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อ ddH2O 3 มิลลิลิตร
10? บัฟเฟอร์ย่อยอาหารและ 1 มิลลิลิตรแต่ละเอนไซม์ NlaIII (CATG;)
และ MseI (T; TAA) (Fermentas, Ontario, แคนาดา) ผสม
ถูกบ่มเป็นเวลาร่วมการย่อยอาหารที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วย
การใช้งานของเอนไซม์ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที PCR-RFLP
ผลิตภัณฑ์ถูกเก็บไว้ที่? 20? C จนกว่าจะวิเคราะห์ต่อไป

Results (Thai) 3:

2.4 . การวิเคราะห์ว่า
331 bp ชิ้นส่วนขยายกับ cypbl / cypbh รองพื้น
ชุด สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ RFLP . ทั้งหมดของชิ้นส่วน ชิด
ใช้ซอฟต์แวร์ dnaman ( lynnon Corporation , ควิเบก , แคนาดา )
ตรวจสอบเว็บไซต์ข้อ จำกัด เฉพาะแต่ละชนิด ( Chen et al . ,
2012 ) รวมปฏิกิริยาที่แสดงในแต่ละปฏิกิริยา ปริมาณ 20 ml
กับ 6 มิลลิลิตรผลิตภัณฑ์ PCR ,9 มิลลิลิตร ddh2o ฆ่าเชื้อ 3 มล.
10  การย่อยอาหาร บัฟเฟอร์ และ 1 มิลลิลิตรของแต่ละเอนไซม์ nlaiii ( catg ; )
msei และ ( t ; โคมไฟ ) ( fermentas , Ontario , แคนาดา ) ส่วนผสม
ถูกบ่มที่ 37 สำหรับการย่อยอาหาร Co  C เป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยการยับยั้งของเอนไซม์
80  องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์ว่า
เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C ถึง   การวิเคราะห์เพิ่มเติม