3.2. MALDI MALDImatrixapplicationon

3.2. MALDI MALDImatrixapplicationonhydrophobic surfacesforMSIexperiments Investigatingproteinadsorptiononpolymersurfacesby MALDI-TOFMSrequiresthoroughoptimizationofsample preparationparticularlyduethelowamountspresent.The most criticalstepisthegenerationofahomogenousMALDI matrix layeronalargesamplesurface.Thehydrophobicsur- face ofthePE-UHMWsamplesfavoredtheformationofa liquid film if the matrix was not carefully applied droplet by droplet. Especially folded regions, which can occur after applying the thin polymer samples to the ITO slides after cryo- microtomy, provide problems regarding matrix crystallization. MALDI matrix solution application with slowly evaporating solvents leads to a matrix flow leaving no matrix on folded areas but large crystals on planar regions. This can ofcourse favor disadvantageous analyte diffusion. Additionally it is known that protein desorption/ionization during the MALDI processismoreeffectiveafterincorporatinganalytesinsol- ventsystemscontainingacidiccomponents,asaconsequence of efficientprotonation.Onthepolymersurfaces,however, organicsolventsystemswereshowninpreliminaryresults to havebettercrystallizationproperties,mostlikelydueto their muchhighervolatility [23]. Furtherstudiesshowednow that organicsolventsystemsrevealedverysmallcrystalsizes and homogenouscoveringofthepolymericmaterial,while aqueous solventsystemsresultedinimprovedsignalquality but lessfavorablesweetspotformationincombinationwith sometimes verysmallareascoveredwithhighconcentrations of matrix.Thematrix/solventsystemturnedouttobeper- forming bestwithrespecttosignalquality(signal-to-noise, intensity andmassresolution),surfacecoverageandapplica- bility wasasolutionofACN/aqueous0.1%TFAataratioof 70/30 forbothHCCAandSA. Formatrixapplicationthepiezoprinter(Chip1000)and the airbrushinstrumentwerecomparedwithspecialrespect to analytediffusion.Topreventtheformationofathinsol- ventlayerontopofthepolymerduetodropletstricklingaway, the distancebetweensinglematrixdroplets(approx.80pL) applied withthepiezoprinterwassetto100 _m. Tocover the totalareaof25mm2 long printingoperationtimeswere necessary(upto5h).Forthis,analytediffusionwasinves- tigatedwhenusinganairbrushsysteminsteadofthepiezo printer forMALDImatrixdepositiontoreduceoveralloperat- ing times.Apeptidestandard,500fMleucine-enkephalin,was depositedonanITOtargetwiththepiezoprinterusingthe areaprintmodeoftheinstrument,whichleadstoacomplete coveringofapre-definedarea.Thisareawasthencovered with HCCAasMALDImatrixusingtheairbrush.Weobserved a recognizableliquidlayerofsolventontheITOtarget,which evaporatedmoreslowlythantheMALDImatrix/solventsys- tems appliedbythepiezoprinter.Thusafterdrying,light microscopyrevealedathinmatrixlayerwithhomogeneous crystaldistribution.MoreoverMSIexperimentsdemonstrated (Fig.3) thattheairbrushrepresentsamatrixapplicationdevice sufficient formatrixapplicationwithoutsignificantanalyte dislocation atalateralresolutionof100 _m. Theverysharp edgedareavisualizedforthepeptideionemphasizestheaccu- racyofpeptideapplicationbythepiezoprinter.Theapplied peptidewasperfectlypreservedanddetectedafterMALDI matrix application.

Results (Thai) 1:

3.2. MALDI MALDImatrixapplicationonhydrophobic surfacesforMSIexperiments preparationparticularlyduethelowamountspresent Investigatingproteinadsorptiononpolymersurfacesby MALDI-TOFMSrequiresthoroughoptimizationofsampleสุด criticalstepisthegenerationofahomogenousMALDI เมตริกซ์ layeronalargesamplesurfaceหน้า Thehydrophobicsur ofthePE UHMWsamplesfavoredtheformationofa เหลวหนังถ้าเมตริกซ์ไม่รอบคอบใช้โดยหยดหยด ภูมิภาคโดยเฉพาะอย่างยิ่งพับ ซึ่งสามารถเกิดขึ้นหลังจากใช้ตัวอย่างพอลิเมอร์บาง ๆ กับ ITO ภาพนิ่งหลังจาก cryo microtomy มีปัญหาเกี่ยวกับการตกผลึกของเมตริกซ์ MALDI เมตริกซ์โซลูชั่นแอพลิเคชัน มีการระเหยหรือสารทำละลายช้าที่นำไปสู่ขั้นตอนการเมตริกซ์เมตริกซ์ไม่ออกจากพื้นที่พับแต่ผลึกขนาดใหญ่บนพื้นที่ระนาบ นี้สามารถเก่งโปรดปราน disadvantageous analyte แพร่ นอกจากนี้เป็นที่รู้จักกันว่าโปรตีน desorption/ionization ในระหว่าง MALDI processismoreeffectiveafterincorporatinganalytesinsol-ventsystemscontainingacidiccomponents, asaconsequence efficientprotonationOnthepolymersurfaces อย่างไรก็ตาม organicsolventsystemswereshowninpreliminaryresults havebettercrystallizationproperties, mostlikelydueto เพื่อ muchhighervolatility ของพวกเขา [23] Furtherstudiesshowednow ที่ organicsolventsystemsrevealedverysmallcrystalsizes และ homogenouscoveringofthepolymericmaterial ขณะอควี solventsystemsresultedinimprovedsignalquality แต่ lessfavorablesweetspotformationincombinationwith verysmallareascoveredwithhighconcentrations บางครั้งของเมทริกซ์Thematrix/solventsystemturnedouttobeper-bestwithrespecttosignalquality (สัญญาณสัญญาณเสียงรบกวน ความเข้ม andmassresolution), forbothHCCAandSA surfacecoverageandapplica bility wasasolutionofACN/aqueous0.1%TFAataratioof 70/30 ขึ้นรูป Formatrixapplicationthepiezoprinter (Chip1000) และ airbrushinstrumentwerecomparedwithspecialrespect ถึง analytediffusionTopreventtheformationofathinsol-ventlayerontopofthepolymerduetodropletstricklingaway, distancebetweensinglematrixdroplets(approx.80pL) ที่ใช้ withthepiezoprinterwassetto100 _m Tocover necessary(upto5h) printingoperationtimeswere ยาว totalareaof25mm2Forthis, analytediffusionwasinves tigatedwhenusinganairbrushsysteminsteadofthepiezo เครื่องพิมพ์ forMALDImatrixdepositiontoreduceoveralloperat-ing ครั้งApeptidestandard, 500fMleucine-enkephalin ถูก depositedonanITOtargetwiththepiezoprinterusingthe areaprintmodeoftheinstrument, whichleadstoacomplete coveringofapre-definedareaThisareawasthencovered กับ HCCAasMALDImatrixusingtheairbrush.Weobserved recognizableliquidlayerofsolventontheITOtarget, appliedbythepiezoprinter evaporatedmoreslowlythantheMALDImatrix/solventsys-สินใดThusafterdrying, microscopyrevealedathinmatrixlayerwithhomogeneous ไฟ crystaldistributionMoreoverMSIexperimentsdemonstrated (Fig.3) thattheairbrushrepresentsamatrixapplicationdevice พอ formatrixapplicationwithoutsignificantanalyte เคลื่อน atalateralresolutionof100 _m. Theverysharp edgedareavisualizedforthepeptideionemphasizestheaccu-racyofpeptideapplicationbythepiezoprinterTheapplied แอพลิเคชันเมตริกซ์ของ peptidewasperfectlypreservedanddetectedafterMALDI

Results (Thai) 2:

3.2 MALDI MALDImatrixapplicationonhydrophobic surfacesforMSIexperiments Investigatingproteinadsorptiononpolymersurfacesby MALDI-TOFMSrequiresthoroughoptimizationofsample preparationparticularlyduethelowamountspresent.The เมทริกซ์ criticalstepisthegenerationofahomogenousMALDI ที่สุด layeronalargesamplesurface.Thehydrophobicsur- เผชิญ ofthePE-UHMWsamplesfavoredtheformationofa ฟิล์มของเหลวหากเมทริกซ์ไม่ได้ถูกนำมาใช้อย่างระมัดระวังโดยหยดหยด ภูมิภาคพับโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่จะเกิดขึ้นหลังจากการใช้ตัวอย่างลิเมอร์บาง ITO สไลด์หลังจาก cryo- microtomy ให้เกิดปัญหาเกี่ยวกับการตกผลึกเมทริกซ์ การประยุกต์ใช้วิธีการแก้ปัญหาที่มีเมทริกซ์ MALDI ช้าระเหยตัวทำละลายที่นำไปสู่​​การไหลออกจากเมทริกซ์เมทริกซ์ในพื้นที่ที่ไม่มีการพับ แต่ผลึกขนาดใหญ่ในภูมิภาคภาพถ่าย ofcourse นี้สามารถให้ประโยชน์แก่การแพร่วิเคราะห์เสียเปรียบ นอกจากนี้ก็เป็นที่รู้จักกันว่าคายโปรตีน / ไอออนไนซ์ในช่วง ventsystemscontainingacidiccomponents MALDI processismoreeffectiveafterincorporatinganalytesinsol-, asaconsequence ของ efficientprotonation.Onthepolymersurfaces แต่ organicsolventsystemswereshowninpreliminaryresults เพื่อ havebettercrystallizationproperties, mostlikelydueto muchhighervolatility ของพวกเขา [23] Furtherstudiesshowednow ที่ organicsolventsystemsrevealedverysmallcrystalsizes และ homogenouscoveringofthepolymericmaterial ขณะ solventsystemsresultedinimprovedsignalquality น้ำ แต่ lessfavorablesweetspotformationincombinationwith verysmallareascoveredwithhighconcentrations บางครั้ง matrix.Thematrix / solventsystemturnedouttobeper- อดีต bestwithrespecttosignalquality (สัญญาณต่อเสียงรบกวน, andmassresolution เข้ม) surfacecoverageandapplica- รับผิดชอบ wasasolutionofACN / aqueous0.1% TFAataratioof 70/30 forbothHCCAandSA Formatrixapplicationthepiezoprinter (Chip1000) และ airbrushinstrumentwerecomparedwithspecialrespect เพื่อ ventlayerontopofthepolymerduetodropletstricklingaway analytediffusion.Topreventtheformationofathinsol-, distancebetweensinglematrixdroplets (approx.80pL) ใช้ withthepiezoprinterwassetto100 _M Tocover totalareaof25mm2 ยาว printingoperationtimeswere จำเป็น (upto5h) .Forthis, analytediffusionwasinves- tigatedwhenusinganairbrushsysteminsteadofthepiezo เครื่องพิมพ์ forMALDImatrixdepositiontoreduceoveralloperat- ไอเอ็นจี times.Apeptidestandard, 500fMleucine-enkephalin ถูก depositedonanITOtargetwiththepiezoprinterusingthe areaprintmodeoftheinstrument, whichleadstoacomplete coveringofapre-definedarea.Thisareawasthencovered กับ HCCAasMALDImatrixusingtheairbrush.Weobserved recognizableliquidlayerofsolventontheITOtarget ซึ่ง evaporatedmoreslowlythantheMALDImatrix / solventsys- TEMS appliedbythepiezoprinter.Thusafterdrying แสง microscopyrevealedathinmatrixlayerwithhomogeneous crystaldistribution.MoreoverMSIexperimentsdemonstrated (รูปที่ 3) thattheairbrushrepresentsamatrixapplicationdevice คลาดเคลื่อนเพียงพอ formatrixapplicationwithoutsignificantanalyte atalateralresolutionof100 _M Theverysharp edgedareavisualizedforthepeptideionemphasizestheaccu- racyofpeptideapplicationbythepiezoprinter.Theapplied peptidewasperfectlypreservedanddetectedafterMALDI ประยุกต์ใช้เมทริกซ์

Results (Thai) 3:

3.2 . มา ดิ maldimatrixapplicationonhydrophobic surfacesformsiexperiments investigatingproteinadsorptiononpolymersurfacesby มา ดิ tofmsrequiresthoroughoptimizationofsample preparationparticularlyduethelowamountspresent ส่วนใหญ่ criticalstepisthegenerationofahomogenousmaldi เมทริกซ์ layeronalargesamplesurface .thehydrophobicsur - หน้า ofthepe uhmwsamplesfavoredtheformationofa ของเหลวฟิล์มถ้าเมทริกซ์ไม่ได้ใช้อย่างระมัดระวังตัว โดยอนุภาค โดยเฉพาะอย่างยิ่ง พับในภูมิภาค ซึ่งจะเกิดขึ้นหลังจากการใช้ตัวอย่างพอลิเมอร์บางอิโตะภาพนิ่งหลังจากแช่แข็ง - microtomy มีปัญหาเกี่ยวกับเมทริกซ์การตกผลึกมา ดิชั่นค่อยๆระเหยตัวทำละลายสารละลายเมทริกซ์เมทริกซ์ไหลมาสู่ออกจากเมทริกซ์บนพื้นที่ระนาบผลึกขนาดใหญ่พับแต่ในภูมิภาค นี้สามารถ ofcourse โปรดปรานเบี้ยล่างครูแพร่ นอกจากนี้ยังเป็นที่รู้จักกันว่าโปรตีนการคาย / ไอออไนเซชันระหว่างมา ดิ ventsystemscontainingacidiccomponents processismoreeffectiveafterincorporatinganalytesinsol - ,asaconsequence ของ efficientprotonation . onthepolymersurfaces อย่างไรก็ตาม organicsolventsystemswereshowninpreliminaryresults เพื่อ havebettercrystallizationproperties mostlikelydueto ของพวกเขา , muchhighervolatility [ 23 ] furtherstudiesshowednow ที่ organicsolventsystemsrevealedverysmallcrystalsizes homogenouscoveringofthepolymericmaterial และ ,ในขณะที่น้ำ solventsystemsresultedinimprovedsignalquality แต่ lessfavorablesweetspotformationincombinationwith บางครั้ง verysmallareascoveredwithhighconcentrations ของ matrix.thematrix/solventsystemturnedouttobeper - สร้าง bestwithrespecttosignalquality ( สัญญาณความเข้ม andmassresolution ) surfacecoverageandapplica - bility wasasolutionofacn / aqueous0 .1 % tfaataratioof 70 / 30 forbothhccaandsa . formatrixapplicationthepiezoprinter ( chip1000 ) และ airbrushinstrumentwerecomparedwithspecialrespect เพื่อ analytediffusion.topreventtheformationofathinsol - ventlayerontopofthepolymerduetodropletstricklingaway , distancebetweensinglematrixdroplets ( approx.80pl ) withthepiezoprinterwassetto100 _m ประยุกต์ให้มี totalareaof25mm2 ยาว printingoperationtimeswere จำเป็น ( upto5h ) ใช้ analytediffusionwasinves - , formaldimatrixdepositiontoreduceoveralloperat - เครื่องพิมพ์ tigatedwhenusinganairbrushsysteminsteadofthepiezo ไอเอ็นจีครั้ง apeptidestandard 500fmleucine เอนคีฟาลิน depositedonanitotargetwiththepiezoprinterusingthe areaprintmodeoftheinstrument , , ,whichleadstoacomplete coveringofapre-definedarea.thisareawasthencovered กับ hccaasmaldimatrixusingtheairbrush . weobserved เป็น recognizableliquidlayerofsolventontheitotarget ซึ่ง evaporatedmoreslowlythanthemaldimatrix / solventsys - tems appliedbythepiezoprinter . thusafterdrying แสง microscopyrevealedathinmatrixlayerwithhomogeneous crystaldistribution.moreovermsiexperimentsdemonstrated ( ฟิค3 ) thattheairbrushrepresentsamatrixapplicationdevice เพียงพอ formatrixapplicationwithoutsignificantanalyte หลุด atalateralresolutionof100 _m . theverysharp edgedareavisualizedforthepeptideionemphasizestheaccu - racyofpeptideapplicationbythepiezoprinter . theapplied โปรแกรมเมทริกซ์ peptidewasperfectlypreservedanddetectedaftermaldi .