Somatic hybridization of mango via

Somatic hybridization of mango via protoplast fusion was attempted at cultivar level. Enzymatically isolated protoplasts from leaves of
greenhouse-grown seedlings of cvs. ‘Tommy Atkins’, ‘Keitt’ and ‘Haden’ and from proembryonic masses (PEMs) of cv. ‘Kensington
Pride’ were used. Protoplasts were fused by polyethylene glycol (PEG), embedded in Ca-alginate beads and cultured in shallow liquid
culture on shaker (30 rpm). After 4 weeks, Ca-alginate beads were depolymerized and released microcolonies of PEMs were plated
onto the solid culture media. After two consecutive subcultures, fast growing large clumps of PEMs were picked up and cultured as
PEMs line for analyses. Flow cytometry analysis of 242 PEMs lines revealed 41 tetraploid lines. DNA fi ngerprinting of the regenerated
embryos from the tetraploid lines showed that only four lines were somatic hybrids, all resulting from ‘Haden’ + ‘Kensington Pride’
protoplast fusions. By contrast, the tetraploid lines from ‘Keitt’ + ‘Kensington Pride’ and ‘Tommy Atkins’ + ‘Kensington Pride’ were
autotetraploids. Root-tip chromosome counts on resulting germinated cotyledonary embryos confi rmed that somatic hybrid embryo lines
had a chromosome number of 2n=4x=80 compared to diploid parents (2n=2x=40). Of 50 defl asked somatic-hybrid, in vitro plantlets
with true leaves only 3 plantlets formed the healthy apical bud (meristem) in the soil and grew normally.

Results (Thai) 1:

กาย hybridization ของมะม่วงผ่าน protoplast fusion ความพยายามในระดับพันธุ์ พลาสต์ enzymatically แยกจากใบของต้นกล้าที่ปลูกในเรือนกระจกของ cvs 'ทอมมี่ Atkins', 'Keitt' และ 'Haden' และ จากมวล proembryonic (PEMs) ของพันธุ์ ' เคนซิงตันความภาคภูมิใจ ' ใช้ พลาสต์หลอมรวม โดยเอทิลีนไกลคอล (PEG), ฝังอยู่ในเม็ดแอลจิเนต Ca และล้างในของเหลวที่ตื้นวัฒนธรรมบนปั่น (30 rpm) หลังจาก 4 สัปดาห์ ลูกปัดแอลจิเนต Ca ถูก depolymerized และ microcolonies ออกของ PEMs ถูกชุบลงบนสื่อวัฒนธรรมที่แข็ง หลังจากที่สองติดต่อกัน subcultures รวดเร็วเติบโตกระจุกขนาดใหญ่ของ PEMs หยิบ และล้างเป็นบรรทัด PEMs สำหรับวิเคราะห์ การวิเคราะห์การตรวจวิเคราะห์เซลล์ไหล 242 PEMs บรรทัดเปิดเผยรายการ tetraploid 41 Ngerprinting หาดีเอ็นเอของการถ่ายตัวอ่อนจากบรรทัด tetraploid แสดงให้เห็นว่า บรรทัดเพียงสี่ ลูกผสมร่างกาย ทั้งหมดที่เกิดจาก 'Haden' + 'เคนซิงตันไพรด์'protoplast บางกว่า โดยคมชัด บรรทัด tetraploid จาก 'Keitt' + 'เคนซิงตันไพรด์' และ 'ทอมมี่ Atkins' + 'เคนซิงตันไพรด์' ได้autotetraploids รากปลายโครโมโซมนับผลเปลือกงอก cotyledonary โคลน confi rmed บรรทัดที่อ่อนกายไฮบริดสลีมีจำนวนโครโมโซม 2n = 4 x = 80 เมื่อเทียบกับพ่อแม่ฮอโมไซกัส (2n = 2 x = 40) ของ 50 defl ถาม plantlets กายไฮบริด ในหลอดทดลองมีใบจริง เพียง 3 plantlets หน่อ apical สุขภาพ(เนื้อเยื่อปลาย) ในดินที่เกิดขึ้น และเติบโตตามปกติ

Results (Thai) 2:

การผสมข้ามพันธุ์ของมะม่วงร่างกายผ่านทางฟิวชั่นโปรโตพลาพยายามในระดับพันธุ์ โปรโตพลาแยกเอนไซม์จากใบของ
ต้นกล้าปลูกเรือนกระจกของ CVS 'ทอมมี่แอตกินส์', 'Keitt' และ 'Haden และจากฝูง proembryonic (PEMs) พันธุ์ 'เคนซิงตัน
ความภาคภูมิใจ' ถูกนำมาใช้ protoplasts ถูกผสมโดย polyethylene glycol (PEG) ฝังอยู่ในลูกปัด CA-อัลจิเนตและเพาะเลี้ยงในของเหลวตื้น
วัฒนธรรมในเครื่องปั่น (30 รอบต่อนาที) หลังจาก 4 สัปดาห์ที่ผ่านมา, ลูกปัด CA-อัลจิเนตถูก depolymerized และปล่อย microcolonies ของ PEMs ถูกชุบ
ลงบนสื่อวัฒนธรรมที่เป็นของแข็ง หลังจากที่ทั้งสองวัฒนธรรมต่อเนื่องเติบโตอย่างรวดเร็วกระจุกใหญ่ของ PEMs ถูกหยิบขึ้นมาและการเพาะเลี้ยงเป็น
เส้น PEMs สำหรับการวิเคราะห์ flow cytometry วิเคราะห์ PEMs 242 เส้น 41 เส้นเปิดเผย tetraploid ดีเอ็นเอ Fi ngerprinting อาศัยของ
ตัวอ่อนจากเส้น tetraploid พบว่ามีเพียงสี่สายเป็นลูกผสมร่างกายทั้งหมดที่เกิดจากการ 'Haden' + 'เคนซิงตันความภาคภูมิใจ'
fusions โปรโตพลา โดยคมชัดเส้น tetraploid จาก 'Keitt' + 'เคนซิงตันความภาคภูมิใจ' และ 'ทอมมี่แอตกินส์' + 'เคนซิงตันความภาคภูมิใจ' เป็น
autotetraploids นับโครโมโซมรากเคล็ดลับในการทำให้เกิดการงอกตัวอ่อน cotyledonary CONFI rmed ว่าร่างกายของตัวอ่อนสายไฮบริด
มีจำนวนโครโมโซม 2n = 4x = 80 เมื่อเทียบกับพ่อแม่ซ้ำ (2n = 2x = 40) 50 defl ถามร่างกายของไฮบริด, ต้นอ่อนในหลอดทดลอง
ที่มีใบจริงเพียง 3 ต้นรูปแบบตายอดเพื่อสุขภาพ (เนื้อเยื่อ) ในดินและเติบโตได้ตามปกติ

Results (Thai) 3:

ส่วนลูกผสมของมะม่วงผ่านโปรฟิวชั่นคือพยายามที่ระดับของ . enzymatically แยกโปรโตพลาสต์จากใบของโรงเรือนที่ปลูกต้นกล้าของ CVS ทอมมี่แอตกินส์ " " , " " และ " " keitt ฮาเดน และจาก proembryonic มวล ( pems ) ของพันธุ์ " เคนซิงตันศักดิ์ศรี " มาใช้ พบว่าผสมด้วย polyethylene glycol ( PEG ) , ฝังตัวอยู่ใน CA เม็ด alginate และเพาะเลี้ยงในน้ำตื้นวัฒนธรรมในเครื่องปั่น ( 30 รอบต่อนาที ) หลังจาก 4 สัปดาห์ , CA ) และอัลลูกปัด depolymerized ออก microcolonies ของ pems ถูกชุบบนอาหารเลี้ยงเชื้อแข็ง หลังจากสองติดต่อกัน subcultures รวดเร็วเติบโตขนาดใหญ่อยู่ pems ถูกหยิบขึ้นมาและเพาะเลี้ยงเป็นบรรทัด pems สำหรับวิเคราะห์ข้อมูล การวิเคราะห์การไหลของข้อมูล ( 242 pems สาย 41 เตตราพล ด์เส้น ดีเอ็นเอ Fi ngerprinting ของที่ได้ตัวอ่อนจากเส้นเตตราพล ด์ พบว่าเพียงสี่สายพันธุ์ลูกผสมโซมาทั้งหมดที่เกิดจาก " " + " " ฮาเดนเคนซิงตัน ไพรด์โปรโตพลาสต์ fusions . โดยคมชัด , เส้นเตตราพล ด์จาก " keitt " + " เคนซิงตัน ไพรด์ " และ " ทอมมี่แอตกินส์ " + " ศักดิ์ศรี " เคนซิงตันautotetraploids . ปลายโครโมโซมรากงอก นับเป็นผล cotyledonary ตัวอ่อนตัวอ่อนลูกผสมสายที่ลงทะเบียน rmed โซมาติกมีจำนวนโครโมโซม 2n = 4x = 80 เทียบกับพ่อแม่ดิพลอยด์ ( 2n = 2x = 40 ) 50 defl ถามเซลล์ในหลอดทดลองต้นลูกผสมกับใบแท้จริงเพียง 3 ต้นขึ้นบัดปลายมีสุขภาพดี ( เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน ) ในดินและเติบโตได้ตามปกติ