Detection of EBV-DNA in PBMCs was d

Detection of EBV-DNA in PBMCs was done by nested PCR for EBER-1 with the following primers forward 5′-TCC CGG GTA CAA GTC CCG-3′ and reverse 5′-TGA CCG AAG ACG GCA GAA AG-3′ at 900 nM. Detection has been performed with probe FAM-5′-TGG TGA GGA CGG TGT CTG TGG TTG TGT T-3′-TAMRA (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Germany) at 5 µM. Amplification data were analyzed by an ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems, California, USA). Successful DNA isolation was verified by histone replication with the primers forward 5′-CCA GAG CGC AGC TAT CGG T-3′ at 900 nM and reverse 5′-CAC GTT TGG CAT GGA TAG CAC -3′ at 50 nM and the probe FAM - 5′-GCA AGT GAG GCC TAT CTG GTT GGC CTT T-3- TAMRA (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Germany) at 5 µM. For BZLF-1 the following primers forward 5′-AAATTTAAGAGATCCTCGTGTAAAACATC-3′ and reverse 5′-CGCCTCCTGTTGAAGCAGAT-3′ at 30 pM were used. Detection has been performed with probe FAM-5′-ATAATGGAGTCAACATCCAGGCTTGGGC-3′-TAMRA (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Germany) at 10 pM. For detection of BZLF-1 RNA, isolated total RNA was reverse transcribed according to the manufacture's instructions (Life Technologies, Darmstadt, Germany). EBER copies/µg DNA and BZLF-1 copies/µg cDNA were calculated in accordance to standard EBV-copies [60]. Results ≥35 copies/µg DNA/cDNA were regarded as positive.

Results (Russian) 1:

Обнаружение EBV-ДНК в репликацию было сделано вложенных ПЦР для ЕВЕР-1 с следующие праймерами вперед 5′-TCC КЭУ GTA УГА GTC CCG-3′ и обратный 5′-TGA CCG AAG ACG ГЦА ГАА АГ 3′ на 900 нм. Обнаружение выступал с зонд FAM-5 ′ TGG TGA GGA КЭУ TGT КТГ TGG TTG TGT T-3′ ТАМРА (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Германии) в 5 мкм. усиление данные были проанализированы система обнаружения Аби Призма 7700 последовательности (PE применяется биосистем, Калифорния, США). Успешной изоляции ДНК была проверена гистона репликации с праймерами вперед 5′ ОСО кляп CGC СМЖЛ ТАТ КЭУ T-3′ 900 нм и обратный 5′-CAC ГЦГ TGG CAT GGA тег CAC-3′ на 50 Нм и зонд FAM - 5 ′ вка АГТ кляп GCC ТАТ КТГ ГЦГ GGC CTT Т-3 - ТАМРА (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Германии) в 5 мкм. Для BZLF-1 следующие праймеры вперед 5 ' AAATTTAAGAGATCCTCGTGTAAAACATC-3′ и обратный 5′-CGCCTCCTGTTGAAGCAGAT-3′ 30 вечера были использованы. Обнаружение выступал с зонд FAM-5 ' ATAATGGAGTCAACATCCAGGCTTGGGC-3′ ТАМРА (Eurofins MWG Operon, Ebersberg Германии) в 10 вечера. Для обнаружения РНК BZLF-1 изолированные всего РНК был обратной транскрипции согласно инструкциям изготовителя (жизнь технологий, Дармштадт, Германия). ЕВЕР копий/мкг ДНК и BZLF-1 копий/мкг cDNA были рассчитаны в соответствии со стандартным EBV-копий [60]. Результаты ≥35 копий/мкг ДНК/cDNA были сосчитаны как положительные.

Results (Russian) 2:

Обнаружение EBV-ДНК в РВМС было сделано ПЦР для EBER-1, со следующими праймерами вперед 5'-TCC CGG GTA CAA CCG GTC-3 'и обратный 5'-TGA CCG AAG ACG GCA GAA АГ-3' при 900 нМ. Обнаружение было выполнено с зондом FAM-5'-TGG TGA GGA CGG TGT CTG TGG ТТГ TGT Т-3'-TAMRA (Eurofins MWG оперона, Эберсберг Германия) при 5 мкМ. Данные амплификации анализировали с помощью системы ABI PRISM 7700 Sequence Detection (PE Applied Biosystems, California, USA). Успешное выделение ДНК была подтверждена репликации гистона с праймерами вперед 5'-CCA GAG CGC АРУ ТАТ CGG Т-3 'при 900 нМ и обратного 5'-CAC GTT TGG CAT GGA TAG CAC -3' при 50 нМ и зондом FAM - 5'-GCA АГТ GAG GCC ТАТ CTG GTT GGC СТТ Т-3- TAMRA (Eurofins MWG оперона Эберсберг Германия) при 5 мкМ. Для BZLF-1 следующие праймеры направить 5'-AAATTTAAGAGATCCTCGTGTAAAACATC-3 'и обратный 5'-CGCCTCCTGTTGAAGCAGAT-3' в 30 часов были использованы. Обнаружение было выполнено с зондом FAM-5'-ATAATGGAGTCAACATCCAGGCTTGGGC-3'-TAMRA (Eurofins MWG оперона, Эберсберг Германия) в 10 часов вечера. Для обнаружения BZLF-1 РНК, изолированные тотальную РНК подвергали обратной транскрипции в соответствии с инструкциями производителя (Life Technologies, Дармштадт, Германия). Эбер копий / мкг ДНК и BZLF-1 копий / мкг кДНК были рассчитаны в соответствии со стандартными EBV-копий [60]. Результаты ≥35 копий / мкг ДНК / кДНК были расценены как положительные.

Results (Russian) 3:

обнаружение ebv-dna в pbmcs было сделано путем вложенные пцр для eber-1 с после грунтовки вперед 5 ′ - ктс кэу GTA CAA ктз ccg-3 ′ и обратить вспять 5 ′ - tga ccg aag ACG GCA гаа ag-3 ′ на 900 нм.обнаружение осуществляется с зонда fam-5 ′ - tgg tga gga кэу tgt ктг tgg ттг tgt т - 3 - х - тамра (eurofins mwg оперон, эберсберг германии) на 5 мкм распространения данных, были проанализированы в аби - "призма" 7700 последовательность системы обнаружения (PE применяется от, калифорния, сша).успешной была проверена гистоны репликации днк изоляции с грунтовок вперед 5 ′ - осо номер CGC смжл тат кэу т - 3 - х на 900 нм и обратить вспять 5 ′ - CAC гцг tgg кпп gga Tag CAC - 3 - х на 50 нм и зонд Fam - 5 - х - GCA агт кляп ссз тат ктг гцг ggc нво т - 3 - тамра (eurofins mwg оперон, эберсберг германии) на 5 мкм для bzlf-1 следующие грунтовок вперед 5 - х - aaatttaagagatcctcgtgtaaaacatc-3 ′ и обратить вспять 5 ′ - cgcctcctgttgaagcagat-3 ′ на 30 часов, были использованы.обнаружение осуществляется с зонда fam-5 ′ - ataatggagtcaacatccaggcttgggc-3 ′ - тамра (eurofins mwg оперон, эберсберг германии) в 10 вечера.для обнаружения bzlf-1 рнк, изолированных в общей сложности рнк была обратной транскрипции, по словам производителя инструкции (жизнь технологий, Darmstadt, германия).евер копии / мкг днк и bzlf-1 копии / мкг cdna рассчитывались в соответствии стандарту ebv копии [60].результаты ≥ 35 экземпляров / мкг днк / cdna рассматриваются как позитивные.