Real-time RT-PCRTotal RNA was extra

Real-time RT-PCRTotal RNA was extracted from tracheal or cloacal swab spec-imens using a QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen, Germany)according to the manufacturer’s instructions. The RNA sampleswere stored at −80◦C until used.Real-time RT-PCR was carried out using a TaqMan®InfluenzaA Detection Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) on afluorometric PCR thermocycler (Mx3000P) as per manufacturer’sinstructions. The following four sets of overlapping primers forH5N1 HA gene were used: HA-1 Forward: AAA GCA GGG GTM YVATCT; HA-1 reverse: TTC TTT TTG ATA AGC CAT A; HA-2 forward:GTG AGC TCA GCA TGT CC; HA-2 reverse: ATG GTG AGR GGG TGKAT; HA-3 forward: ACC AAG TGT CAA ACT CCA; HA-3 reverse: TCGGAC CTT GTC GTA AAG; HA-4 forward: GAT GTC TGG ACT TAY AAT;and HA-4 reverse: ACA ATC TGA ACT CAC AAA T. The amplifica-tion profile consisted of one cycle at 94◦C for 2 min, followed by 40cycles of 94◦C for 30 s ; 50◦C for 30 s; 68◦C for 3 min and one cycleat 68◦C for 7 min.

Results (Thai) 1:

อาร์เอ็นเอ RT PCRTotal แบบเรียลไทม์ถูกแยกจากกวาดการใส่ท่อ หรือโดยใช้การ QIAamp ไวรัส RNA Mini Kit (Qiagen เยอรมัน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต imens ข้อมูลจำเพาะ Sampleswere RNA ที่เก็บไว้ที่ −80◦C จนกว่าใช้ แบบเรียลไทม์ RT-PCR ถูกดำเนินโดยใช้เครื่อง TaqMan® InfluenzaA ชุดตรวจ (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ เมืองฟอสเตอร์ CA, USA) บน thermocycler PCR afluorometric (Mx3000P) ตาม manufacturer'sinstructions ใช้ต่อไปนี้สี่ชุดของยีน HA forH5N1 ไพรเมอร์ที่ทับซ้อน: HA-1 ข้างหน้า: AAA GCA GGG GTM YVATCT ย้อนกลับ 1 ฮา: TTC TTT ทั้ง ATA AGC CAT A HA-2 ไปข้างหน้า: GTG AGC TCA GCA TGT CC ย้อนกลับ HA 2: ATG GTG AGR GGG TGKAT HA-3 ข้างหน้า: ACC เอเอจี TGT CAA ACT CCA ย้อนกลับ HA 3: TCGGAC CTT GTC GTA เอเอจี HA-4 ข้างหน้า: สมาคม GTC TGG ACT เทย์ AAT และ HA-4 กลับ: ACA ATC TGA ACT CAC AAA ต. โปรไฟล์ของ amplifica-ทางการค้าประกอบด้วยวงจรหนึ่งที่ 94◦C สำหรับ 2 นาที ตาม ด้วย 40cycles ของ 94◦C 30 s 50◦C 30 s 68◦C หนึ่ง cycleat 68◦C 7 นาทีและ 3 นาที

Results (Thai) 2:

แบบ Real-time RT-PCRTotal RNA ถูกสกัดจากหลอดลมหรือไม้กวาด cloacal ข้อมูลจำเพาะ imens โดยใช้ชุด QIAamp ไวรัส RNA มินิ (Qiagen, เยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอ sampleswere เก็บไว้ที่-80◦Cจนกว่า used.Real เวลา RT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้การตรวจสอบชุดTaqMan®InfluenzaA (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ใน afluorometric PCR thermocycler (Mx3000P) ตามผู้ผลิต sinstructions ต่อไปนี้สี่ชุดที่ทับซ้อนกันไพรเมอร์ forH5N1 HA ยีนถูกนำมาใช้: HA-1 ไปข้างหน้า: AAA GCA GGG GTM YVATCT; HA-1 ย้อนกลับ: TTC TTT TTG ATA AGC แมว; HA-2 ไปข้างหน้า: GTG AGC TCA GCA TGT CC; HA-2 ย้อนกลับ: ATG GTG AGR GGG TGKAT; HA-3 ไปข้างหน้า: แม็ก AAG TGT CAA ACT CCA; HA-3 ย้อนกลับ: TCGGAC CTT GTC GTA AAG; HA-4 ไปข้างหน้า: GAT GTC TGG ACT TAY AAT และ HA-4 ย้อนกลับ: ACA ATC TGA ACT CAC AAA ตันรายละเอียด amplifica-การประกอบด้วยหนึ่งรอบที่94◦Cเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 40cycles ของ94◦C เป็นเวลา 30 วินาที; 50◦Cเป็นเวลา 30 วินาที; 68◦Cเป็นเวลา 3 นาทีและเป็นหนึ่งใน cycleat 68◦C 7 นาที

Results (Thai) 3:

เวลาจริง RT pcrtotal RNA ถูกสกัดจากหลอดลม หรือ cloacal ไม้กวาดสเป็คในขณะเดียวกันใช้ qiaamp ไวรัส RNA ขนาดเล็กชุด ( เพิ่ม , เยอรมนี ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ยีนเพื่อเก็บไว้ที่− 80 ◦ C จน used.real-time RT-PCR พบว่าใช้ taqman ® influenzaa ชุดตรวจ ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) afluorometric PCR เทอร์มอไซเคล ์ ( mx3000p ) ตาม manufacturer'sinstructions . ต่อไปนี้สี่ชนิดของชุดซ้อนกัน forh5n1 ฮาใช้ : ha-1 ไปข้างหน้า : AAA GCA GGG ใช้ yvatct ; ha-1 ย้อนกลับ : ttc TTT ATA บริษัททีทีจีแมว ; ha-2 ไปข้างหน้า : GTG อาซาฮี TCA GCA TGT ซีซี ; ha-2 ย้อนกลับ : ATG GTG . GGG tgkat ; ha-3 ไปข้างหน้า : บัญชี AAG TGT caa พระราชบัญญัติ CCA ; ha-3 ย้อนกลับ : tcggac ซีทีที GTC GTA เท่านั้น ; ha-4 ไปข้างหน้า : GAT GTC tgg กระต่ายการท่าอากาศยานแห่งประเทศไทย และ ha-4 ย้อนกลับ : ACA ATC TGA แสดง the AAA ที amplifica tion โปรไฟล์จำนวน 1 รอบ ที่ 94 ◦ C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 40cycles 94 ◦ C 30 s ; 50 ◦ C 30 s ; 68 ◦ C เป็นเวลา 3 นาทีและหนึ่ง cycleat 68 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที