2.4. Gel electrophoresis For protei

2.4. Gel electrophoresis
For protein extraction 200 µL SF,PE-UHMW blocks after in cubation in synovia and blank material was deposited in 1200 µL uH2O before 100 µL trichloroacetic acid (TCA;20%) were added 5 times and vortexed thoroughly between each single addition.Samples were incubated for 30 min at 4 ◦C and centrifuged at 14,000 rpm and 4 ◦C for another 30 min. The supernatant and polymer blocks were removed and the protein pelletre-dissolved in 10 µL lysis buffer (50mM Tris/HCl pH 8.0,2mM dithiothreitol,10% v/v glycerol,0.5% v/v Tween 20,10% toluol).For protein precipitation with ethanol, 50 µL SF or thePE-UHMW blocks were mixed with 450 µL precooled ethanol (4 ◦C) and incubated at −70 ◦C for 2h before centrifugation at 14,000 rpm and roomtemperature for 30 min.The polymer blocks and the supernatant were removed and ethanol residues were evaporated in the vacuum centrifuge.After drying the pellet was re-dissolved in lysis buffer.Protein concentration was determined according to Bradford. For SDS PAGE analysis protein pellets were dissolved in lithium dodecyl sulfate sample buffer (26.5mMTris–HCl, 35.25mM TrisBase,0.5% lithium dodecyl sulfate,2.5% glycerol, 0.1275mM EDTA,0.055mM SERVA Blue G250,0.044mM Phenol Red, pH8.5,50mM dithiothreitol) at 95 ◦C for 5 min and applied to aprecast NuPAGE4–12% Bis-Tris polyacrylamide gel (Invitrogen,USA).Electrophoresis was conducted at 125V(60mA max., 12.5W)in a XcellSurelock Mini Cell electrophoresis system (Invitrogen,USA).Gels were silver stained for protein detection.

Results (Thai) 1:

2.4. เจ electrophoresis สำหรับโปรตีนสกัด 200 µL SF, PE UHMW บล็อกหลังใน cubation ใน synovia และวัสดุเปล่าถูกฝาก uH2O 1200 µL ก่อน µL 100 trichloroacetic กรด (TCA; 20%) เพิ่ม 5 เท่าและ vortexed ระหว่างนี้ละเดียวอย่างละเอียดตัวอย่างที่ incubated ใน 30 นาทีที่ 4 ◦C และ centrifuged ที่ 14000 รอบต่อนาทีและ ◦C 4 สำหรับอีก 30 นาที บล็อก supernatant และพอลิเมอร์ออก และโปรตีน pelletre ละลายใน 10 µL lysis บัฟเฟอร์ (50mM ตรี/HCl pH 8.0, dithiothreitol มม. 2, 10% v/v glycerol,0.5% v/v Tween 20,10% toluol)สำหรับโปรตีนฝนกับเอทานอล 50 µL SF หรือ thePE UHMW บล็อกผสมกับเอทานอล µL precooled 450 (4 ◦C) และ incubated −70 ◦C สำหรับ 2h ก่อน centrifugation ที่ 14000 รอบต่อนาทีและ roomtemperature ใน 30 นาทีบล็อกโพลีเมอร์และ supernatant ถูกเอาออก และตกค้างของเอทานอลได้หายไปในเครื่องหมุนเหวี่ยงสูญญากาศหลังจากอบเม็ดถูกใหม่ละลายในบัฟเฟอร์ lysisความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดตามแบรดฟอร์ด สำหรับ SDS หน้าวิเคราะห์โปรตีน อัดเม็ดได้ละลายในบัฟเฟอร์อย่างลิเธียม dodecyl ซัลเฟต (26.5mMTris – HCl, 35.25 มม. TrisBase,0.5% ลิเธียม dodecyl sulfate,2.5% กลีเซอร 0.1275 mM EDTA, 0.055 มม. SERVA บลู G250, 0.044 มม.สีแดงวาง pH8.5, dithiothreitol 50 มม.) ที่ 95 ◦C สำหรับ 5 นาที และนำไปใช้กับ aprecast NuPAGE4 – 12% Bis-ทริสเรทติ้ง polyacrylamide เจล (Invitrogen สหรัฐอเมริกา)วิธี electrophoresis ใน 125V (60mA เดย์ 12.5W) ในระบบ electrophoresis XcellSurelock มินิเซลล์ (Invitrogen สหรัฐอเมริกา)เจซิลเวอร์สีสำหรับการตรวจหาโปรตีนได้

Results (Thai) 2:

2.4 ข่าวคราว
การสกัดโปรตีน 200 ไมโครลิตร SF บล็อก PE-UHMW หลังจากใน cubation ใน synovia และวัสดุที่ว่างเปล่าถูกวางใน 1200 ไมโครลิตร uH2O ก่อน 100 ไมโครลิตรกรดไตรคลอโร (TCA; 20%) มีการเพิ่ม 5 เท่าและการ vortex อย่างทั่วถึงระหว่างกันนอกจากนี้คนเดียว ตัวอย่างถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 ◦Cและหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาทีและ 4 ◦Cอีก 30 นาที ใสและพอลิเมอบล็อกถูกถอดออกและโปรตีน pelletre ละลายใน 10 ไมโครลิตร lysis บัฟเฟอร์ (50mm Tris / HCl ค่า pH 8.0,2mM dithiothreitol 10% V / กลีเซอรอลวี, 0.5% v / v Tween 20,10% toluol) ตัวอย่าง การตกตะกอนโปรตีนที่มีเอทานอล 50 ไมโครลิตร SF หรือ thePE UHMW-บล็อกถูกผสมกับเอทานอล 450 ไมโครลิตร precooled (4 ◦C) และบ่มที่อุณหภูมิ -70 ◦Cสำหรับ 2h ก่อนที่จะหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาทีและ roomtemperature 30 min.The บล็อกลิเมอร์และ ใสถูกถอดออกและสารตกค้างเอทานอลได้รับการระเหยใน centrifuge.After สูญญากาศการอบแห้งเม็ดเป็นอีกครั้งที่ละลายในสลายเข้มข้น buffer.Protein ถูกกำหนดตาม Bradford สำหรับ SDS เม็ดโปรตีนวิเคราะห์ PAGE ถูกกลืนหายไปในโดเดซิลซัลเฟตลิเธียมบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (26.5mMTris-HCl, 35.25mM TrisBase 0.5% โดเดซิลซัลเฟตลิเธียม, กลีเซอรีน 2.5% 0.1275mM EDTA, 0.055mM Serva สีน้ำเงิน G250,0.044mM ฟีนอลสีแดง, PH8 .5,50mM dithiothreitol) ที่ 95 ◦Cเป็นเวลา 5 นาทีและนำไปใช้ aprecast NuPAGE4-12% polyacrylamide Bis-Tris เจล (Invitrogen, ประเทศสหรัฐอเมริกา) .Electrophoresis ได้ดำเนินการที่ 125V (60mA สูงสุด. 12.5W) ในมือถือมินิ XcellSurelock ระบบอิเล็ก (Invitrogen, ประเทศสหรัฐอเมริกา) .Gels ถูกย้อมสีเงินสำหรับการตรวจหาโปรตีน

Results (Thai) 3:

2.4 . เจล
สำหรับการสกัดโปรตีน 200 µผม SF , pe-uhmw บล็อกหลัง cubation ใน synovia และวัสดุว่างฝากใน 1200 µผม uh2o ก่อน 100 µ l กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ; ร้อยละ 20 เพิ่ม 5 ครั้ง และ vortexed อย่างละเอียดระหว่าง 1 เดียวในแต่ละตัวอย่างที่บ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦ C และระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที และ 4 ◦ C อีก 30 นาทีและน่าน และพอลิเมอร์บล็อกถูกลบออกและโปรตีนที่ละลายใน 10 pelletre µ l การสลายบัฟเฟอร์ ( 50mm ทริส / HCl Ph 8.0,2mm บัตรแข็ง , 10% v / v กลีเซอรอล , 0.5 % v / v น 20,10 % toluol ) โปรตีนที่ตกตะกอนด้วยเอทานอล , 50 µผม SF หรือ thepe uhmw บล็อกผสม 450 µผม precooled เอทานอล ( 4 ◦องศาเซลเซียส ) และอุณหภูมิ− C 70 ◦ 2H ก่อนปั่นตอน 14000 รอบต่อนาทีและอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ใช้บล็อกและนำออกและสารตกค้าง ethanol ระเหยในสูญญากาศเครื่องอบแห้งได้อีกครั้ง หลังจากเม็ดละลายในการสลายบัฟเฟอร์ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนดจากแบรดฟอร์ด สำหรับซีหน้าการวิเคราะห์โปรตีนเม็ดละลายในลิเธียมโดเดซิลซัลเฟตใช้บัฟเฟอร์ ( 26.5mmtris – HCl , trisbase 35.25mm ,0.5% ลิเธียมโดเดซิลซัลเฟต 2.5 % กลีเซอรอล 0.1275mm EDTA , 0.055mm serva สีฟ้า g250, 0.044mm ฟีนอลสีแดง ph8.5,50mm บัตรแข็ง ) ที่◦ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและใช้ aprecast nupage4 – 12 % ทวิโดย polyacrylamide gel electrophoresis ( Invitrogen , USA ) ที่ใช้ใน 125v ( 60ma สูงสุด 12.5w , ) ใน xcellsurelock มินิ เซลล์อิเล็กระบบ ( Invitrogen , USA )เจลเป็นสีเงินเปื้อนเพื่อตรวจหาโปรตีน .