The introduction of foreign DNA int

The introduction of foreign DNA into the yeast Pichia pastoris is similar to the processes used with Saccharomyces cerevisiae and routinely performed by the electroporation of plasmid DNA into electro-competent (E-comp) P. pastoris cells (Becker and Guarente, Methods Enzymol 194:182–187, 1991). Transformation of spheroplasts is more difficult (Cregg et al., Mol Cell Biol 5:3376–3385, 1985), and current methods to make chemically competent P. pastoris cells results in significantly fewer transformants (Pichia protocols, 2nd edn, Totowa, 27–42). Following are protocols to prepare E-comp P. pastoris cells, and to electroporate plasmid DNA into these cells to generate transformed cells.

Results (Thai) 1:

แนะนำดีเอ็นเอต่างประเทศเข้าไปในยีสต์ Pichia pastoris จะคล้ายกับกระบวนใช้ Saccharomyces cerevisiae และทำเป็นประจำ โดย electroporation ของ plasmid DNA ในเซลล์ P. pastoris (อีคอม) electro อำนาจ (Becker และ Guarente วิธี Enzymol 194:182 – 187, 1991) การเปลี่ยนแปลงของ spheroplasts เป็นการยาก (Cregg et al., Biol เซลล์โมล 5:3376-3385, 1985), และวิธีปัจจุบันเพื่อให้ P. pastoris เชี่ยวชาญสารเคมีเซลล์ผลลัพธ์ใน transformants น้อยมาก (โปรโตคอล Pichia, edn 2, Totowa, 27-42) ต่อไปนี้จะให้ทำอีคอม P. pastoris เซลล์ และ electroporate plasmid DNA ในเซลล์เหล่านี้เพื่อสร้างการแปลงเซลล์

Results (Thai) 2:

การเปิดตัวของดีเอ็นเอต่างประเทศเข้า Pichia pastoris ยีสต์จะคล้ายกับกระบวนการที่ใช้กับ Saccharomyces cerevisiae และดำเนินการเป็นประจำโดย electroporation พลาสมิดดีเอ็นเอเข้าสู่อำนาจไฟฟ้า (E-comp) พี pastoris เซลล์ (เบกเกอร์และ Guarente, วิธี Enzymol 194: 182-187, 1991) การเปลี่ยนแปลงของ spheroplasts เป็นเรื่องยากมากขึ้น (Cregg, et al, Mol เซลล์ Biol. 5: 3376-3385​​, 1985) และวิธีการในปัจจุบันที่จะทำให้สารเคมีที่มีอำนาจพี pastoris ผลเซลล์ใน transformants อย่างมีนัยสำคัญน้อยลง (โปรโตคอล Pichia 2 EDN, โตโตวา 27 -42) ต่อไปนี้เป็นโปรโตคอลเพื่อเตรียมความพร้อม E-comp พี pastoris เซลล์และดีเอ็นเอ electroporate พลาสมิดเข้าสู่เซลล์เหล่านี้เพื่อสร้างเซลล์เปลี่ยน

Results (Thai) 3:

การแนะนำของดีเอ็นเอต่างประเทศในยีสต์ pichia pastoris คล้ายกับกระบวนการที่ใช้กับ Saccharomyces cerevisiae และประจําที่ดําเนินการโดย electroporation พลาสมิดดีเอ็นเอของโรงานใน ( e-comp ) หน้า pastoris เซลล์ ( Becker และ guarente วิธีการ enzymol 194:182 – 187 , 1991 ) การเปลี่ยนแปลงของ spheroplasts ยาก ( cregg et al . , โมล เซลล์ วท บ วท 5:3376 – 3385 , 1985 )และวิธีการในปัจจุบันเพื่อให้เชี่ยวชาญทางหน้า pastoris เซลล์ผลลัพธ์ในพลาสมิดอย่างมีนัยสำคัญน้อยกว่า ( pichia โปรโตคอลเครือ totowa 2 , 27 ( 42 ) ต่อไปนี้เป็นขั้นตอนที่เตรียมหน้า pastoris e-comp เซลล์ และ electroporate พลาสมิดดีเอ็นเอเข้าสู่เซลล์เหล่านี้เพื่อสร้างแปลงเซลล์