DNA extractionTotal yeast DNA was e

DNA extraction

Total yeast DNA was extracted as described by Guillamon et al. (24). Briefly, the cells were grown overnight in YEPD broth and harvested by centrifugation at 4000 r.p.m. for 5 min. The cells were resuspended in 500 μl of SOE buffer (1 M sorbitol, 0.1 M EDTA-pH 7.5), transferred to 1.5 ml microfuge tubes and incubated for 2 h at 37°C with 100 T Zymolyase. The lysate was centrifuged for 1 min, the pellet was resuspended in 0.5 ml of TE buffer [50 mM Tris-HCL (pH7.4), 20 mM EDTA] and 50 μl of 20% SDS was added; the mixture was then incubated for 30 min at 65°C. After the addition of 0.2 ml potassium acetate, the mixture was placed on ice for 1 h and centrifuged for 5 min. The supernatant was transferred to a fresh tube, mixed with an equal volume of 2-propanol, and incubated for 5 min at room temperature. The pellet was air-dried and dissolved in sterile distilled water.

Results (Thai) 1:

สกัดดีเอ็นเอดีเอ็นเอรวมยีสต์ถูกแยกตามที่อธิบายไว้โดย Guillamon et al. (24) สั้น ๆ เซลล์ที่ปลูกเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาที 5 นาที และพักค้างคืนในน้ำซุป YEPD เซลล์ถูก resuspended ใน μl 500 ของ SOE บัฟเฟอร์ (1 M ซอร์บิทอ 0.1 M EDTA-pH 7.5), โอนไปหลอด microfuge 1.5 ml และรับการกก 2 ชม.ที่ 37° C กับ 100 T Zymolyase Lysate การแก้ไขจาก 1 นาที เม็ดถูก resuspended ใน 0.5 ml ของบัฟเฟอร์ TE [50 มม.ทริสเรทติ้ง HCL (pH7.4), 20 มม. EDTA] และ เพิ่ม 50 μl ของ SDS 20% ส่วนผสมแล้วมี incubated 30 นาทีที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส หลังจากการเพิ่มของ 0.2 ml โพแทสเซียมอะซิเตท ส่วนผสมวางบนน้ำแข็งสำหรับ 1 h และผลิตภัณฑ์ 5 นาที Supernatant ถูกถ่ายโอนไปหลอดสด ผสมกับปริมาณเท่ากับ 2 ไร propanol และรับการกก 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เม็ด air-dried และละลายในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ

Results (Thai) 2:

สกัดดีเอ็นเอ

ดีเอ็นเอยีสต์ทั้งหมดถูกสกัดตามที่อธิบาย Guillamon et al, (24) สั้น ๆ , เซลล์ปลูกค้างคืนใน YEPD น้ำซุปและเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที เซลล์ที่ถูก resuspended ใน 500 ไมโครลิตรของ buffer รัฐวิสาหกิจ (1 M ซอร์บิทอ, 0.1 M EDTA-ค่า pH 7.5) โอนไป 1.5 มล. หลอด microfuge และบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C มี 100 T Zymolyase lysate ถูกปั่นเป็นเวลา 1 นาทีเม็ดถูก resuspended ใน 0.5 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์ [50 มิลลิ Tris-HCL (pH7.4) 20 มิลลิเมตร EDTA] และ 50 ไมโครลิตร 20% SDS ถูกเพิ่ม; ส่วนผสมที่ถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 30 นาทีที่ 65 ° C หลังจากที่นอกเหนือจาก 0.2 มล. โพแทสเซียมอะซิเตท, ส่วนผสมที่ถูกวางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและปั่นเป็นเวลา 5 นาที ใสถูกย้ายไปยังหลอดสดผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ 2 โพรพานและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เม็ดถูกอากาศแห้งและละลายในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ

Results (Thai) 3:

การสกัดดีเอ็นเอยีสต์สกัดดีเอ็นเอทั้งหมดตามที่อธิบายไว้โดย guillamon et al . ( 24 ) สั้น ๆ , เซลล์เติบโตค้างคืนในอาหารเลี้ยงเชื้อและเก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยกน้ำซุปที่ 4000 r.p.m. 5 นาทีเซลล์ก็ resuspended 500 μล. โซวบัฟเฟอร์ ( 1 M ซอร์บิทอล 0.1 M EDTA pH 7.5 ) , โอนไปยังหลอด 1.5 ml microfuge บ่มที่ 37 ° C 2 H 100 T zymolyase . การ lysate คือระดับ 1 นาที เม็ดก็ resuspended 0.5 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์ [ 50 มม. โดย HCl ( ph7.4 ) และ 20 mM EDTA และ 50 μ L 20 % SDS คือเพิ่มส่วนผสมแล้วบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 65 องศา หลังจากเติมโพแทสเซียมอะซีเตต 0.2 ml , ส่วนผสมจะถูกวางไว้บนน้ำแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมง 5 นาที และระดับสูง ถูกย้ายไปเป็นหลอดสดผสมกับปริมาณเท่ากันของโพรพานอล และบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง เม็ดเป็นอากาศแห้งและฆ่าเชื้อละลายในน้ำกลั่น