2.2.2. Lactate oxidase immobilizati

2.2.2. Lactate oxidase immobilization
Lactic oxidase enzyme solution (20 mL) was mixed with 20 mL
of 4% sodium alginate solution. This solution was slowly added into
400 mL of 0.2 mol/L CaCl2 solution with a syringe. The solution was
then filtered, washed, dried to obtain the particulate immobilized
lactate oxidase, and solidified at 25 C for 2 h.
2.2.3. Measurement methods for LA, pyruvic acid, ethanol, and
reducing sugar content
Lactic acid, ethanol concentration was measured by SBA 40 C
biosensor [14]. Pyruvate acid was determined as followed, 1 ml
of fermentation supernatant was put into a test tube, added 2 mL
8% trichloroacetic acid plus 1.0 mL of 0.1% 2,4-dinitrophenylhydrazine
solution. Shaked properly then added 5.0 mL 1.5 mol/L, NaOH
solution, detect the absorbance at wavelength of 520 nm, then
referred to the standard solution. The reducing sugar was determined
as DNS method [25]. All the detection was performed for
three times and the average was used for discussion.
2.2.4. Optimization of catalytic conditions for immobilized lactate
oxidase
2.2.4.1. Optimum temperature. Phosphate buffer (0.5 mL) was
added to each test tube with 0.2 mL of 20 mmol/L LA and 0.1 g of
immobilized enzyme. Each tube was placed at 25, 37, 45, 55, 65,
and 75 C, respectively. The water bath was maintained for
10 min, and then 1 mL of 1 mol/L 2,4-dinitrophenylhydrazine was
added. The reaction was performed at 55 C for 20 min, and then
5 mL of 0.04 mol/L NaOH was added to the solution. Finally, the
absorbance values were determined at 520 nm wavelength. For
comparison, the free enzyme was used as control.

Results (Thai) 1:

2.2.2 การตรึงโป oxidase lactateโซลูชั่นเอนไซม์ oxidase แล็กติก (20 มล.) ถูกผสมกับ 20 mL4% โซเดียมแอลจิเนตโซลูชัน วิธีนี้ช้าเพิ่มเป็นมล. 400 ของโมล 0.2 L CaCl2 โซลูชันกับแบบเข็ม โซลูชั่นจากนั้น กรอง เครื่องซักผ้า อบแห้งรับฝุ่นหาlactate oxidase และหล่อที่ 25 C สำหรับ 2 h2.2.3 การประเมินวิธีใน LA กรดไพรูวิก เอทานอ ล และเนื้อหาน้ำตาลลดลงกรด ความเข้มข้นของเอทานอลถูกวัด โดย SBA 40 Cbiosensor [14] กำหนดกรด pyruvate ตาม 1 ml เป็นของหมักดอง supernatant ได้ใส่ลงในหลอดทดสอบ เพิ่ม 2 mLกรด trichloroacetic 8% บวก 1.0 mL ของ 0.1% 2, 4-dinitrophenylhydrazineการแก้ปัญหา ขนาดเลถูก แล้วเพิ่ม 5.0 mL 1.5 โมล/L, NaOHแก้ไขปัญหา ตรวจ absorbance ที่ความยาวคลื่น 520 nm แล้วเรียกว่าสารละลายมาตรฐาน กำหนดน้ำตาลลดลงเป็นวิธี DNS [25] ทำการตรวจสอบทั้งหมดครั้งที่สามและค่าเฉลี่ยถูกใช้สำหรับการสนทนา2.2.4 การเพิ่มประสิทธิภาพของเอนไซม์ lactate เงื่อนไขตัวเร่งปฏิกิริยาoxidase2.2.4.1 การอุณหภูมิเหมาะสม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.5 มล.) มีเพิ่มเข้าไปแต่ละหลอดทดสอบ 0.2 mL ของ 20 mmol/L LA และ 0.1 g ของเอนไซม์เอนไซม์ แต่ละท่อวางไว้ที่ 25, 37, 45, 55, 65และ 75 C ตามลำดับ อาบน้ำได้รับการรักษา10 นาที แล้ว 1 มิลลิลิตรของ 1 โมล/L 2, 4-dinitrophenylhydrazineเพิ่ม ทำปฏิกิริยาที่ 55 C สำหรับ 20 นาที และ5 mL ของ 0.04 โมล/L NaOH ถูกเพิ่มไปยังโซลูชัน ในที่สุด การมีกำหนดค่า absorbance ที่ 520 nm ความยาวคลื่น สำหรับเปรียบเทียบ เอนไซม์อิสระถูกใช้เป็นตัวควบคุม

Results (Thai) 2:

2.2.2 oxidase lactate ตรึง
สารละลายเอนไซม์ oxidase แลคติก (20 มิลลิลิตร) ผสมกับ 20 มิลลิลิตร
4% สารละลายโซเดียมอัลจิเนต การแก้ปัญหานี้ถูกเพิ่มเข้ามาช้าลงใน
400 มิลลิลิตร 0.2 โมล / ลิตรสารละลาย CaCl2 กับเข็มฉีดยา วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการ
กรองแล้วล้างแห้งที่จะได้รับอนุภาคตรึง
เอนไซม์แลคเตทและผลึกที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง.
2.2.3 วิธีการวัดสำหรับ LA, กรด pyruvic เอทานอลและ
การลดปริมาณน้ำตาล
แลคติกกรดเข้มข้นเอทานอลโดยวัดจาก SBA 40 C
ไบโอเซนเซอร์ [14] กรดไพรูถูกกำหนดดังต่อไปนี้ 1 มิลลิลิตร
ของสารละลายหมักได้ใส่ลงในหลอดทดลองเพิ่ม 2 มิลลิลิตร
8% กรดไตรคลอโรบวก 1.0 มิลลิลิตร 0.1% 2,4-Dinitrophenylhydrazine
การแก้ปัญหา Shaked ถูกเพิ่มเข้ามาแล้ว 5.0 มิลลิลิตร 1.5 mol / L NaOH
แก้ปัญหาตรวจสอบการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 520 นาโนเมตรจากนั้น
จะเรียกว่าสารละลายมาตรฐาน ลดน้ำตาลถูกกำหนด
เป็นวิธี DNS [25] ทั้งหมดตรวจสอบได้รับการดำเนินการสำหรับ
สามครั้งและค่าเฉลี่ยที่ใช้สำหรับการสนทนา.
2.2.4 การเพิ่มประสิทธิภาพของตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับเงื่อนไขการให้น้ำนมตรึง
oxidase
2.2.4.1 อุณหภูมิที่เหมาะสม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.5 มิลลิลิตร) ได้รับการ
บันทึกอยู่ในหลอดทดลองแต่ละคนมี 0.2 มิลลิลิตร 20 mmol / L LA และ 0.1 กรัมของ
เอนไซม์ตรึง หลอดแต่ละคนก็อยู่ที่ 25, 37, 45, 55, 65,
และ 75 องศาเซลเซียสตามลำดับ อาบน้ำถูกเก็บรักษาไว้
10 นาทีแล้ว 1 มิลลิลิตร 1 mol / L 2,4-Dinitrophenylhydrazine ถูก
เพิ่ม ปฏิกิริยาที่ได้รับการดำเนินการที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีและจากนั้น
5 มิลลิลิตร 0.04 mol / L NaOH ถูกบันทึกอยู่ในการแก้ปัญหา สุดท้าย
ค่าการดูดกลืนแสงได้รับการพิจารณาที่ความยาวคลื่น 520 นาโนเมตร สำหรับ
การเปรียบเทียบเอนไซม์อิสระถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม

Results (Thai) 3:

2.2.2 . การตรึงเอนไซม์ออกซิเดสเอนไซม์แลค
ติกโซลูชั่น ( 20 มิลลิลิตร ) ผสมกับ 20 ml
4 % โซเดียมอัลจิเนตโซลูชั่น โซลูชั่นนี้ค่อยๆ เพิ่มเป็น 400 ml
0.2 mol / l สารละลาย CaCl2 ด้วยกระบอกฉีดยา สารละลาย
แล้วกรอง ล้าง อบแห้งเพื่อให้ได้อนุภาคตรึง
และเอนไซม์และแข็งที่อุณหภูมิ 25  C 2 H .
2.2.3 . วิธีการวัดสำหรับ LA pyruvic acid ,เอทานอลและน้ำตาล

ลดกรดแลกติกความเข้มข้นเอทานอลถูกวัดโดย SBA 40 C
ไบโอเซนเซอร์ [ 14 ] กรดไพรูเวทตั้งใจดังนี้ 1 ml
ของการหมักคือนำใส่ลงไปในหลอดทดลอง เพิ่ม 2 ml
8 % กรดไตรคลอโรอะซิติก พลัส 1.0 มล. 0.1% 2,4-dinitrophenylhydrazine
โซลูชั่น สั่นอย่างถูกต้องแล้วเพิ่ม 5.0 มิลลิลิตร 1.5 mol / L , NaOH
, สารละลายตรวจสอบค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 520 nm , เรียกงั้น
เพื่อแก้ปัญหามาตรฐาน ปริมาณน้ำตาลตั้งใจ
เป็น DNS ) [ 25 ] ทั้งหมดสามารถดำเนินการสำหรับ
3 ครั้งโดยเฉลี่ย ที่ใช้สำหรับการอภิปราย .
2.2.4 . การหาสภาวะที่เหมาะสมสำหรับปฏิกิริยาตรึงเอนไซม์แลค

2.2.4.1 . อุณหภูมิที่เหมาะสม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.5 ml ) คือ
เพิ่มแต่ละหลอดด้วย 02 มล. 20 mmol / L ลาและ 0.1 g
เอนไซม์ . แต่ละหลอดอยู่ที่ 25 , 37 , 45 , 55 , 65 ,
 75 องศาเซลเซียส ตามลำดับ น้ำอาบเป็นรักษาสำหรับ
10 นาทีแล้ว 1 มิลลิลิตร / ลิตร 2,4-dinitrophenylhydrazine คือ
เพิ่ม 1 mol . ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการที่ 55  C เป็นเวลา 20 นาทีและจากนั้น
5 ml 0.04 mol / L ใช้เพิ่มเพื่อแก้ปัญหา ในที่สุด ,
ค่าการดูดกลืนสารละลายที่ 520 nm ความยาวคลื่น สำหรับ
เปรียบเทียบเอนไซม์ใช้
ฟรีควบคุม