Comparison of three RT-PCR based me

Comparison of three RT-PCR based methods: semi-quantitative, competitive and real-
-time RT-PCR for relative quantification of mRNA is presented. Aminopeptidase N expressed
on human promyeloid HL-60 cell line, at basal and activated state, served as a
model for comparison. HL-60 cells were stimulated with IFN- (6 ng/mL) for 72 h at 37 oC,
total cellular RNA was isolated, reverse transcribed to cDNA and semi-quantitative, competitive
and real-time RT-PCR were performed to obtain the relative levels of mRNA for
aminopeptidase N. The data obtained showed that all three RT-PCR based methods gave
reliable and comparable results, i.e. approximately twofold increase of aminopeptidase N
mRNA on IFN- stimulated HL-60 cells. Thus, in spite of rapid advances made in the area
of real-time RT-PCR, end-point RT-PCR such as competitive and semi-quantitative RT-
-PCR, although laborious and time consuming, may still remain useful techniques for relative
mRNA quantification when small number of samples are to be analyzed.
Key words: aminopeptidase N, APN, HL-60, RT-PCR, real-time PCR, competitive PCR

Results (Thai) 1:

เปรียบเทียบสาม RT-PCR ตามวิธี: กึ่งเชิงปริมาณ แข่งขัน และจริง--เวลา RT-PCR สำหรับนับญาติของ mRNA จะแสดง แสดง Aminopeptidase Nในมนุษย์ promyeloid HL 60 เซลล์บรรทัด โรค และการเปิดใช้งานสถานะ บริการเป็นการแบบจำลองสำหรับการเปรียบเทียบ HL-60 เซลล์ที่ถูกกระตุ้น ด้วย IFN - (6 ng/mL) สำหรับ h 72 ที่ 37 องศาเซลเซียสรวมเซลล์อาร์เอ็นเอที่แยก ย้อนทับศัพท์ กับ cDNA และกึ่งเชิงปริมาณ แข่งขันและแบบเรียลไทม์ RT-PCR ได้รับระดับของ mRNA สำหรับญาติN. aminopeptidase ข้อมูลที่ได้แสดงให้เห็นว่า วิธี RT-PCR ตามสามทั้งหมดให้เพิ่มความน่าเชื่อถือ และสามารถเปรียบเทียบผลลัพธ์ เช่นประมาณสองเท่าของ aminopeptidase NmRNA ใน IFN - ถูกกระตุ้น HL 60 เซลล์ ดังนั้น แม้ว่าความก้าวหน้าอย่างรวดเร็วในพื้นที่ของจริงที่ RT-PCR เลือก RT-PCR เช่นแข่งขัน และกึ่งเชิงปริมาณ RT--PCR แม้ว่าจะลำบาก และใช้เวลา นาน อาจยังคง เป็นประโยชน์เทคนิคสำหรับญาติmRNA นับเมื่อวิเคราะห์ได้จำนวนตัวอย่างขนาดเล็กคำสำคัญ: aminopeptidase N, APN, HL-60, RT-PCR, PCR แบบเรียลไทม์ PCR แข่งขัน

Results (Thai) 2:

การเปรียบเทียบทั้งสาม RT-PCR วิธีการตาม: กึ่งเชิงปริมาณและการแข่งขันจริง
-time RT-PCR สำหรับปริมาณญาติของ mRNA จะนำเสนอ aminopeptidase
ไม่มีแสดงในpromyeloid เซลล์ HL-60
ของมนุษย์ที่ฐานและเปิดใช้งานของรัฐทำหน้าที่เป็นแบบจำลองสำหรับการเปรียบเทียบ เซลล์ HL-60 ถูกกระตุ้นด้วย IFN-? (6 นาโนกรัม / มิลลิลิตร) เป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส
RNA โทรศัพท์มือถือรวมที่แยก,
ย้อนกลับไปถ่ายทอดยีนและกึ่งเชิงปริมาณในการแข่งขันและreal-time RT-PCR ได้ดำเนินการเพื่อให้ได้ระดับความสัมพันธ์ของ mRNA สำหรับ
aminopeptidase เอ็น ข้อมูลที่ได้แสดงให้เห็นว่าทั้งสาม RT-PCR
วิธีการตามให้ผลลัพธ์ที่น่าเชื่อถือและสามารถเทียบเคียงคือเพิ่มขึ้นสองเท่าประมาณaminopeptidase ไม่มี
mRNA ใน IFN-? กระตุ้น HL-60 เซลล์ ดังนั้นในทั้งๆที่มีความก้าวหน้าอย่างรวดเร็วที่เกิดขึ้นในพื้นที่ของ real-time RT-PCR แบบ end-จุด RT-PCR เช่นการแข่งขันและกึ่งเชิงปริมาณ RT- -PCR แม้ว่าลำบากและใช้เวลานานยังคงอาจจะยังคงใช้เทคนิคที่มีประโยชน์สำหรับญาติปริมาณ mRNA เมื่อจำนวนของกลุ่มตัวอย่างขนาดเล็กจะได้รับการวิเคราะห์. คำสำคัญ: aminopeptidase N, APN, HL-60, RT-PCR, PCR แบบ real-time PCR ในการแข่งขัน

Results (Thai) 3:

การเปรียบเทียบสามวิธี RT-PCR โดย : กึ่งปริมาณ และการแข่งขันที่แท้จริง -
- 4 เวลาปริมาณสัมพัทธ์ของ mRNA จะนำเสนอ บางหน N แสดงออก
ในมนุษย์ promyeloid hl-60 เซลล์บรรทัดที่แรกเริ่มและเปิดใช้งานรัฐ ทำหน้าที่เป็น
แบบเปรียบเทียบ hl-60 เซลล์ถูกกระตุ้นด้วย IFN -  ( 6 ng / ml ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง , แยก
อาร์เอ็นเอทั้งหมดโทรศัพท์มือถือ ,ย้อนกลับและวิธีและกึ่งปริมาณและเวลาการแข่งขัน
RT-PCR เพื่อให้ได้ระดับสัมพัทธ์ของ mRNA สำหรับ
บางหน . ข้อมูลที่ได้พบว่าทั้งสามนี้ใช้วิธีให้
ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และเปรียบเช่นสองเท่าประมาณเพิ่มบางหน n
mRNA ในหนึ่ง hl-60  กระตุ้นเซลล์ ดังนั้นทั้งๆที่มีความก้าวหน้าอย่างรวดเร็วในพื้นที่ของความหมาย :
4 แบบนี้ เช่น การแข่งขันและกึ่งปริมาณ RT -
- ) แม้จะลำบากและใช้เวลานาน อาจยังคงเป็นประโยชน์สำหรับเทคนิค mRNA ปริมาณสัมพัทธ์
เมื่อจำนวนเล็ก ๆของตัวอย่างที่จะวิเคราะห์
คำสำคัญ : บางหน APN , hl-60 n , RT-PCR , PCR แบบเรียลไทม์ เพื่อแข่งขัน