For Western blotting analysis, expo

For Western blotting analysis, exponentially growing cultures around 1-2 OD 600 nm were harvested and resuspended in fresh medium containing NaCl or sorbitol and incubated at eeoc. After different incubation times, 10 OD 600 nm cells were collected and frozen with liquid nitrogen. Protein extraction was performed on 5a w/v SDS and cells were mechanically disrupted with glass beads (425-600 mm) using the Precellys 24 tissue homogenizer (Advanced Biotech Italia Srl, Italy). Proteins extracted from these pellets were separated by SDS-PAGE on 8%w/v polyacrylamide gel and immunoblotting was performed as previously described (Gatti et al., 1994). Hog 1 and phosphor-Hog 1 were analyzed as reported (HernandezLopez et al., 2006; Panadero et al., 2006), with polyclonal anti-Hog1 (y-215) (sc-9079, SantaCruzBiotechnology) and phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) respectively, diluted1: 1000inTBS-BSA0.5f w/v and Tween 20 0.3%v/v. Actin was used to check the amount of protein loaded and was detected with monoclonal anti-actin antibody(cat.no.MAB1501, Chemicon International Inc., Massachusetts, USA) 1000-fold diluted in TBS-BSA0.5%w/v and Tween to. 3%v/v. Anti-rabbit and anti-mouse secondary antibodies were diluted 10, 000 times. Bounded antibodies were revealed using enhanced chemiluminescent substrate

Results (Thai) 1:

สำหรับ blotting วิธีการวิเคราะห์ การเจริญเติบโตเป็นทวีคูณเมื่อตะวันตกวัฒนธรรมปลูกรอบ nm OD 600 1-2 ถูกเก็บเกี่ยว และ resuspended ในกลางสดประกอบด้วย NaCl หรือซอร์บิทอล และ incubated ที่ eeoc หลังจากฟักตัวแตกต่างกันเวลา 10 OD 600 nm ในเซลล์ถูกรวบรวม และแช่แข็ง ด้วยไนโตรเจนเหลว ทำการสกัดโปรตีนตามของ 5a w/v SDS และเซลล์มีกลไกระหว่างสองวันกับลูกปัดแก้ว (425-600 mm) ใช้ homogenizer เนื้อเยื่อ Precellys 24 (ขั้นสูงเทคโนโลยีชีวภาพเลีย Srl อิตาลี) โปรตีนที่สกัดจากเกล็ดเหล่านี้ถูกคั่น ด้วย SDS หน้าบนเจ polyacrylamide 8%w/v และ immunoblotting ทำเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Gatti et al., 1994) หมู 1 และ phosphor-หมู 1 ได้วิเคราะห์เป็นรายงาน (HernandezLopez และ al., 2006 Panadero และ al., 2006), มี polyclonal ต่อต้าน-Hog1 (y-215) (sc-9079, SantaCruzBiotechnology) phospho-p38 MAPK (Thr180 Tyr182) และตามลำดับ diluted1: 1000inTBS BSA0.5f w/v 0.3%v/v Tween 20. แอกตินถูกใช้เพื่อตรวจสอบจำนวนโปรตีนที่โหลด และพบกับโมโนแอกตินต้านแอนติบอดี (cat.no.MAB1501, Inc. Chemicon นานาชาติ รัฐแมสซาชูเซตส์ สหรัฐอเมริกา) 1000-fold ผสมใน TBS-BSA0.5%w/v และ Tween จะ 3%v/v การป้องกันกระต่าย และเมาส์ป้องกันรองแอนตี้ได้แตกออก 10, 000 ครั้ง แอนตี้กี่ถูกเปิดเผยโดยใช้พื้นผิว chemiluminescent ขั้นสูง

Results (Thai) 2:

สำหรับการวิเคราะห์วิธี western blotting วัฒนธรรมชี้แจงการเจริญเติบโตรอบ 1-2 OD 600 นาโนเมตรถูกเก็บเกี่ยวและ resuspended ในสื่อสดมีโซเดียมคลอไรด์หรือซอร์บิทอและบ่มที่ EEOC หลังจากบ่มครั้งที่แตกต่างกัน, 10 OD 600 เซลล์นาโนเมตรถูกเก็บรวบรวมและแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลว การสกัดโปรตีนได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับ 5a w / v SDS และเซลล์กระจัดกระจายกลลูกปัดแก้ว (425-600 มม) โดยใช้ Precellys 24 เนื้อเยื่อโฮโมจีไน (ขั้นสูงเทคโนโลยีชีวภาพเลีย Srl, อิตาลี) โปรตีนสกัดจากเม็ดเหล่านี้ถูกแยกออกจากกันโดยวิธี SDS-PAGE เมื่อวันที่ 8% w / v เจลอะคริเลตและ immunoblotting ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Gatti et al., 1994) หมูที่ 1 และสารเรืองแสง-หมู 1 ที่ได้มาวิเคราะห์ตามที่รายงาน (HernandezLopez et al, 2006;. Panadero et al, 2006.) กับโพลีต่อต้าน Ho​​g1 (Y-215) (SC-9079, SantaCruzBiotechnology) และ PHOSPHO-p38 MAPK ( Thr180 / Tyr182) ตามลำดับ diluted1: 1000inTBS-BSA0.5f w / v และ Tween 20 0.3% v / v โปรตีนถูกใช้ในการตรวจสอบปริมาณของโปรตีนโหลดและพบกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านโปรตีน (cat.no.MAB1501, Chemicon อินเตอร์เนชั่นแนลอิงค์ซาชูเซตส์สหรัฐอเมริกา) 1,000 เท่าเจือจางใน TBS-BSA0.5% w / v และ Tween ไป 3% v / v กระต่ายป้องกันและต่อต้านเมาส์แอนติบอดีรองถูกเจือจาง 10, 000 ครั้ง แอนติบอดีขอบเขตถูกเปิดเผยโดยใช้พื้นผิว chemiluminescent ที่เพิ่มขึ้น

Results (Thai) 3:

สำหรับ Western blotting และชี้แจงการเติบโตวัฒนธรรมรอบ 1-2 OD 600 nm เก็บ resuspended ในอาหารที่มีเกลือหรือสด ซอร์บิทอลและบ่มที่ eeoc . หลังจากเวลาการบ่มที่แตกต่างกัน 10 OD 600 nm เซลล์ถูกเก็บและแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวการสกัดโปรตีน คือใช้ 5A w / v SDS และเซลล์มีการหยุดชะงักด้วยลูกปัดแก้ว ( 425-600 มม. ) โดยใช้ precellys 24 เนื้อเยื่อ Homogenizer ขั้นสูง ( Biotech Italia Srl อิตาลี ) โปรตีนที่สกัดได้จากเกล็ดเหล่านี้ถูกแยกจากกันโดยเอนไซม์บนเจลอะคริลาไมด์ 10 % w / v ) และได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( แก็ตตี้ et al . , 1994 )หมูหมู 1 และสารเรืองแสง 1 วิเคราะห์รายงาน ( hernandezlopez et al . , 2006 ; panadero et al . , 2006 ) กับการใช้ anti-hog1 ( y-215 ) ( sc-9079 santacruzbiotechnology , ) และ phospho-p38 mapk ( thr180 / tyr182 ) ตามลำดับ diluted1 : 1000intbs-bsa0.5f w / v และทวี 20 0.3 % v / v . ใช้แอคตินการตรวจสอบปริมาณโปรตีนและโมโนโคลนอลแอนตี้กับโหลดที่ตรวจพบแอนติบอดี actin ( cat.no .mab1501 chemicon นานาชาติ , อิงค์ , Massachusetts , USA ) 1000 พับเจือจางใน tbs-bsa0.5 % w / v และทวี . 3 % v / v . และระดับแอนติบอดีต่อต้านป้องกันกระต่ายเมาส์ลด 10 , 000 ครั้ง จำกัด ) ได้เปิดเผยการเพิ่มสาร chemiluminescent