TheAgrobacterium-mediated transform

TheAgrobacterium-mediated transformation method described here was developed
from the genotype-independent shoot apex plant regeneration method
we originated for cotton (Gould and Smith, 1988; Gould et al., 1991a). This
transformation and regeneration approach (Smith et al., 1992) has been used
in Agrobacterium-mediated transformation of petunia (Ulian et al., 1988),
maize (Gould et al., 1991b) and rice (Park et al., 1997). A more efficient
and detailed procedure is described here. Changes to earlier procedures include
use of precultured shoots in the inoculation step to insure activation of
cell division in apical meristematic tissues, and inclusion of cytokinin in the
culture medium during selection to promote shoot growth.
Use of the Agrobacterium vector is technically simple and gene transfers
are often low copy, permanent and heritable. In this method, genetic transformation
occurs following inoculation of dividing meristematic cells in a
shoot apex with a supervirulent strain of A. tumefaciens. Hormonal manipulation
is kept to a minimum to permit the native developmental program in the apex to control plant regeneration, allowing regeneration to be plantdriven
and, therefore, genotype-independent. Plants generate directly from
inoculated shoots on a simple MS-based medium (Murashige and Skoog;
1962; Shabde and Murashige, 1977) that has been used to regenerate many
cultivars of Gossypium (Gould et al., 1991a), maize (Gould et al., 1991b) and
other cereals. No other hormonal manipulations are necessary unless shoot
multiplication is desired (Hemphill et al., 1998).

Results (Vietnamese) 1:

Phương pháp TheAgrobacterium trung gian chuyển đổi được diễn tả ở đây đã được phát triểntừ kiểu gen độc lập đỉnh thực vật tái tạo phương pháp bắnchúng tôi có nguồn gốc từ cho bông (Gould và Smith, 1988; Gould et al., 1991a). Điều nàydụng cụ và phương pháp chuyển đổi và tái sinh (Smith và ctv., năm 1992) đã được sử dụngtrong Agrobacterium trung gian chuyển đổi của petunia (Ulian et al., 1988),ngô (Gould và ctv., 1991b) và gạo (Park và ctv., 1997). Một hiệu quả hơnvà chi tiết các thủ tục được mô tả ở đây. Các thay đổi trước đó thủ tục bao gồmsử dụng precultured bắn trong bước tiêm chủng để đảm bảo hoạtphân chia tế bào ở đỉnh meristematic mô, và bao gồm của cytokinin trong cácvăn hóa các phương tiện trong các lựa chọn để thúc đẩy phát triển chụp.Sử dụng véc tơ Agrobacterium là đơn giản về mặt kỹ thuật và chuyển giao các genthường là sao chép thấp, thường xuyên và di truyền. Trong phương pháp này, biến đổi di truyềnxảy ra sau tiêm chủng của phân chia tế bào meristematic trong mộtbắn đỉnh với một dòng supervirulent A. tumefaciens. Thao tác nội tiết tốđược giữ ở mức tối thiểu cho phép các chương trình phát triển của Thổ dân ở apex để kiểm soát tái sinh thực vật, cho phép tái tạo được plantdrivenvà, do đó, độc lập kiểu gen. Cây tạo ra trực tiếp từtiêm chủng cành trên một đơn giản dựa trên MS phương tiện (Murashige và Skoog;năm 1962; Shabde và Murashige, 1977) mà đã được sử dụng để tái tạo nhiềutrong số các giống bông (Gould et al., 1991a), ngô (Gould và ctv., 1991b) vàngũ cốc khác. Không có thao tác kích thích tố khác là cần thiết trừ khi bắnphép nhân là mong muốn (Hemphill CTV, 1998).

Results (Vietnamese) 2:

Phương pháp chuyển đổi TheAgrobacterium qua trung gian mô tả ở đây đã được phát triển
từ các shoot đỉnh phương pháp tái sinh cây kiểu gen độc lập
, chúng tôi có nguồn gốc cho bông (Gould và Smith, 1988; Gould et al, 1991a.). Điều này
chuyển đổi và tái sinh tiếp cận (Smith et al., 1992) đã được sử dụng
trong Agrobacterium của cây dã yên thảo (Ulian et al., 1988),
ngô (Gould et al., 1991b) và gạo (Park et al., 1997 ). Một hiệu quả hơn
thủ tục và chi tiết được mô tả ở đây. Thay đổi để làm thủ tục trước đó bao gồm
sử dụng các chồi precultured trong bước cấy để đảm bảo sự hoạt hóa của
tế bào phân chia trong các mô mô phân sinh đỉnh, và bao gồm của cytokinin trong
môi trường nuôi cấy trong lựa chọn để thúc đẩy tăng trưởng chồi.
Sử dụng các vector Agrobacterium là kỹ thuật đơn giản và chuyển gen
là bản thường thấp, thường xuyên và di truyền. Trong phương pháp này, biến đổi di truyền
xảy ra tiêm sau đây phân chia tế bào mô phân sinh ở
đỉnh chụp với một chủng supervirulent của A. tumefaciens. Thao tác nội tiết tố
được giữ ở mức tối thiểu cho phép các chương trình phát triển tự nhiên trong các đỉnh để kiểm soát sự tái sinh cây, cho phép tái tạo được plantdriven
và, do đó, kiểu gen độc lập. Cây tạo ra trực tiếp từ
chồi cấy trên môi trường MS-đơn giản dựa trên (Murashige và Skoog,
1962; Shabde và Murashige, 1977) đã được sử dụng để tái tạo nhiều
giống cây trồng của Gossypium (. Gould et al, 1991a), ngô (Gould et al ., 1991b) và
các loại ngũ cốc khác. Không có thao tác nội tiết tố khác là cần thiết trừ khi chụp
nhân được mong muốn (Hemphill et al., 1998).