MATERIALS AND METHODSOrganisms I. o

MATERIALS AND METHODS
Organisms I. orientalis MF-121, an acidesalt tolerant yeast, was isolated
from an acidic hot spring (11). Saccharomyces cerevisiae kyokai 7 was obtained
from the Brewing Society of Japan (Tokyo, Japan). S. cerevisiae NBRC 1953 and
Pichia stipitis NBRC 10063 were obtained from the NITE Biological Resource
Center (Chiba, Japan).
Preparation of acid and salt mineralized media Since the nutrient
medium composed of peptone and yeast extract is expensive, a cheaper mineralbased
medium was used. Considering the simple preparation of acidified and saltrich
medium, a mineralized medium (M medium) composed of (NH4)2SO4 0.2 g,
KH2PO4 0.1 g, MgSO4$7H2O 75 mg, ZnSO4$7H2O 6.0 mg, and yeast extract 0.05 g in
100 ml distilled water was used to investigate the ethanol fermentations properties
of yeasts.Mmedium supplemented with salt (MS medium) was prepared by mixing
M medium with appropriate amounts of sodium sulfate. Acid M medium was also
prepared by mixing M medium with appropriate amounts of 2.0 M H2SO4. M
medium, salt solution, sulfuric acid solution, and sugar solution were sterilized
separately at 120
C for 20 min and then mixed in order to prepare an objective
medium in a clean bench. MS media containing monosaccharides (5.0 g/100 ml) as the sole source of carbon such as glucose (G), mannose (M), galactose (L), fructose
(F), xylose (X), and arabinose (A) are expressed as GMS, MMS, LMS, FMS, XMS, and
AMS, respectively.
Isolation of a new acid- and salt-tolerant yeast capable of fermenting
ethanol from xylose Water samples (10 ml) collected from rivers (about pH
2.0) flowing through the area of Kusatsu hot spring were mixed with acid GMS
medium (pH 2.5, 10 ml) containing 2.5% sodium sulfate, and incubated at 30
C for
1 week. One milliliter of the culture was transferred into acid XMS medium (pH 2.5,
10 ml) containing 2.5% sodium sulfate, and was incubated at 30
C for 1 week. This
transfer operation to acid XMS mediumwas repeated 5 times. Appropriately diluted
cultures were spread on plates of the acid XMS agar medium and incubated at 30
C
for 1 week. Colonies picked up from the plates were incubated in the liquid acid XMS
medium (1.0 ml) using 96-well microplates over the course of 1 week. The
concentration of ethanol was analyzed using an alcohol densitometer (Alcomate
AL-2, Riken Keiki, Tokyo).

Results (Thai) 1:

วัสดุและวิธีการI. มีชีวิต orientalis MF-121 ยีสต์ทน acidesalt ถูกแยกจากการเป็นกรดน้ำพุร้อน (11) Saccharomyces cerevisiae kyokai 7 ได้รับจากสังคมที่ผลิตเบียร์ของประเทศญี่ปุ่น (โตเกียว ญี่ปุ่น) S. cerevisiae NBRC 1953 และได้รับมาจากทรัพยากรชีวภาพไนท์ Pichia stipitis NBRC 10063ศูนย์ (ชิบะ ญี่ปุ่น)การเตรียมกรด และเกลือ mineralized สื่อตั้งแต่สารกลางประกอบด้วย peptone และสารสกัดจากยีสต์ที่มีราคาแพง mineralbased ราคาถูกกว่ามีใช้สื่อ ง่ายในการจัดพิจารณากรด และ saltrichขนาดกลาง สื่อกลาง mineralized (M กลาง) ประกอบด้วย (NH4) 2SO4 0.2 กรัมKH2PO4 0.1 กรัม MgSO4$ 75 มก. ZnSO4$ 7H2O 7H2O 6.0 mg และยีสต์สกัด 0.05 กรัม100 ml กลั่นน้ำใช้ในการตรวจสอบคุณสมบัติหมักแหนมเอทานอลของยีสต์ จัดทำ โดยการผสม Mmedium ที่เสริม ด้วยเกลือ (MS ปานกลาง)ขนาดกลาง M กับโซเดียมซัลเฟตจำนวนที่เหมาะสม กรด M ปานกลางก็เตรียม โดยผสมปานกลาง M กับ 2.0 M H2SO4 จำนวนที่เหมาะสม มเชื้อกลาง เกลือ กรดกำมะถัน และการแก้ไขปัญหาแก้ปัญหาน้ำตาลต่างหากที่ 120 C 20 นาที และจากนั้น ผสมการจัดทำวัตถุประสงค์ปานกลางในม้านั่งสะอาด สื่อ MS ประกอบด้วย monosaccharides (5.0 g/100 ml) เป็นแหล่งเดียวของคาร์บอนเช่นกลูโคส (G), mannose (M), กาแล็กโทส (L) ฟรักโทส(ฉ) สาร (X), และ arabinose มี (A) แสดงเป็น GMS, MMS, LMS, FMS, XMS และAMS ตามลำดับแยกยีสต์กรด และเกลือ-tolerant ใหม่ความสามารถในการหมักเอทานอลจากสารตัวอย่างน้ำ (10 ml) รวบรวมจากแม่น้ำ (เกี่ยวกับค่า pH2.0) ไหลผ่านพื้นที่ของบ่อน้ำพุร้อนคุซัทสึถูกผสมกับกรด GMSกลาง (pH 2.5, 10 ml) ที่มี 2.5% โซเดียมซัลเฟต และรับการกก 30 c เป็นเวลา1 สัปดาห์ โอนย้ายเป็นกรดปานกลาง XMS (pH 2.5 มิลลิเมตรหนึ่งของวัฒนธรรม10 ml) ที่ประกอบด้วย 2.5% โซเดียมซัลเฟต และ incubated 30 c เป็นเวลา 1 สัปดาห์ นี้ดำเนินการถ่ายโอนกรด XMS mediumwas ซ้ำ 5 ครั้ง ผสมอย่างเหมาะสมวัฒนธรรมที่แพร่กระจายในจานขนาดกลางวุ้น XMS กรด และรับการกกที่ 30 Cสำหรับ 1 สัปดาห์ อาณานิคมที่หยิบขึ้นมาจากแผ่นได้รับการกกใน XMS กรดของของเหลวขนาดกลาง (1.0 มิลลิลิตร) ใช้ microplates 96 หลุมตลอด 1 สัปดาห์ การความเข้มข้นของเอทานอลถูกวิเคราะห์โดยใช้การ densitometer แอลกอฮอล์ (Alcomateบริษัทริเก้น Keiki โตเกียว AL-2)

Results (Thai) 2:

วัสดุและวิธีการ
แก I. orientalis MF-121 เป็น acidesalt ยีสต์ใจกว้าง, ที่แยกได้
จากน้ำพุร้อนที่เป็นกรด (11) Saccharomyces cerevisiae Kyokai 7 ที่ได้รับ
จากสมาคมผู้ผลิตเบียร์ของญี่ปุ่น (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) S. cerevisiae NBRC 1953 และ
Pichia stipitis NBRC 10063 ที่ได้รับจาก NITE ชีวภาพทรัพยากร
เซ็นเตอร์ (ชิบะประเทศญี่ปุ่น).
การเตรียมความพร้อมของกรดและเกลือสื่อ mineralized เนื่องจากสารอาหาร
ขนาดกลางประกอบด้วยเปปโตนและยีสต์สารสกัดที่มีราคาแพงเป็น mineralbased ถูกกว่า
สื่อถูกนำมาใช้ . เมื่อพิจารณาถึงการเตรียมความพร้อมที่เรียบง่ายของกรดและ saltrich
กลางเป็นสื่อ mineralized (M กลาง) ประกอบด้วย (NH4) 2SO4 0.2 กรัม,
KH2PO4 0.1 กรัม, MgSO4 $ 7H2O 75 มิลลิกรัม ZnSO4 $ 7H2O 6.0 มิลลิกรัมและยีสต์สกัด 0.05 กรัมใน
100 มล. น้ำกลั่นถูกใช้ในการตรวจสอบกระบวนการหมักเอทานอลคุณสมบัติ
ของ yeasts.Mmedium เสริมด้วยเกลือ (MS กลาง) ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม
ขนาดกลาง M กับจำนวนเงินที่เหมาะสมของโซเดียมซัลเฟต กรด M ยังได้
จัดทำขึ้นโดยผสมขนาดกลาง M กับจำนวนเงินที่เหมาะสมของ 2.0 M H2SO4 M
กลางสารละลายเกลือ, สารละลายกรดซัลฟูริกและสารละลายน้ำตาลที่ได้รับการฆ่าเชื้อ
แยกที่ 120 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีแล้วนำมาผสมเพื่อเตรียมความพร้อมวัตถุประสงค์
ขนาดกลางในม้านั่งทำความสะอาด สื่อ MS ที่ monosaccharides (5.0 กรัม / 100 มล.) เป็นแหล่งคาร์บอนเช่นกลูโคส (G), แมนโนส (M), กาแลคโต (L), ฟรุกโตส
(F) ไซโล (X) และอราบิโน (A) มี แสดงเป็น GMS, MMS, LMS, FMS, XMS และ
AMS ตามลำดับ.
การแยกของกรดใหม่และเกลือยีสต์ทนความสามารถในการหมัก
เอทานอลจากตัวอย่างน้ำไซโลส (10 มล.) ที่เก็บรวบรวมจากแม่น้ำ (ประมาณค่า pH
2.0) ไหลผ่าน พื้นที่ Kusatsu น้ำพุร้อนที่ถูกผสมกับกรด GMS
กลาง (pH 2.5, 10 มล.) ที่มี 2.5% โซเดียมซัลเฟตและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
1 สัปดาห์ หนึ่งมิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่ถูกย้ายเป็นกรด XMS กลาง (pH 2.5,
10 มล.) ที่มี 2.5% โซเดียมซัลเฟตและได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 สัปดาห์ นี้
ดำเนินการถ่ายโอนไป XMS กรด mediumwas ซ้ำ 5 ครั้ง เจือจางเหมาะสม
วัฒนธรรมกระจายอยู่บนจานของกลาง XMS วุ้นกรดและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 1 สัปดาห์ อาณานิคมหยิบขึ้นมาจากจานถูกบ่มในกรดของเหลว XMS
กลาง (1.0 มล.) โดยใช้ 96 หลุม microplates ในช่วง 1 สัปดาห์
ความเข้มข้นของเอทานอลได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ความหนาแน่นของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (Alcomate
AL-2, Riken Keiki โตเกียว)

Results (Thai) 3:

วัสดุและวิธีการสิ่งมีชีวิต mf-121 . orientalis , acidesalt ใจกว้างยีสต์ คือแยกจากบ่อน้ำพุร้อนที่เป็นกรด ( 11 ) Saccharomyces cerevisiae kyokai 7 ได้รับจากการหมักสังคมของญี่ปุ่น ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) S . cerevisiae nbrc 1953 และpichia stipitis nbrc 10063 ได้มาจากการประเมินทรัพยากรชีวภาพศูนย์ ( Chiba , ญี่ปุ่น )การเตรียมกรดและเกลือ mineralized สื่อเนื่องจากธาตุอาหารประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์ ตามลำดับ ) และมีราคาแพง เป็น mineralbased ถูกกว่าสื่อที่ใช้ พิจารณาการปรับ saltrich และเรียบง่ายปานกลาง , เป็น mineralized ขนาดกลาง ( M ) ) ประกอบด้วย ( NH4 ) 2so4 0.2 กรัมkh2po4 0.1 กรัม MgSO4 ใ $ 7h2o 75 มิลลิกรัม znso4 $ 7h2o 6.0 มิลลิกรัมและสารสกัดจากยีสต์ใน 0.05 กรัม100 มล. น้ำกลั่นใช้ตรวจสอบคุณสมบัติ fermentations เอทานอลของยีสต์ mmedium เสริมด้วยเกลือ ( MS ) เตรียมโดยการผสมมอาหารในปริมาณที่เหมาะสม โซเดียม ซัลเฟต กรด M ) ยังเตรียมโดยการผสมอาหารในปริมาณที่เหมาะสมของ 2.0 M M กรดซัลฟิวริก . เมตรกลาง , สารละลายเกลือ สารละลายกรดซัลฟิวริก และสารละลายน้ำตาลถูกฆ่าเชื้อที่แยก 120c นาน 20 นาที คลุกให้เข้ากัน เพื่อเตรียมการปานกลาง สะอาด ในบัลลังก์ MS ที่ประกอบด้วยมอโนแซ็กคาไรด์ ( 5.0 g / 100 ml ) เป็นแหล่งที่มา แต่เพียงผู้เดียวของคาร์บอน เช่น กลูโคส แมนโนส ( G ) ( M ) , กาแลคโตส ( L ) , ฟรุคโตส( F ) , B ( x ) และน้ำตาล ( ) จะแสดงเป็นกรัม , MMS , LMS , FMS xms , และAMS ตามลำดับการแยกกรด - ใหม่และความสามารถในการหมักยีสต์ทนเค็มเอทานอลจากไซโลส ( 10 ml ) ตัวอย่างน้ำที่เก็บมาจากแม่น้ำ ( เกี่ยวกับอ2.0 ) ที่ไหลผ่านพื้นที่ของ Kusatsu บ่อน้ำร้อนผสมกรดกรัมปานกลาง ( pH 2.5 , 10 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 2.5% โซเดียมซัลเฟตและบ่มที่อุณหภูมิ 30 C สำหรับ1 สัปดาห์ หนึ่งมิลลิลิตรของวัฒนธรรมถูกย้ายเป็นกรดปานกลาง ( pH 2.5 , xms10 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 2.5% โซเดียมซัลเฟตและบ่มที่อุณหภูมิ 30 C เป็นเวลา 1 สัปดาห์ นี้การถ่ายโอนการดำเนินงานกรด xms mediumwas ซ้ำ 5 ครั้ง อย่างเหมาะสม ทั้งนี้วัฒนธรรมที่ถูกแพร่กระจายในจานของกรด xms วุ้นขนาดกลางและบ่มที่อุณหภูมิ 30Cใน 1 สัปดาห์ อาณานิคมหยิบจากจาน ) กรดของเหลว xms คือปานกลาง ( 1.0 มล. ) ใช้ 96 ดี microplates ผ่านหลักสูตร 1 สัปดาห์ ที่ความเข้มข้นของเอทานอลคือแอลกอฮอล์ โดยใช้เครื่อง ( อัลโคเมตal-2 riken keiki , โตเกียว )