The leaf tissues of 4-month-old cof

The leaf tissues of 4-month-old coffee plants
were ground under liquid nitrogen using a mortar
and pestle, and total RNA was extracted using a
GeneAll kit (GeneAll Biotechnology Co., Ltd.,
Korea). The purity and concentration of total
RNA were accurately determined by
spectrophotometric measurement using a
NanoDrop US/ND-1000 spectrophotometer
(Qiagen, USA). The complementary DNA
(cDNA) was synthesized from 5 g of total RNA
using the reverse transcriptase and oligo dT
primers (Promega, USA).
Identification and isolation of coffee genes
The full genome sequences of C. canephora
are found at the website (http://coffeegenome.org).
The nucleotide sequences of ERD
(early responsive to dehydration) family genes
were downloaded from the database and utilized
as a template to design the primers for cloning
the genes. The coding regions of ERD genes
were amplified by polymerase chain reaction
(PCR) using the cDNA as a template and the
primers specific to each gene, and the resulting
PCR products were ligated into the pGEM T-easy
vector (Promega, USA). The amplification and
sequence of target genes was verified by DNA
sequencing.

Results (Vietnamese) 2:

Các mô lá của cây cà phê 4 tháng tuổi
được mặt đất dưới nitơ lỏng bằng cối
và chày, và tổng số RNA đã được chiết xuất bằng cách sử dụng
bộ GeneAll (GeneAll Biotechnology Co., Ltd,
Hàn Quốc). Độ tinh khiết và nồng độ của tổng số
RNA được xác định một cách chính xác bằng cách
đo quang phổ sử dụng một
máy quang phổ NanoDrop Mỹ / NĐ-1000
(Qiagen, Mỹ). DNA bổ sung
(cDNA) được tổng hợp từ 5 g tổng RNA
bằng cách sử dụng sao chép ngược và oligo dT
mồi (Promega, Mỹ).
Xác định và phân lập gen cà phê
Các trình tự bộ gen đầy đủ của C. canephora
được tìm thấy tại trang web (http : //coffeegenome.org).
các trình tự nucleotide của ERD
(đầu đáp ứng với tình trạng mất nước) gen gia đình
đã được tải về từ cơ sở dữ liệu và sử dụng
như một khuôn mẫu để thiết kế các mồi cho nhân bản
gen. Các vùng mã hóa của gen ERD
được khuếch đại bằng phản ứng chuỗi polymerase
(PCR) sử dụng cDNA làm mẫu và
cặp mồi đặc hiệu cho mỗi gen, và kết quả là
sản phẩm PCR được gắn vào các pGEM T-dễ
vector (Promega, Mỹ). Các khuếch đại và
trình tự các gen mục tiêu đã được xác minh bởi DNA
sequencing.