The engineered strain of T. aotearo

The engineered strain of T. aotearoense LA1002, in which the
genes encoding phosphotransacetylase and acetate kinase was
knocked out to block the acetate pathway compared to the wild
type strain SCUT27 for lactic acid production, was developed in
our previous work (Yang et al., 2013). Exponentially growing cultures
obtained from selected single colonies were subsequently
maintained in 10-mL crimp-sealed anaerobic tubes with 25%
sterilized glycerol and stored at 80 C for long-term conservation
(Li et al., 2010). The cultures were activated by transferring 2 mL of
the stock culture into crimp-sealed anaerobic tubes with 4 mL of
fresh MTC medium (Li et al., 2010) then incubated at 55 C for
about 12 h to reach an optical density (OD600) of 0.8. The cells were
further enriched by inoculating 10% v/v of the previous culture into
50 mL fresh MTC medium and incubated under the given conditions
to an OD600 of 1.0 before inoculation.
Two microorganisms, Aspergillus awamori (A. awamori, ATCC
14331) and Aspergillus oryzae (A. oryzae), were used to
produce amylolytic enzymes and proteolytic enzymes, respectively.
A. awamori was obtained from the American Type Culture
Collection (Rockville, MD, USA). A. oryzae was kindly provided by
Amoy Food Ltd. (Hong Kong), which was isolated from a soy sauce
starter. Their storage and sporulation for inoculum preparation
were conducted as described by Leung et al. (2012).
All chemicals used in the present study were purchased from
Acros Organics (Morris Plains, NJ, USA) and Sigma–Aldrich
(St. Louis, MO, USA) except where otherwise specified.
2

Results (Thai) 1:

พันธุ์ของต. aotearoense LA1002 การออกแบบการยีนที่ถูกเข้ารหัส phosphotransacetylase และ acetate kinaseโบว์ลิ่งออกสกัดทางเดิน acetate ที่เปรียบเทียบไปยังป่าชนิดสายพันธุ์ SCUT27 การผลิตกรด ได้รับการพัฒนาในของเราก่อนหน้านี้งาน (Yang et al., 2013) วัฒนธรรมการเจริญเติบโตขยายตัวอย่างมากรับจากเดียวเลือกได้อาณานิคมในเวลาต่อมารักษาใน 10 mL ปิดผนึกใจคับไม่ใช้หลอด 25%sterilized กลีเซอร และเก็บไว้ที่ 80 C สำหรับอนุรักษ์ระยะยาว(Li et al., 2010) วัฒนธรรมถูกเปิดใช้งาน โดยการถ่ายโอน 2 mL ของวัฒนธรรมในใจคับปิดผนึกหลอดไม่ใช้กับ mL 4 ของหุ้นแล้ว incubated สดกลาง MTC (Li et al., 2010) ที่ C 55 สำหรับประมาณ 12 h ถึงการแสงความหนาแน่น (OD600) ของ 0.8 เซลล์ได้อุดมไปด้วยเพิ่มเติม inoculating 10% v/v ของวัฒนธรรมก่อนหน้าเป็นสื่อ MTC สด 50 มล. และ incubated ภายใต้เงื่อนไขที่กำหนดต้องการ OD600 ของ 1.0 ก่อน inoculationจุลินทรีย์สอง Aspergillus awamori (A. awamori, ATCC14331) และใช้ Aspergillus แห้งระดับต่าง ๆ (แห้ง A. ระดับต่าง ๆ),ผลิตเอนไซม์ amylolytic และเอนไซม์ proteolytic ตามลำดับAwamori อ.ได้รับจากวัฒนธรรมอเมริกันชนิดคอลเลกชัน (ร็อควิลล์ MD สหรัฐอเมริกา) อ.แห้งระดับต่าง ๆ กรุณาให้Amoy อาหาร จำกัด (Hong Kong), ซึ่งถูกแยกจากซอสถั่วเหลืองสตาร์ท การจัดเก็บและ sporulation สำหรับการเตรียม inoculumได้ดำเนินตามโดยเหลียง et al. (2012)ซื้อจากสารเคมีทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันซิกมา-Aldrich และอินทรีย์ Acros (ราบมอร์ริส NJ สหรัฐอเมริกา)(St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) ยกเว้นที่ระบุเป็นอย่างอื่น2

Results (Thai) 2:

สายพันธุ์วิศวกรรมของ T. aotearoense LA1002
ซึ่งในยีนphosphotransacetylase
ไคเนสและอะซิเตทถูกเคาะออกมาเพื่อป้องกันการเดินacetate
เมื่อเทียบกับป่าประเภทSCUT27
สายพันธุ์สำหรับการผลิตกรดแลคติกได้รับการพัฒนาในการทำงานของเราก่อนหน้า(Yang et al., 2013) วัฒนธรรมชี้แจงการเติบโตที่ได้รับจากอาณานิคมเลือกเดียวต่อมาได้รับการเก็บรักษาไว้ใน10 ml จีบปิดผนึกหลอดแบบไม่ใช้ออกซิเจน 25% กลีเซอรอลฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสเพื่อการอนุรักษ์ในระยะยาว(Li et al., 2010) วัฒนธรรมที่ถูกเปิดใช้งานโดยการโอน 2 มิลลิลิตรวัฒนธรรมหุ้นลงในหลอดแบบไม่ใช้ออกซิเจนจีบปิดผนึก4 มิลลิลิตรกลาง MTC สด (Li et al., 2010) บ่มแล้วที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลาประมาณ12 ชั่วโมงในการเข้าถึงความหนาแน่นออปติคอล (OD600) 0.8 เซลล์ที่ถูกผสานต่อไปโดยการฉีดวัคซีน 10% ปริมาตร / ปริมาตรของวัฒนธรรมที่ก่อนหน้านี้ลงในกลางMTC 50 มลสดและบ่มภายใต้เงื่อนไขที่กำหนดไปยังOD600 1.0 ก่อนที่จะฉีดวัคซีน. สองจุลินทรีย์เชื้อรา Aspergillus awamori (ก awamori, ATCC 14331) และ Aspergillus oryzae (A. oryzae) ถูกนำมาใช้ในการผลิตเอนไซม์เอนไซม์และเอนไซม์โปรตีนตามลำดับ. เอ awamori ที่ได้รับจากวัฒนธรรมอเมริกันประเภทสะสม(Rockville, MD, USA) A. oryzae ได้ให้ความกรุณาโดยAmoy อาหาร จำกัด (ฮ่องกง) ซึ่งถูกแยกออกจากซอสถั่วเหลืองเริ่มต้น การจัดเก็บและสร้างสปอร์สำหรับการเตรียมหัวเชื้อของพวกเขาได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยเหลียง, et al (2012). สารเคมีที่ใช้ในการศึกษาในปัจจุบันที่ซื้อมาจากAcros Organics (มอร์ริสเพลนส์, นิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา) และ Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) ยกเว้นในกรณีที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น. 2

Results (Thai) 3:

วิศวกรรมสายพันธุ์ของ aotearoense la1002 ซึ่งในยีน acetate kinase เป็น phosphotransacetylase

และเคาะออกมาบล็อกอะซิเตท ) เมื่อเทียบกับป่า
ชนิดสายพันธุ์ scut27 เพื่อผลิตกรดแลกติกการเข้ารหัสที่ถูกพัฒนาขึ้นในการทำงานก่อนหน้านี้ของเรา
( ยาง et al . , 2013 ) ชี้แจงการเลือกเดียวที่ได้จากวัฒนธรรม

ต่อมาอาณานิคมคือรักษาใน 10 ml จีบปิดผนึกท่ออากาศกับ 25 %
ฆ่าเชื้อกลีเซอรอลและอุณหภูมิ 80 C
การอนุรักษ์ระยะยาว ( Li et al . , 2010 ) วัฒนธรรมถูกเปิดใช้งานโดยการโอน 2 มล.
หุ้นวัฒนธรรมเข้าไปจีบปิดผนึกท่อขนาด 4 ml
ขนาดกลาง MTC สด ( Li et al . , 2010 ) แล้วบ่มที่ 55 C
12 H จะถึงความหนาแน่นของแสง ( od600 ) 0.8 . เซลล์ถูก
เพิ่มเติมที่อุดมด้วยโดยณ 10% v / v ของวัฒนธรรมก่อนหน้าเป็น
50 มล. ขนาดกลาง MTC สดและบ่มภายใต้สภาพการณ์
เป็น od600 1.0 ก่อนการฉีดวัคซีน .
2 จุลินทรีย์ Aspergillus awamori ( A . awamori , ATCC
14331 ) และ Aspergillus oryzae ( A . oryzae ) , ถูกใช้เพื่อผลิตเอนไซม์
ไมโลไลติกโปรตีนและเอนไซม์ตามลำดับ
Aawamori ได้จากชนิดของอเมริกันวัฒนธรรม
คอลเลกชัน ( ร็อกวิลล์ , MD , USA ) A . oryzae คือกรุณาโดย
Amoy อาหารจำกัด ( ฮ่องกง ) ซึ่งถูกแยกจากซอสถั่วเหลือง
เริ่มต้น การจัดเก็บและการเตรียมความพร้อมสำหรับ
3 ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดย Leung et al . ( 2012 ) .
สารเคมีทั้งหมดที่ใช้ในการศึกษา คือซื้อจาก
acros Organics ( Morris Plains , NJ ,สหรัฐอเมริกา ) และ Sigma –ดิช
( St . Louis , MO , USA ) ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น .
2