13.11 Measurement of viabilityViabi

13.11 Measurement of viability
Viability of micro-organisms is usually defined as the ability to reproduce. This is a useful parameter to determine since it provides a predictive measure of the ability of yeast to reproduce when pitched into wort. In traditional microbiology, viability is assessed by plating out serial dilutions of suspension of cells onto a suitable medium. Each colony that develops after incubation is assumed to have derived from a single cell, therefore the colony count is directly related to the number of viable cells in the original suspension. Using this approach the viable cell concentration is usually expressed as the number of colony forming units (cfu). The colony counting procedure takes several days to obtain a result. There is a rapid version of the test in which micro-colonies are allowed to grow on nutrient agar poured into a well in a specially designed microscope slide. The micro-colonies can be counted using a microscope. This reduces the time taken to obtain a result from days to several hours. Even using the rapid method, colony-counting techniques are too slow to be used to support decisions regarding the fitness of yeast to be pitched. Rapid methods for the determination rely on the use of vital stains. These are dyes which are excluded from viable cells but not dead ones. Alternatively, they may be taken up by all cells and subject to metabolic modification by living cells. The latter is accompanied by a colour change. Several dyes have been used to assess viability. Some of these, together with their mode of action are shown in Table 13.2.
The most used method for the assessment of yeast viability in breweries employs methylene blue and a haemocytometer counting chamber (EBC Analytica Microbiologica, 1992). The haemocytometer consists of a glass microscope slide, which contains two chambers of known volume. The bases of the chambers are divided into a number of small squares to form a grid which facilitates counting. To determine viability a suitable dilution of yeast slurry is mixed with an equal volume of a solution of methylene blue and placed into the haemocytometer. Viable cells take up methylene blue and reduce the dye to the colourless leuco form. Dead cells cannot reduce the dye and stain blue. The relative proportions of colourless and blue cells are counted and by calculation the total and viable yeast count in the slurry is determined.
Compared to plate counts, the methylene blue method overestimates viability. While at values greater than 90% agreement is reasonable, the disparity becomes increasingly marked the lower the true viability (Parkinnen et al, 1976). It has been suggested that other dyes are more reliable than methylene blue. In one study, methylene blue (with Safranin O counterstain), citrate methylene blue, alkaline methylene blue, citrate methylene violet and alkaline methylene violet were compared with plate count determinations of viability (Smart et al., 1999). A variety of strains were tested in various physiological conditions ranging from exponential phase, through stationary phase, starved and heat-killed. It was concluded that citrate methylene violet produced the most reliable results. Nevertheless, methylene blue continues to be used widely. Providing the analysis is performed by a skilled operator and the viability of the yeast is greater than c. 80% it provides a reliable result. Counting cells stained with dyes can be automated to

Results (Vietnamese) 1:

13.11 đo lường của khả năngKhả năng của vi sinh vật thường được định nghĩa là khả năng sinh sản. Đây là một số hữu ích để xác định vì nó cung cấp một biện pháp tiên đoán của khả năng của nấm men để tái sản xuất khi pitched vào wort. Vi sinh học truyền thống, khả năng được đánh giá bởi mạ ra nối tiếp dilutions hệ thống treo của tế bào vào một phương tiện phù hợp. Mỗi thuộc địa phát triển sau khi ủ bệnh được giả định có nguồn gốc từ một tế bào đơn lẻ, do đó số thuộc địa trực tiếp liên quan đến số lượng các tế bào khả thi trong việc đình chỉ ban đầu. Sử dụng cách tiếp cận này nồng độ khả thi di động thường được thể hiện như số lượng các đơn vị thuộc địa hình thành (cfu). Thuộc địa đếm thủ tục mất vài ngày để có được một kết quả. Đó là một phiên bản nhanh chóng của các thử nghiệm trong đó vi thuộc địa được phép để phát triển trên dinh dưỡng agar đổ vào một tốt trong một slide kính hiển vi thiết kế đặc biệt. Các thuộc địa vi có thể được tính bằng cách sử dụng một kính hiển vi. Điều này làm giảm thời gian thực hiện để có được một kết quả từ ngày đến vài giờ. Thậm chí bằng cách sử dụng phương pháp nhanh chóng, đếm thuộc địa kỹ thuật là quá chậm để được sử dụng để hỗ trợ quyết định liên quan đến thể dục của nấm men để được pitched. Các phương pháp nhanh chóng cho việc xác định dựa trên việc sử dụng quan trọng vết bẩn. Đây là thuốc nhuộm được loại trừ từ các tế bào khả thi nhưng những người không phải chết. Ngoài ra, họ có thể được đưa lên bởi tất cả các tế bào và tùy thuộc vào các sửa đổi trao đổi chất của tế bào sống. Sau này được đi kèm bởi một sự thay đổi màu sắc. Một số thuốc nhuộm đã được sử dụng để đánh giá khả năng. Một số người trong số này, cùng với của chế độ của hành động được hiển thị trong bảng 13.2.Phương pháp được sử dụng nhất để đánh giá tính khả thi của nấm men ở nhà máy bia sử dụng methylene màu xanh và một buồng đếm haemocytometer (EBC Analytica Microbiologica, 1992). Haemocytometer bao gồm một slide kính hiển vi kính, có hai viện của khối lượng được biết đến. Các căn cứ của các phòng được chia thành một số các ô vuông nhỏ để tạo thành một mạng lưới mà tạo điều kiện cho đếm. Để xác định khả năng một pha loãng phù hợp của nấm men bùn trộn với một khối lượng bằng nhau của một giải pháp của methylene màu xanh và đặt vào haemocytometer. Khả thi tế bào mất methylene blue và giảm thuốc nhuộm để tạo thành dạng leuco. Tế bào chết không thể giảm thuốc nhuộm và vết màu xanh. Tỷ lệ tương đối của các tế bào không màu và màu xanh được tính và bởi tính toán các men tất cả và hữu hiệu đối số trong bùn được xác định.So với tấm đếm, phương pháp methylene blue quá khả năng tồn tại. Trong khi giá trị lớn hơn 90% thỏa thuận là hợp lý, sự chênh lệch về ngày càng trở nên đánh dấu việc hạ thấp đúng khả năng (Parkinnen và ctv., 1976). Nó đã được gợi ý rằng thuốc nhuộm khác là đáng tin cậy hơn so với methylene màu xanh. Trong một nghiên cứu, màu xanh methylene (với Safranin O counterstain), citrat methylene blue, kiềm methylene xanh, citrat mêtylen tím và kiềm mêtylen tím được so sánh với tấm tính quyết định của khả năng (thông minh và ctv., 1999). Một loạt các chủng đã được thử nghiệm trong điều kiện sinh lý khác nhau khác nhau, từ giai đoạn mũ, qua giai đoạn văn phòng phẩm, đói và nhiệt thiệt mạng. Nó đã được kết luận rằng citrat mêtylen tím sản xuất các kết quả đáng tin cậy nhất. Tuy nhiên, methylene blue tiếp tục được sử dụng rộng rãi. Nó cung cấp các phân tích được thực hiện bởi một nhà điều hành có tay nghề cao và khả năng của các men là lớn hơn khoảng 80% cung cấp một kết quả đáng tin cậy. Đếm các tế bào màu với thuốc nhuộm có thể được tự động để

Results (Vietnamese) 2:

13.11 Đo lường khả năng sống
Khả năng tồn tại của vi sinh vật thường được định nghĩa là khả năng sinh sản. Đây là một tham số hữu ích để xác định vì nó cung cấp một biện pháp dự đoán về khả năng của nấm men để tái sản xuất khi dốc vào dịch nha. Trong vi sinh học truyền thống, khả năng tồn tại được đánh giá bằng cách mạ ra pha loãng nối tiếp của hệ thống treo của các tế bào vào một môi trường thích hợp. Mỗi đàn mà phát triển sau khi ủ được giả định đã có nguồn gốc từ một tế bào duy nhất, do đó số lượng khuẩn lạc có liên quan trực tiếp đến số lượng tế bào tồn tại trong hệ thống treo gốc. Sử dụng phương pháp này nồng độ tế bào có thể thường được biểu diễn như số lượng các thuộc địa hình thành các đơn vị (cfu). Các thủ tục thuộc địa đếm mất vài ngày để có được một kết quả. Có một phiên bản nhanh chóng của các bài kiểm tra, trong đó vi khuẩn được phép tăng trưởng trên môi trường thạch dinh dưỡng đổ vào một cái giếng trong một thiết kế đặc biệt kính hiển vi. Các vi khuẩn có thể được tính bằng cách sử dụng một kính hiển vi. Điều này làm giảm thời gian thực hiện để có được một kết quả từ ngày đến vài giờ. Ngay cả việc sử dụng phương pháp nhanh chóng, kỹ thuật thuộc địa đếm là quá chậm để được sử dụng để hỗ trợ các quyết định liên quan đến việc tập thể dục của nấm men được dốc. Phương pháp nhanh chóng để xác định dựa trên việc sử dụng các vết bẩn rất quan trọng. Đây là những loại thuốc nhuộm được loại ra trong tế bào sống, nhưng không phải những người đã chết. Ngoài ra, họ có thể được đưa lên bởi các tế bào và chịu sửa đổi trao đổi chất của các tế bào sống. Sau này được đi kèm với một sự thay đổi màu sắc. Một số thuốc nhuộm đã được sử dụng để đánh giá tính khả thi. Một số trong số này, cùng với chế độ hoạt động của chúng được thể hiện trong Bảng 13.2.
Các phương pháp được sử dụng nhất để đánh giá khả năng phát triển của nấm men trong nhà máy bia sử dụng methylene xanh và một haemocytometer đếm buồng (EBC Analytica Microbiologica, 1992). Các haemocytometer gồm một slide kính hiển vi, trong đó có hai buồng của khối lượng đã biết. Những căn cứ của các phòng được chia thành một số ô vuông nhỏ để tạo thành một mạng lưới đó tạo điều kiện đếm. Để xác định khả năng tồn tại một độ pha loãng thích hợp của men bùn được trộn với một lượng bằng nhau của dung dịch xanh methylen và đặt vào haemocytometer. Tế bào sống mất methylene xanh và giảm các thuốc nhuộm mẫu LEUCO không màu. Tế bào chết không thể làm giảm chất nhuộm và nhuộm màu xanh. Các tỷ lệ tương ứng của các tế bào không màu và màu xanh được đếm và tính tổng và khả thi đếm nấm men trong bùn được xác định.
So với số lượng tấm, phương pháp xanh methylene overestimates khả năng tồn tại. Trong khi tại các giá trị thỏa thuận lớn hơn 90% là hợp lý, sự chênh lệch ngày càng trở nên đánh dấu sự thấp hơn khả năng tồn tại sự thật (Parkinnen et al, 1976). Nó đã được gợi ý rằng thuốc nhuộm khác đáng tin cậy hơn methylene blue. Trong một nghiên cứu, methylene blue (với Safranin O counterstain), citrate methylene blue, methylene blue kiềm, citrate methylene violet và methylene kiềm tím được so sánh với các quyết định số tấm khả năng sống (Smart et al., 1999). Một loạt các chủng đã được thử nghiệm trong điều kiện sinh lý khác nhau, từ giai đoạn theo cấp số nhân, thông qua pha tĩnh, bị bỏ đói và nhiệt giết. Đó là kết luận rằng citrate methylene violet sản xuất các kết quả đáng tin cậy nhất. Tuy nhiên, methylene xanh tiếp tục được sử dụng rộng rãi. Cung cấp các phân tích được thực hiện bởi một nhà điều hành có kỹ năng và khả năng tồn tại của nấm men lớn hơn c. 80% nó cung cấp một kết quả đáng tin cậy. Tế bào đếm nhuộm bằng thuốc nhuộm có thể được tự động để