A chymotrypsin from the P. californ

A chymotrypsin from the P. californiensis digestive gland was
purified to homogeneity as observed after electrophoresis, this
enzyme has a molecular mass of 35.7 kDa (Fig. 1A, lane 1); when
the shrimp chymotrypsin was reduced with DTT and boiled, the
protein migrated with a mass band of 27 kDa (Fig. 1A, lane 2).
Three different clones were found; they were composed of
770 bp that coded for 256 amino acids. Clone Ch_20 (GenBank
ID: JX889717) was used in further comparisons because the insert
was confirmed from the analysis of many plasmids. Variations of
the other two isoforms were semi-conserved; the deduced chymotrypsinogen
was identified as Chymo_P.cal. The deduced amino
acid sequence was confirmed by the N-terminal (seven residues)
and mass spectrometry of the purified shrimp chymotrypsin (79
residues in six peptides covering 40% of the deduced sequence;
Fig. 2, dotted boxes). Results from mass spectrometry could not
differentiate between the nucleotide sequences that were
obtained. When the molecular mass was derived from the deduced
primary structure, the result was 23.72 kDa. Differences between
theoretical weight (23.7 kDa) and mobility in electrophoresis
(27 kDa) could be related to post-traductional modification, such
as glycosylation predicted by the public NetOGlyc software
(Shirai, 2008) at residues Thr135 and Thr137 (Fig. 2, residues double
underlined). The molecular weight difference with unreduced
pure shrimp chymotrypsin (35.7 kDa) could be explained to conformation
changes between folded and unfolded proteins. Bovine
chymotrypsin has a basic pI of 8.7, whereas shrimp chymotrypsin,
like most crustacean serine proteases, has an exceptionally acidic
pI of 3.6 (Table 1). Only one protein was obtained by the isoelectric
point, which supports the idea that a unique isoform was purified.
Although pure shrimp chymotrypsin was stored at 20 C in 50 ll
samples to avoid thawing and refreezing, two proteins appeared
after five months (Fig. 1C, lane 1), probably as a result of autohydrolysis
or conformations changes. However, both proteins had
proteolytic activity (Fig. 4, insert).

Results (Thai) 1:

นจากอวัยวะต่อมย่อยอาหาร P. californiensis ถูกบริสุทธิ์การ homogeneity สังเกตหลัง electrophoresis นี้เอนไซม์มีมวลโมเลกุลของ 35.7 kDa (Fig. 1A เลน 1); เมื่อลดลง ด้วย DTT chymotrypsin กุ้ง และ ต้ม การย้ายโปรตีนกับวงโดยรวมของ 27 kDa (Fig. 1A, 2 เลน)พบโคลนสามแตกต่างกัน พวกเขาประกอบด้วย770 bp ที่เข้ารหัสสำหรับกรดอะมิโนที่ 256 Ch_20 โคลน (GenBankID: JX889717) ใช้ในการเปรียบเทียบเพิ่มเติมเนื่องจากการแทรกได้รับการยืนยันจากการวิเคราะห์ของหลาย plasmids รูปแบบของ2 isoforms อื่น ๆ ถูกนำกึ่ง deduced chymotrypsinogenมีระบุเป็น Chymo_P.cal การ deduced อะมิโนลำดับกรดได้รับการยืนยัน โดย N-เทอร์มินัล (ตกเจ็ด)และสเปกโตรเมทของ chymotrypsin กุ้งบริสุทธิ์ (79ตกค้างในเปปไทด์ 6 ครอบคลุม 40% ของลำดับ deducedFig. 2 จุดกล่อง) ไม่มีผลลัพธ์จากโตรเมทรีความแตกต่างระหว่างลำดับของนิวคลีโอไทด์ที่รับ เมื่อมวลโมเลกุลรับมาจากที่ deducedโครงสร้างหลัก ผลเป็น 23.72 kDa ความแตกต่างระหว่างน้ำหนักทฤษฎี (23.7 kDa) และเคลื่อนไหวใน electrophoresis(27 kDa) อาจเกี่ยวข้องกับการปรับเปลี่ยน post-traductional เช่นเป็น glycosylation ทำนาย โดยซอฟต์แวร์ NetOGlyc สาธารณะ(ชิโอะ 2008) ที่ตกค้าง Thr135 และ Thr137 (Fig. 2 คู่ตกค้างขีดเส้นใต้) น้ำหนักโมเลกุลแตกต่างกับ unreducedpure shrimp chymotrypsin (35.7 kDa) could be explained to conformationchanges between folded and unfolded proteins. Bovinechymotrypsin has a basic pI of 8.7, whereas shrimp chymotrypsin,like most crustacean serine proteases, has an exceptionally acidicpI of 3.6 (Table 1). Only one protein was obtained by the isoelectricpoint, which supports the idea that a unique isoform was purified.Although pure shrimp chymotrypsin was stored at 20 C in 50 llsamples to avoid thawing and refreezing, two proteins appearedafter five months (Fig. 1C, lane 1), probably as a result of autohydrolysisor conformations changes. However, both proteins hadproteolytic activity (Fig. 4, insert).

Results (Thai) 2:

chymotrypsin จากต่อมพี californiensis
ย่อยอาหารถูกทำให้บริสุทธิ์จะเป็นเนื้อเดียวกันเป็นที่สังเกตได้หลังจากที่อินี้เอนไซม์ที่มีมวลโมเลกุล
35.7 กิโลดาลตัน (รูปที่ 1A, เลน 1.); เมื่อ
chymotrypsin กุ้งลดลงด้วย DTT
และต้มที่โปรตีนอพยพกับวงดนตรีมวลของ27 กิโลดาลตัน (รูปที่ 1A, 2 เลน.).
สามโคลนที่แตกต่างกันพบ พวกเขาประกอบด้วย
770 bp ที่รหัส 256 กรดอะมิโน โคลน Ch_20 (GenBank
ID: JX889717)
ถูกนำมาใช้ในการเปรียบเทียบต่อไปเพราะใส่ได้รับการยืนยันจากการวิเคราะห์ของพลาสมิดหลาย
รูปแบบของอีกสองไอโซฟอร์มถูกกึ่งอนุรักษ์; chymotrypsinogen อนุมานได้ถูกระบุว่าเป็น Chymo_P.cal
อะมิโน deduced
ลำดับกรดได้รับการยืนยันโดยไม่มีขั้ว (เจ็ดตกค้าง)
และมวลสารของ chymotrypsin กุ้งบริสุทธิ์ (79
ตกค้างในหกเปปไทด์ที่ครอบคลุม 40%
ของลำดับอนุมานนั้น. รูปที่ 2 กล่องประ) ผลลัพธ์ที่ได้จากมวลสารไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างลำดับเบสที่ได้รับ เมื่อมวลโมเลกุลได้มาจากอนุมานโครงสร้างหลักผลที่ได้ 23.72 กิโลดาลตัน ความแตกต่างระหว่างน้ำหนักทฤษฎี (23.7 กิโลดาลตัน) และคล่องตัวในการ electrophoresis (27 กิโลดาลตัน) อาจจะเกี่ยวข้องกับการปรับเปลี่ยนการโพสต์ traductional เช่นเป็นglycosylation ตามคำทำนายของซอฟแวร์ NetOGlyc สาธารณะ(Shirai 2008) ที่ตกค้าง Thr135 และ Thr137 (รูปที่ 2. ตกค้าง คู่ที่ขีดเส้นใต้) ความแตกต่างที่มีน้ำหนักโมเลกุล unreduced chymotrypsin กุ้งบริสุทธิ์ (35.7 กิโลดาลตัน) อาจจะอธิบายให้โครงสร้างการเปลี่ยนแปลงระหว่างโปรตีนพับและกางออก โคchymotrypsin มี pI พื้นฐานของ 8.7 ในขณะที่กุ้ง chymotrypsin, ชอบมากที่สุดโปรตีเอสซีรีนกุ้งมีความเป็นกรดเป็นพิเศษpI 3.6 (ตารางที่ 1) เพียงคนเดียวที่มีโปรตีนที่ได้รับจาก Isoelectric จุดที่สนับสนุนความคิดที่ว่าไอโซฟอร์มที่ไม่ซ้ำกันได้บริสุทธิ์. แม้ว่า chymotrypsin กุ้งบริสุทธิ์ถูกเก็บไว้ที่ 20 C 50 LL ตัวอย่างเพื่อหลีกเลี่ยงการละลายและ refreezing สองโปรตีนปรากฏหลังจากห้าเดือน(รูป. 1C เลน 1) อาจจะเป็นผลมาจาก autohydrolysis หรือการเปลี่ยนแปลง conformations แต่โปรตีนทั้งสองมีกิจกรรมโปรตีน (รูปที่. 4 แทรก)

Results (Thai) 3:

เป็นเอนไซม์ไคโมทริปซินจากต่อมย่อยอาหาร พี californiensis คือ
บริสุทธิ์วิธีการเป็นสังเกตหลังจาก electrophoresis เอนไซม์นี้
มีมวลโมเลกุลของ 35.7 กิโลดาลตัน ( รูปที่ 1A , ซอย 1 ) ; เมื่อ
กุ้งไคโมทริปซินขนาด 20 และต้ม ,
โปรตีนอพยพกับมวลวงดนตรีขนาด 27 kDa ( รูปที่ 1A , เลน 2 ) .
3 โคลนพบประกอบด้วย
;770 BP ที่เข้ารหัส 256 กรดอะมิโน โคลน ch_20 ( ขนาด
ID : jx889717 ) ใช้ในการเปรียบเทียบต่อไป เพราะแทรก
ถูกยืนยันจากการวิเคราะห์ของหลายพลาส . การเปลี่ยนแปลงของ
อีกสองต่อ คือกึ่งอนุรักษ์ ; ได้แค็ตตาล็อกของผู้จัดจำหน่าย
ถูกระบุว่าเป็น chymo_p.cal . ได้ลำดับกรดอะมิโน
ถูกยืนยันโดยกรดอะมิโน ( เจ็ด residues )
และ มวลสาร ของบริสุทธิ์กุ้งไคโมทริปซิน ( 79
ตกค้างในหกเปปครอบคลุม 40% ของอนุมานลำดับ ;
รูปที่ 2 จุด กล่อง ) ผลลัพธ์จากมวลสารไม่ได้
ความแตกต่างระหว่างลำดับนิวคลีโอไทด์ที่
) เมื่อมวลโมเลกุลได้มาจากอนุมาน
โครงสร้างหลัก พบ 433 กิโลดาลตัน ความแตกต่างระหว่าง
น้ำหนักเชิงทฤษฎี ( 237 กิโลดาลตัน ) และการเคลื่อนไหวใน electrophoresis
( 27 kDa ) อาจจะเกี่ยวข้องกับการปรับ traductional โพสต์ เช่น
เป็นทำนายโดยประชาชน netoglyc glycosylation ซอฟต์แวร์
( ชิรา 2008 ) ที่ตกค้างและ thr135 thr137 ( รูปที่ 2 ของคู่
ขีดเส้นใต้ ) น้ำหนักอณูบริสุทธิ์ แตกต่างกับ unreduced
กุ้งไคโมทริปซิน ( 35.7 กิโลดาลตัน ) สามารถอธิบายโครงสร้าง
การเปลี่ยนแปลงระหว่างพับและกางออกโปรตีน ไคโมทริปซินโค
มีปี่พื้นฐานของประชาชน ในขณะที่กุ้งไคโมทริปซิน
ชอบซีรี , น้ำหนักโมเลกุลแตกต่างกันมากที่สุดมีพี่เปรี้ยว
โคตร 3.6 ( ตารางที่ 1 ) เพียงหนึ่งโปรตีนได้จากจุดไอโซอิเล็กทริก
ซึ่งสนับสนุนความคิดที่ว่าไอโซฟอร์มเฉพาะบริสุทธิ์ .
ถึงแม้ว่าไคโมทริปซินกุ้งบริสุทธิ์คือการเก็บที่ - 20 องศาเซลเซียส ใน 50 ll
ตัวอย่างและเพื่อหลีกเลี่ยงการ refreezing สองโปรตีนปรากฏ
หลังจากห้าเดือน ( ภาพที่ 1c ซอย 1 ) อาจเป็นผลจาก autohydrolysis
หรือโครงสร้างการเปลี่ยนแปลง อย่างไรก็ตาม ทั้ง โปรตีนมีกิจกรรมจำเพาะ ( รูปที่ 4 ,

ใส่ )