Conventional nested PCR is a very s

Conventional nested PCR is a very sensitive and specific method for the diagnosis of visceral leishmaniasis. However, this type of PCR is notorious for contamination problems related to the processing of the product between the first and the second PCR steps. In order to have a PCR method that is just as efficient but without the risk of contamination, we attempted the optimization of a single-tube nested PCR (STNPCR) method. During the first and the second PCR steps, we used the small subunit of ribosomal RNA (ssu rRNA) and the ribosomal internal transcribed spacer (ITS) as targets, respectively. The performances of STNPCR and nested PCR in detecting the DNA of Leishmania chagasi were compared. In the case of STNPCR, the inner primers were immobilized on the interior of the tube cap by means of adsorption microtubes and then were solubilized before the second reaction. This procedure eliminated the need to open the microtube, which could have led to false-positive results through cross-contamination. The detection limit for the purified L. chagasi DNA was 1 fg by using nested PCR and 10 fg by using STNPCR. We also tested the specificity of the system against other parasites, and observed that Trypanosoma cruzi DNA was amplified with a detection limit of up to 1 pg. This study not only presents a promising tool for the diagnosis of visceral leishmaniasis, but also provides a new tool for the diagnosis of Chagas disease, either in mono-infection by T. cruzi or in co-infection with Leishmania spp.

Results (Thai) 1:

PCR ที่ซ้อนกันธรรมดาเป็นวิธีที่สำคัญมากและที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการวินิจฉัยของ leishmaniasis อวัยวะภายใน แต่ชนิดของ pcr นี้เป็นที่รู้จักสำหรับปัญหาการปนเปื้อนที่เกี่ยวข้องกับการประมวลผลของผลิตภัณฑ์ที่อยู่ระหว่างขั้นตอนแรกและ pcr ที่สอง เพื่อให้มีวิธี PCR ที่เป็นเพียงที่มีประสิทธิภาพเป็น แต่ไม่มีความเสี่ยงของการปนเปื้อนที่เราพยายามที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของหลอดเดียวซ้อนกัน PCR (stnpcr) วิธีการ ในระหว่างที่หนึ่งและสองขั้นตอน pcr เราใช้หน่วยย่อยเล็ก ๆ ของโซมอล rna (ซุ rRNA) และโซมอล spacer ถ่ายทอดภายใน (มัน) เป็นเป้าหมายตามลำดับ การแสดงของ stnpcr และ PCR ที่ซ้อนกันในการตรวจสอบดีเอ็นเอของ chagasi Leishmania ถูกนำมาเปรียบเทียบ ในกรณีที่ stnpcr,ไพรเมอร์ภายในที่ถูกตรึงบนด้านในของฝาครอบหลอดด้วยวิธีการของไมโครการดูดซับและละลายได้แล้วก่อนที่จะเกิดปฏิกิริยาที่สอง ตัดขั้นตอนนี้จำเป็นต้องเปิด microtube ซึ่งจะได้นำไปสู่​​ผลลัพธ์ที่เป็นเท็จบวกผ่านการปนเปื้อน ขีด จำกัด การตรวจสอบสำหรับลิตรบริสุทธิ์ dna chagasi เป็น FG 1 โดยใช้วิธี PCR ที่ซ้อนกันและ 10 FG โดยใช้ stnpcrเรายังผ่านการทดสอบความจำเพาะของระบบกับปรสิตอื่น ๆ และตั้งข้อสังเกตว่า Trypanosoma cruzi dna ถูกขยายด้วยขีด จำกัด ของการตรวจสอบถึง 1 พิโค การศึกษาครั้งนี้ไม่เพียง แต่มีการจัดเป็นเครื่องมือที่มีศักยภาพสำหรับการวินิจฉัยของ leishmaniasis อวัยวะภายใน แต่ยังมีเครื่องมือใหม่สำหรับการวินิจฉัยของ chagas โรคทั้งในขาวดำโดยการติดเชื้อที cruzi หรือในการติดเชื้อร่วมด้วย Leishmania เอสพีพี

Results (Thai) 2:

PCR ธรรมดาซ้อนเป็นวิธีที่เฉพาะเจาะจง และมีความสำคัญมากสำหรับการวินิจฉัยของ leishmaniasis อวัยวะภาย อย่างไรก็ตาม PCR ชนิดนี้อยู่ซึ่งเกี่ยวข้องกับกระบวนการของผลิตภัณฑ์ระหว่างครั้งแรกและขั้นตอนของ PCR สองปัญหาการปนเปื้อน เพื่อให้มีวิธีการ PCR ที่เพียง เป็นอย่างมีประสิทธิภาพ แต่ไม่ มีความเสี่ยงจากการปนเปื้อน เราพยายามเพิ่มประสิทธิภาพของวิธีเดียวท่อซ้อน PCR (STNPCR) ในช่วงแรกและ PCR ขั้นตอนที่สอง เราใช้ย่อยขนาดเล็กของอาร์เอ็นเอ ribosomal (ssu rRNA) และที่ ribosomal ทับภายในศัพท์เป็นตัวเว้นวรรค (ของ) เป็นเป้าหมาย ตามลำดับ การแสดงของ STNPCR และซ้อน PCR ในการตรวจหา chagasi ดีเอ็นเอ Leishmania ถูกเปรียบเทียบ ในกรณีของ STNPCR ไพรเมอร์ภายในถูกตรึงในภายในของฝาหลอด โดยดูดซับ microtubes แล้ว ก็ solubilized ก่อนปฏิกิริยาที่สอง ตอนนี้ตัดออกต้องเปิด microtube ที่อาจมีผลบวกเท็จผ่านการปนเปื้อนข้าม ขีดจำกัดตรวจสอบบริสุทธิ์ L. chagasi ดีเอ็นเอถูก 1 fg โดยซ้อน PCR และ 10 fg โดย STNPCR เรายังทดสอบ specificity ระบบกับปรสิตอื่น ๆ และสังเกต cruzi Trypanosoma ที่ DNA ถูกขยาย ด้วยตรวจสอบขีดจำกัดของ pg ขึ้นเพื่อ 1 การศึกษานี้ไม่เพียงแต่นำเสนอเครื่องมือสัญญาสำหรับการวินิจฉัยของ leishmaniasis อวัยวะภาย แต่ยัง มีเครื่องมือใหม่สำหรับการวินิจฉัยโรค Chagas หรือการติด เชื้อโมโนโดยต. cruzi หรือติดเชื้อร่วมกับโอ Leishmania

Results (Thai) 3:

pcr ซ้อนทั่วไปคือวิธีการเป็นอย่างมากที่สำคัญและเฉพาะสำหรับการวินิจฉัย leishmaniasis ทมิฬ อย่างไรก็ตาม ประเภท นี้ของ pcr เป็นอันเลื่องชื่อในการแก้ปัญหาการปนเปื้อนที่เกี่ยวข้องกับการดำเนินการของ ผลิตภัณฑ์ ที่อยู่ระหว่างเป็นครั้งแรกและครั้งที่สองตามขั้นตอน pcr ในการสั่งซื้อจะมีวิธีการ pcr ซึ่งเป็นเพียงอย่างมี ประสิทธิภาพ แต่ไม่มีความเสี่ยงของการปนเปื้อนเราพยายามให้การปรับแต่งของ single - ท่อดูดฝุ่นแบบซ้อน pcr ( stnpcr )เป็นวิธีการที่ ในช่วงแรกและที่สองขั้นตอน pcr เราใช้ subunit ขนาดเล็กของ ribosomal rna ( rrna ssu )และ ribosomal ภายใน ที่ถอดสคริปต์แล้วแผ่นคั่น()ที่เป็นเป้าหมายตามลำดับ การแสดงของ stnpcr pcr และซ้อนในการตรวจหาดีเอ็นเอของ chagasi leishmania อยู่เมื่อเทียบกับ ในกรณีที่มี stnpcrprimers ด้านในที่มีศักตรูที่ด้านในของฝาปิดท่อดูดฝุ่นโดยใช้ microtubes adsorption และจากนั้นจึงเป็น solubilized ก่อนการตอบสนองที่สอง ขั้นตอนนี้ช่วยลดความต้องการที่จะเปิดให้บริการ microtube ที่อาจจะมีผลทำให้แบบบวกที่ผิดพลาดผ่านการปนเปื้อนข้าม( cross - การจำกัดการตรวจจับที่บริสุทธิ์สำหรับดีเอ็นเอแอล chagasi ได้ 1 FG โดยการใช้ 10 FG pcr และซ้อนโดยใช้ stnpcr.นอกจากนั้นเรายังได้รับการทดสอบแล้วพวกเขาถกเถียงของระบบกับเชื้อโรคอื่นๆและสังเกตเห็นว่า trypanosoma cruzi ดีเอ็นเอเป็นแอมพลิฟายพร้อมด้วยการตรวจจับการจำกัดของได้ถึง 1 ส่งผลการศึกษานี้ไม่เพียงเป็นของขวัญที่มีอนาคตไกลเครื่องมือสำหรับการตรวจวินิจฉัยของทมิฬ leishmaniasis ,แต่ยังให้เครื่องมือใหม่สำหรับการตรวจวินิจฉัยโรคของ chagas ,ทั้งในแบบโมโนการติดทีวี cruzi หรือในความร่วมมือการติดเชื้อด้วย leishmania พืช