13.10.4 Non-traditional methodsSeve

13.10.4 Non-traditional methods
Several methods for differentiating yeast strains are relatively new at the time of writing. They fall into two broad groups. Firstly, those which are based on an analysis of cell composition and, secondly, those which probe the genome of the cell. Methods based on cellular composition rely on whole cell analyses, for example, pyrolysis mass spectrometry and Fourier transform infra-red spectroscopy. Alternatively, specific subcellular fractions can be extracted and analysed, for example proteins and lipids. Methods for strain differentiation based on cell composition require that the yeast has been cultivated under defined conditions in order to eliminate differences due to variations in physiological state. Genetic analyses have the advantage that the composition of the genome is relatively constant and independent of physiological state.
Pyrolysis gas chromatography and pyrolysis mass spectrometry rely on heating a sample of biomass in an inert atmosphere to around 550 ëC (1022 ëF). This causes the cells to decompose into a mixture of low molecular weight volatile fragments (Goodacre, 1994). The fragments are separated using gas chromatography or the more powerful technique of gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). The pattern of fragments that are generated are characteristic for individual or closely related groups of strains (Timmins et al., 1998). Fourier transform infra-red spectroscopy provides a fingerprint of whole cells by measuring the interactions between infra-red radiation and intracellular components such as nucleic acids, proteins, membranes and cell wall polysaccharides. For microbial cells, the mid-IR range (4000ÿ400 cmÿ1) provides the best resolving power. The method is capable of distinguishing bacteria at the strain level (Helm et al., 1991). The method has been successfully used for differentiating brewing yeast strains (Timmins et al., 1998). The proteome of cells can be extracted and separated by electrophoresis and visualized using techniques such as Western blotting. Based on differences in genotype it would be predicted that proteome analyses would be different for individual strains and therefore of taxonomic significance. This has been verified in a study of 29 enological strains of S. cerevisiae (van Vuuren and van der Meer, 1987). Total fatty acids can be extracted from yeast using a solvent such as a mixture of chloroform and methanol. In the form of methyl esters, the mixture of fatty acids can be separated using capillary gas liquid chromatography. The spectrum of fatty acid methyl esters and their relative abundance has been used to differentiate 13 strains of S. cerevisiae (Augustyn and Kock, 1989).
The most precise methods for strain differentiation are those based on analysis of the nucleic acids of the genome. These methods generate so-called genetic fingerprints (Chapter 11; Section 11.8.1). Yeast strains can be positively identified and differentiated using restriction fragment polymorphism (Schofield et al., 1995), polymerase chain reaction (de Barros et al., 1998) and karyotyping (Casey, 1996).

Results (Vietnamese) 1:

13.10.4 phương pháp phòng không-truyền thốngMột số phương pháp để phân biệt chủng nấm men là tương đối mới tại thời điểm viết. Họ rơi vào hai nhóm rộng. Trước hết, những người mà dựa trên phân tích của tế bào thành phần và thứ hai, những người thăm dò bộ gen của tế bào. Phương pháp dựa trên tế bào thành phần dựa trên phân tích toàn bộ di động, ví dụ, nhiệt phân khối lượng spectrometry và Fourier biến đổi phổ học tia hồng ngoại. Ngoài ra, phần phân đoạn của cụ thể có thể được chiết xuất và phân tích, ví dụ: protein và chất béo. Phương pháp cho sự khác biệt chủng dựa trên tế bào thành phần đòi hỏi các men đã được trồng trong điều kiện được xác định để loại bỏ sự khác biệt do biến thể sinh lý bang. Phân tích di truyền có lợi thế là thành phần của bộ gen là tương đối không đổi và độc lập của nhà nước sinh lý.Sắc ký khí Chưng khô và nhiệt phân khối lượng spectrometry dựa vào hệ thống sưởi một mẫu của nhiên liệu sinh học trong môi trường khí trơ để khoảng 550 ëC (1022 ëF). Điều này gây ra các tế bào để phân hủy thành một hỗn hợp của các mảnh vỡ dễ bay hơi thấp trọng lượng phân tử (Goodacre, 1994). Các mảnh vỡ được tách ra bằng cách sử dụng sắc ký khí hoặc kỹ thuật mạnh hơn spectrometry khối lượng sắc ký khí (GC-MS). Các mô hình của các mảnh vỡ được tạo ra là đặc trưng cho các cá nhân hoặc liên quan chặt chẽ nhóm chủng (Timmins và ctv., 1998). Phổ học Hồng biến đổi Fourier cung cấp một dấu vân tay của toàn bộ tế bào bằng cách đo sự tương tác giữa bức xạ bằng tia hồng ngoại và các thành phần nội bào như nucleic acids, protein, màng tế bào và tế bào polysaccharides. Đối với tế bào vi khuẩn, dãy giữa IR (4000ÿ400 cmÿ1) cung cấp tốt nhất giải quyết quyền lực. Phương pháp này là có khả năng phân biệt các vi khuẩn ở mức độ căng thẳng (Helm và ctv., 1991). Các phương pháp đã được sử dụng thành công cho khác biệt chủng nấm men bia (Timmins và ctv., 1998). Proteome của các tế bào có thể được chiết xuất và cách nhau bằng điện và hình dung bằng cách sử dụng các kỹ thuật chẳng hạn như phương Tây thấm. Dựa trên sự khác biệt trong kiểu gen nó đã được dự đoán rằng proteome phân tích sẽ khác nhau cho từng chủng và do đó phân loại ý nghĩa. Điều này đã được xác minh trong một nghiên cứu của 29 enological các chủng S. cerevisiae (van Vuuren và van der Meer, 1987). Tất cả các axit béo có thể được chiết xuất từ nấm men bằng cách sử dụng một dung môi như một hỗn hợp của cloroform và methanol. Ở dạng este methyl, hỗn hợp của axit béo có thể được tách ra bằng cách sử dụng sắc ký lỏng mao mạch khí. Quang phổ của este methyl axit béo và sự phong phú tương đối của họ đã được sử dụng để phân biệt 13 chủng S. cerevisiae (Augustyn và Kock, năm 1989).Các phương pháp chính xác nhất cho căng thẳng sự khác biệt là những người dựa trên phân tích của các axit nucleic của bộ gen. Những phương pháp này tạo ra cái gọi là dấu vân tay di truyền (chương 11; Phần 11.8.1). Chủng nấm men có thể được tích cực được xác định và phân biệt bằng cách sử dụng hạn chế đa hình mảnh (Schofield et al., 1995), phản ứng chuỗi polymerase (de Barros et al., 1998) và karyotyping (Casey, 1996).

Results (Vietnamese) 2:

13.10.4 phương pháp phi truyền thống
Một số phương pháp để phân biệt các chủng nấm men là tương đối mới tại thời điểm viết bài. Họ rơi vào hai nhóm lớn. Thứ nhất, những người mà được dựa trên một phân tích thành phần tế bào và, thứ hai, những người mà thăm dò hệ gen của tế bào. Phương pháp dựa vào thành phần của tế bào dựa vào toàn bộ tế bào phân tích, ví dụ, nhiệt phân khối phổ và biến đổi Fourier hồng ngoại quang phổ. Ngoài ra, phần dưới tế bào cụ thể có thể được trích xuất và phân tích, cho ví dụ protein và lipid. Phương pháp cho căng thẳng phân biệt dựa vào thành phần tế bào đòi hỏi rằng nấm men đã được trồng trong điều kiện xác định để loại bỏ sự khác biệt do sự thay đổi trạng thái sinh lý. Phân tích di truyền có lợi thế là các thành phần của bộ gen là tương đối ổn định và độc lập với trạng thái sinh lý.
Nhiệt phân sắc ký khí khối phổ và nhiệt phân dựa vào sưởi ấm một mẫu sinh khối trong môi trường khí trơ để khoảng 550 EC (1022 EF). Điều này làm cho các tế bào để phân hủy thành một hỗn hợp của trọng lượng phân tử mảnh dễ bay hơi thấp (Goodacre, 1994). Các đoạn phân tách bằng sắc ký khí hoặc kỹ thuật mạnh mẽ hơn của khối phổ sắc ký khí (GC-MS). Các mô hình của các mảnh được tạo ra là đặc trưng cho nhóm cá nhân hoặc liên quan chặt chẽ của các chủng (Timmins et al., 1998). Biến đổi Fourier hồng ngoại quang phổ cung cấp một dấu vân tay của toàn bộ các tế bào bằng cách đo sự tương tác giữa bức xạ hồng ngoại và các thành phần nội bào như axit nucleic, protein, màng và polysaccharides vách tế bào. Đối với các tế bào vi sinh vật, phạm vi giữa hồng ngoại (4000ÿ400 cmÿ1) cung cấp sức mạnh giải quyết tốt nhất. Phương pháp này là khả năng phân biệt vi khuẩn ở mức độ căng thẳng (Helm et al., 1991). Phương pháp này đã được sử dụng thành công để phân biệt các chủng nấm men bia (Timmins et al., 1998). Proteome của các tế bào có thể được chiết xuất và tách bằng điện và hình dung bằng cách sử dụng các kỹ thuật như Western blotting. Dựa trên sự khác biệt trong kiểu gen sẽ được dự đoán rằng các phân tích hệ protein sẽ là khác nhau cho các chủng cá nhân và do đó có ý nghĩa phân loại. Điều này đã được xác nhận trong một nghiên cứu của 29 chủng enological của S. cerevisiae (van Vuuren và van der Meer, 1987). Tổng số các axit béo có thể được chiết xuất từ nấm men sử dụng một dung môi như là một hỗn hợp của chloroform và methanol. Ở dạng methyl este, hỗn hợp của các axit béo có thể được phân tách bằng sắc ký lỏng khí mao quản. Quang phổ của các axit béo methyl este và phong phú tương đối của họ đã được sử dụng để phân biệt 13 chủng S. cerevisiae (Augustyn và Kock, 1989).
Các phương pháp chính xác nhất cho chủng virus biệt được những người dựa trên phân tích của các axit nucleic của bộ gen. Những phương pháp này tạo ra cái gọi là dấu vân tay di truyền (Chương 11; Mục 11.8.1). Chủng nấm men có thể được xác định một cách tích cực và hạn chế sử dụng phân biệt đoạn đa hình (Schofield et al., 1995), phản ứng chuỗi polymerase (de Barros et al., 1998) và karyotyping (Casey, 1996).