2.3. Preparation and inoculation of

2.3. Preparation and inoculation of J2s

SCN race 3 nematodes, which were originally collected from a field at the Southern Outreach and Research Station in Waseca, Minnesota, USA, were cultured on soybean plants in sterilized soil in a greenhouse. A soil suspension containing newly formed cysts was poured into a 2-liter jug and sprayed with a strong jet of water. This suspension was allowed to settle for 5–10 s and then poured onto a 850-μm-pore (#20) sieve nested on top of a 250-μm-aperture (#60) sieve. This procedure was repeated 5 times to ensure that all cysts were collected. The cysts were then sprayed with water on the 850-μm-aperture screen to remove root debris and collected onto a 250-μm-aperture sieve. The cysts were washed from the 250-μm-aperture sieve into a 50 mL centrifuge tube with 63% (w/v) sucrose and centrifuged at 1100×g for 5 min. The cysts floating on the top of these tubes were collected into a tube mounted with a 150-μm-pore screen, and eggs were released by crushing the cysts on a 150-μm-aperture sieve with a rubber stopper mounted on a motor ( Faghihi and Ferris, 2000). The eggs were cleaned and separated from debris by centrifugation in a 38% (w/v) sucrose solution for 5 min at 1500×g to remove most of the remaining debris. The collected eggs were transferred onto a 38-μm-aperture sieve, rinsed with sterile water, treated with SCQ antibiotic solution (100 ppm streptomycin sulfate, 50 ppm chlorotetracycline, and 20 ppm 8-quinolinol) for 24 h at 4 °C. They were then placed on a 35-μm-aperture nylon cloth on a screen immersed in 4 mM ZnCl2 solution to hatch J2s. The temperature of the containers was maintained at approximately 22–24 °C. The viability and concentration of J2s was determined under an inverted microscope. Suspensions of J2s were then inoculated into approximately 5 cm deep holes dug adjacent to the root systems of each seedling with a 1 mL pipet tip. Approximately 600 juveniles per plant for a total of 3000 juveniles per pot were inoculated 1 week after planting.

Results (Thai) 1:

2.3. เตรียมและ inoculation J2sSCN แข่งขัน 3 nematodes ซึ่งถูกเก็บรวบรวมจากฟิลด์ที่ภาคสนามภาคใต้สถานีวิจัยใน Waseca มินเนโซต้า สหรัฐอเมริกา เดิม มีอ่างในพืชถั่วเหลืองในดิน sterilized ในเรือนกระจก ระงับดินประกอบด้วยซีสต์มีรูปแบบใหม่ poured เป็น 2 ลิตรเหยือก และฉีดพ่น ด้วยเจ็ทแรงน้ำ ระบบกันสะเทือนนี้สามารถชำระสำหรับ s 5 – 10 และ poured แล้ว ลงบนตะแกรง (#20) 850-μm-รูขุมขนซ้อนอยู่บนตะแกรง 250-μm-รูรับแสง (#60) ขั้นตอนนี้ถูกทำซ้ำ 5 ครั้งเพื่อให้แน่ใจว่า ซีสต์ทั้งหมดถูกเก็บรวบรวม ซีสต์ได้แล้วฉีดพ่นน้ำบน 850-μm-รูรับแสงหน้าจอเพื่อเอาเศษราก และรวบรวมลงในตะแกรง 250-μm-รูรับแสง ซีสต์ถูกชำระล้างออกจากตะแกรง 250-μm-รูรับแสงเป็นหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง 50 mL กับ 63% (w/v) ซูโครส และ centrifuged ที่ 1100 × g ใน 5 นาที ซีสต์ที่ลอยบนท่อเหล่านี้ถูกรวบรวมลงในหลอดที่ติดตั้งหน้าจอ 150-μm-รูขุมขน และไข่ถูกนำออกใช้ โดยบดซีสต์ในตะแกรง 150-μm-รูด้วยจุกยางที่ติดตั้งบนมอเตอร์ (Faghihi และชิงช้าสวรรค์ 2000) ไข่ถูกทำความสะอาด และแยกจากเศษ โดย centrifugation ในโซลูชันซูโครส 38% (w/v) ใน 5 นาทีที่ 1500 × g เอาเศษที่เหลือส่วนใหญ่ ไข่รวบรวมมีการถ่ายโอนไปยังตะแกรง 38-μm-รูรับแสง rinsed ด้วยกระบอกน้ำ รักษา ด้วย SCQ แก้ปัญหายาปฏิชีวนะ (100 ppm streptomycin ซัลเฟต chlorotetracycline 50 ppm และสูงสุด 8-quinolinol) ใน 24 ชมที่ 4 องศาเซลเซียส จากนั้นพวกเขาถูกวางไว้บนผ้าไนลอน 35-μm-รูรับแสงบนหน้าจอสัมผัสในโซลูชัน 4 มม. ZnCl2 แฮทช์ J2s อุณหภูมิของภาชนะที่ถูกรักษาไว้ที่ประมาณ 22-24 องศาเซลเซียส ชีวิตและความเข้มข้นของ J2s ถูกกำหนดภายใต้กล้องจุลทรรศน์การกลับหัว บริการของ J2s ได้แล้ว inoculated ไปประมาณ 5 ซม.หลุมลึกที่ขุดติดกับระบบรากของแต่ละแหล่งมีคำแนะนำในการ pipet 1 mL ประมาณ 600 juveniles ต่อพืชจำนวน juveniles 3000 ต่อหม้อได้ inoculated 1 สัปดาห์หลังปลูก

Results (Thai) 2:

2.3 การเตรียมและการฉีดวัคซีนของ J2s SCN แข่งขัน 3 ไส้เดือนฝอยที่ถูกเก็บรวบรวมจากสนามเดิมที่ภาคใต้บริการวิชาการและสถานีวิจัยวาเซมินนิโซตาสหรัฐอเมริกาเพาะเลี้ยงพืชถั่วเหลืองในดินฆ่าเชื้อในเรือนกระจก ระงับดินที่มีซีสต์ที่จัดตั้งขึ้นใหม่ถูกเทลงในเหยือก 2 ลิตรและพ่นด้วยเครื่องบินเจ็ตที่แข็งแกร่งของน้ำ ระงับการนี้ได้รับอนุญาตให้ชำระสำหรับ 5-10 และแล้วเทลงบน 850 ไมครอนรูขุมขน (# 20) ตะแกรงซ้อนด้านบนของ 250 ไมโครเมตร-รูรับแสง (# 60) ตะแกรง ขั้นตอนนี้ซ้ำ 5 ครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าซีสต์ทั้งหมดถูกเก็บรวบรวม ซีสต์ที่ได้รับการฉีดพ่นแล้วด้วยน้ำบนหน้าจอ 850 ไมครอน-รูรับแสงจะเอาเศษรากและรวบรวมลงบนตะแกรง 250 ไมโครเมตร-รูรับแสง ซีสต์ถูกล้างจากตะแกรง 250 ไมโครเมตร-รูรับแสงลงในหลอด centrifuge 50 มล 63% (w / v) ซูโครสและหมุนเหวี่ยงที่ 1100 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาที ซีสต์ที่ลอยอยู่ด้านบนของหลอดเหล่านี้ถูกเก็บลงในหลอดที่ติดตั้งอยู่กับหน้าจอ 150 ไมโครเมตรรูขุมขนและไข่ได้รับการปล่อยตัวโดยเด็ดขาดซีสต์บนตะแกรง 150 ไมโครเมตร-รูรับแสงที่มีจุกยางติดตั้งอยู่บนมอเตอร์ (Faghihi และชิงช้าสวรรค์, 2000) ไข่ที่ได้รับการทำความสะอาดและแยกออกจากเศษโดยการหมุนเหวี่ยงใน 38% (w / v) สารละลายน้ำตาลซูโครสเป็นเวลา 5 นาทีที่ 1500 × g เพื่อลบมากที่สุดของเศษซากที่เหลือ ไข่ที่เก็บได้ถูกโอนไปยังตะแกรง 38 ไมครอน-รูรับแสงล้างด้วยน้ำหมันรับการรักษาด้วยวิธีการแก้ปัญหายาปฏิชีวนะ SCQ (ซัลเฟต streptomycin 100 ppm 50 ppm chlorotetracycline และ 20 ppm 8 quinolinol) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส พวกเขาได้รับอยู่แล้วใน 35 ไมโครเมตร-รูรับแสงผ้าไนลอนบนหน้าจอแช่ใน 4 มิลลิ ZnCl2 วิธีการแก้ปัญหาที่จะฟัก J2s อุณหภูมิของภาชนะบรรจุที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ประมาณ 22-24 องศาเซลเซียส ศักยภาพและความเข้มข้นของ J2s ถูกกำหนดภายใต้กล้องจุลทรรศน์คว่ำ แขวนลอยของ J2s ถูกเชื้อแล้วลงประมาณ 5 ซม. ลึกหลุมขุดที่อยู่ติดกับระบบรากของต้นกล้าแต่ละคนมี 1 มิลลิลิตรปลายปิเปต หนุ่มสาวประมาณ 600 ต่อต้นรวมเป็น 3000 หนุ่มสาวต่อกระถางถูกเชื้อ 1 สัปดาห์หลังปลูก

Results (Thai) 3:

2.3 การเตรียมและเชื้อ j2s

ระบบการแข่งขัน ไส้เดือนฝอย ซึ่งถูกรวบรวมจากสนามในภาคใต้ และขยายสถานีวิจัยวาเซกา , Minnesota , USA , เพาะเลี้ยงถั่วเหลืองในดินพืชในการฆ่าเชื้อในเรือนกระจก ดินสะเทือนที่มีรูปแบบใหม่ขจัดเชื้อจุลินทรีย์ได้ถูกเทลงในเหยือกลิตร 2 พ่นด้วยเจ็ท แรงของน้ําช่วงล่างนี้ได้รับอนุญาตให้ตั้งถิ่นฐาน 5 – 10 วินาที แล้วเทใส่ 850 - μ m-pore ( 20 # ) ตะแกรงซ้อนอยู่ด้านบนของ 250 - μ m-aperture ( # 60 ) ตะแกรง ขั้นตอนนี้ซ้ำ 5 ครั้ง เพื่อให้แน่ใจว่าซีสต์ที่ถูกบุกรุก ซิสมีพ่นน้ำบน 850 - μ m-aperture หน้าจอเอาเศษรากและเก็บลง 250 - μ m-aperture ตะแกรงซิสมี ล้างจาก 250 - μ m-aperture ตะแกรงเป็น 50 กรัมหลอด centrifuge 63 % ( w / v ) ซูโครสและระดับที่ 1 × G สำหรับ 5 นาที ซิสที่ลอยอยู่ด้านบนของท่อเหล่านี้ถูกเก็บลงในหลอดที่ติดตั้งกับ 150 - μ m-pore หน้าจอ และไข่ที่ถูกปล่อยออกมาโดยบดซิสใน 150 - μ m-aperture ตะแกรงที่มียางอุดติด มอเตอร์ และ faghihi ชิงช้าสวรรค์ , 2000 )ไข่สะอาดแยกจากเศษโดยการเหวี่ยงแยกใน 38 % ( w / v ) โดยโซลูชั่นสำหรับ 5 นาทีที่ 1500 × G เพื่อลบมากที่สุดของเศษที่เหลือ เก็บไข่ได้ถูกโอนไปยังตะแกรง m-aperture เป็น 38 - μล้างด้วยน้ำหมัน , การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ โซลูชั่น scq ( 100 ppm สเตรปโตมัยซินซัลเฟต 50 ppm คลอเตตราซัยคลิน และ 20 ppm 8-quinolinol ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาพวกเขาถูกวางไว้แล้วใน 35 - μ m-aperture ผ้าไนล่อนบนหน้าจอที่แช่ในสารละลาย zncl2 4 มิลลิเมตรฟัก j2s อุณหภูมิของภาชนะบรรจุไว้ที่ประมาณ 22 - 24 องศา ความมีชีวิต และความเข้มข้นของ j2s กลับถูกกำหนดภายใต้กล้องจุลทรรศน์ช่วงล่างของ j2s แล้วเชื้อประมาณ 5 เซนติเมตร ขุดหลุมลึกติดกับระบบรากของต้นกล้าแต่ละกับ 1 ml ไปเปตทิป ประมาณ 600 เยาวชนต่อต้นรวมเป็น 3000 เยาวชนต่อกระถางปลูกเชื้อ 1 สัปดาห์หลังปลูก