Extraction of free amino acids from

Extraction of free amino acids from fruitsFrozen samples were cut into the size about 10 g, added to 100mM HEPES-Na buffer, pH 7.0, and homogenized on ice witha Tissue-Tearor (Biospec).Homogenate was centrifuged at 10,000 × g for 15 min andthe supernatant was collected. Proteins in the supernatant wereremoved by adding 60% perchloric acid where precipitate wasremoved by centrifugation. Remaining protein contents insamples were estimated by Bradford protein assays (BioRad).If still some proteins were present, samples were applied onan ultrafiltration using CENTRICON®10 (Millipore). After theultrafiltration, protein content was again measured by Bradfordprotein assay.Amino acid standardsGABA, L-hydroxyproline (HYP), L-Gln, L-Asn, β-alanine(β-Ala), L-Cys, L-Orn, L-Cit and L-Trp were purchased fromWako Chemicals. Purchased amino acids were added to typeH amino acid mixture standard solution (Wako Chemicals) toproduce a working standard solution of 25 amino acids, whereeach amino acid concentrations were 100 µmol/L in 0.1 N HCl.Amino acid analysisAmino acid samples were reacted with 4-fluoro-7-nitrobenzofurazan (NBD-F), where derivatized NBD-aminoacids were separated on a Zorbax SB-C18 column (3.0 × 50mm, 2.7 µm; Agilent Technologies) attached to a HitachiUltra High Speed Liquid Chromatography system equippedwith UV-Vis detector monitoring at 470 nm. Derivatizationof amino acids was performed according to the Hitachi UltraHigh Speed Liquid Chromatography manual. NBD-aminoacids were eluted using a stepwise gradient of increasingelution solution B as follows: equilibration with 15%, 15-22% or 15-25% for 2.7 min, 25-35% for 3.5 min, 35-70% for1.0 min, 70-85% for 0.1 min, and kept at 85% for 1.5 min,in sequence. Elution solutions A and B were purchased fromHitachi High-Technologies. The flow rate was maintained at0.550 mL/min throughout the analysis.Reproducibility was routinely examined by injecting standardsolution 10 consecutive times (Table 2). Typically, relativestandard deviation of peak area for cysteine (Cys) and Ala wasobtained within the range of 0.46 and 6.82%, respectively. Themean limit of detection was 0.8 pmol.Each food samples were analyzed three times per extractionand average values were used for analysis.

Results (Thai) 1:

สกัดจากกรดอะมิโนอิสระจากผลไม้
ตัวอย่างแช่แข็งที่ถูกตัดเป็นขนาดประมาณ 10 กรัมเพิ่มถึง 100
มิลลิ HEPES นาบัฟเฟอร์ค่า pH 7.0 และปั่นบนน้ำแข็งกับ
เนื้อเยื่อ-Tearor (ไบโอสเป)
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและ
สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวม โปรตีนในสารละลายที่ถูก
ลบออกไปโดยการเพิ่มกรดเปอร์คลอริก 60% ที่ตะกอนถูก
ลบออกโดยการหมุนเหวี่ยง ที่เหลือปริมาณโปรตีนใน
ตัวอย่างที่ถูกประเมินโดยแบรดฟอการตรวจโปรตีน (BioRad)
หากยังคงโปรตีนบางส่วนอยู่ในปัจจุบันตัวอย่างที่ถูกนำมาใช้ใน
กรองโดยใช้CENTRICON®10 (อร์ค) หลังจากที่
กรองเนื้อหาโปรตีนวัดอีกครั้งโดยแบรดฟอ
ทดสอบโปรตีน
อะมิโนกรดมาตรฐาน
GABA L-hydroxyproline (HYP), L-Gln L-Asn, β-อะลานีน
(β-Ala), L-Cys, L อร L-Cit และ L-Trp ที่ซื้อมาจาก
Wako สารเคมี ซื้อกรดอะมิโนที่ถูกเพิ่มเข้าพิมพ์
H อะมิโนผสมสารละลายมาตรฐานกรด (Wako เคมี) เพื่อ
ผลิตสารละลายมาตรฐานการทำงานของกรดอะมิโน 25 ซึ่ง
แต่ละอะมิโนความเข้มข้นของกรด 100 ไมโครโมล / ลิตร 0.1 N HCl
อะมิโนวิเคราะห์กรด
อะมิโนกรดตัวอย่างได้รับการตอบสนองด้วย 4 Fluoro-7-
nitrobenzofurazan (NBD-F) ที่ derivatized NBD อะมิโน
กรดถูกแยกออกในคอลัมน์ Zorbax SB-C18 (3.0 × 50
มม 2.7 ไมครอน; Agilent Technologies) ที่แนบมา กับ บริษัท ฮิตาชิ
ระบบอัลตร้าความเร็วสูง Liquid Chromatography ติดตั้ง
ด้วย UV-Vis ตรวจจับการตรวจสอบที่ 470 นาโนเมตร อนุพันธ์
ของกรดอะมิโนที่ได้ดำเนินการตามที่ บริษัท ฮิตาชิอัลตร้า
คู่มือความเร็วสูง Liquid Chromatography NBD อะมิโน
กรดถูกชะใช้การไล่ระดับสีแบบขั้นตอนของการเพิ่ม
การแก้ปัญหาการชะ B ดังนี้สมดุลกับ 15% 15
22% หรือ 15-25% 2.7 นาที, 25-35% 3.5 นาที, 35-70% สำหรับ
1.0 นาที 70-85% 0.1 นาทีและเก็บไว้ที่ 85% เป็นเวลา 1.5 นาที
ตามลำดับ elution โซลูชั่น A และ B ที่ซื้อมาจาก
บริษัท ฮิตาชิเทคโนโลยีสูง อัตราการไหลที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่
0.550 มิลลิลิตร / นาทีตลอดการวิเคราะห์
การทำสำเนาถูกตรวจสอบเป็นประจำโดยการฉีดมาตรฐาน
วิธีการแก้ปัญหา 10 ครั้งติดต่อกัน (ตารางที่ 2) โดยปกติแล้วญาติ
เบี่ยงเบนมาตรฐานของพื้นที่ยอด cysteine (Cys) และ Ala ถูก
ที่ได้รับอยู่ในช่วงของ 0.46 และ 6.82% ตามลำดับ
วงเงินค่าเฉลี่ยของการตรวจสอบเป็น 0.8 pmol
ตัวอย่างอาหารแต่ละวิเคราะห์สามครั้งต่อการสกัด
และค่าเฉลี่ยถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์

Results (Thai) 2:

การสกัดกรดอะมิโนฟรีจากผลไม้
ตัวอย่างแช่แข็งถูกตัดเป็นขนาดประมาณ10กรัม, เพิ่ม๑๐๐
มม. บัฟเฟอร์-นา, ค่า pH ๗.๐และการผสมยางบนน้ำแข็งด้วย
การแยกเนื้อเยื่อ (Biospec)
การผสมยางถูกปั่นที่๑๐,๐๐๐× g สำหรับ15นาทีและ
ทั้งนี้ โปรตีนในซุปเปอร์นัต
ลบออกโดยการเพิ่มกรด๖๐%
ถูกถอดออกโดยการหมุนเหวี่ยง ปริมาณโปรตีนที่เหลืออยู่ใน
ตัวอย่างถูกประเมินโดยแบรดฟอร์ดโปรตีน
หากยังคงมีโปรตีนบางอย่างอยู่, ตัวอย่างถูกนำมาใช้บน
โดยใช้ CENTRICON® 10 (มิลลิรูขุมขน) หลังจากที่
การกรองเนื้อหาโปรตีนได้รับการวัดโดยแบรดฟอร์ดอีกครั้ง
การทดสอบโปรตีน
มาตรฐานกรดอะมิโน
กาบา, L-ไฮดรอกซิไลน์ (HYP), L-Gln, β-อะลานีน
(β), L-Cys, L-Orn, L-Cit และ L-Trp ถูกซื้อจาก
เคมีภัณฑ์ มีการเพิ่มกรดอะมิโนที่ซื้อแล้วในชนิด
สารละลายมาตรฐานของกรดอะมิโน H
การแก้ปัญหามาตรฐานการทำงานของ25กรดอะมิโน, ที่
ความเข้มข้นของกรดอะมิโน๑๐๐μ mol/L ใน๐.๑ N HCl.
การวิเคราะห์กรดอะมิโน
ตัวอย่างกรดอะมิโนมีปฏิกิริยากับ 4 fluoro-7-
nitrobenzofurazan (NBD-F) ที่ derivatized NBD-อะมิโน
กรดถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์ Zorbax SB-C18 (๓.๐×๕๐
มม., ๒.๗μ m; เทคโนโลยี agilent) ที่แนบมากับฮิตาชิ
ระบบโครมาโตของเหลวความเร็วสูงพิเศษที่ติดตั้ง
ด้วยการตรวจสอบเครื่องตรวจจับ UV-Vis ที่๔๗๐ nm Derivatization
กรดอะมิโนถูกดำเนินการตามที่ฮิตาชิอัลตร้า
คู่มือโครมาโตของเหลวความเร็วสูง NBD-อะมิโน
กรดถูกชะโดยใช้การไล่ระดับสีที่เพิ่มขึ้น
การแก้ปัญหา B ดังนี้: equilibration 15%, 15-
22% หรือ15-25% สำหรับ๒.๗นาที, 25-35% สำหรับ๓.๕นาที, 35-70% สำหรับ
๑.๐นาที, 70-85% สำหรับ๐.๑นาทีและเก็บไว้ที่๘๕% สำหรับ๑.๕นาที,
ตามลำดับ โซลูชั่น A และ B ถูกซื้อจาก
บริษัทฮิตาชิสูงเทคโนโลยี อัตราการไหลถูกเก็บรักษาไว้ที่
๐.๕๕๐มล./นาทีตลอดการวิเคราะห์
การสำเนาถูกตรวจสอบเป็นประจำโดยการฉีดมาตรฐาน
การแก้ปัญหา10ครั้งติดต่อกัน (ตาราง 2) โดยทั่วไปญาติ
ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของพื้นที่สูงสุดสำหรับ cysteine (Cys) และ Ala
ที่ได้รับภายในช่วง๐.๔๖และ๖.๘๒% ตามลำดับ การ
ขีดจำกัดเฉลี่ยของการตรวจสอบคือ๐.๘ pmol
แต่ละตัวอย่างอาหารได้รับการวิเคราะห์สามครั้งต่อการสกัด
และค่าเฉลี่ยที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์

Results (Thai) 3:

การสกัดกรดอะมิโนอิสระจากผลไม้
ตัวอย่างแช่แข็งถูกหั่นเป็นชิ้นเล็กชิ้นน้อยเกี่ยวกับขนาดของกรัม
MM Hepeis นาบัฟเฟอร์ pH 7.0 บนน้ำแข็ง
ผู้เชี่ยวชาญด้านผ้าขนหนูกระดาษ
เครื่องปรับระดับน้ําใน 10000 ×× G ภายใต้แรงเหวี่ยง 15 นาทีแล้ว
เก็บใสของเหลว โปรตีนในของเหลว
เพิ่ม 60เปอร์เซ็นต์ของกรดคลอริกสูงในการตกตะกอน
เอาแรงเหวี่ยง ปริมาณโปรตีนที่เหลือ
ตัวอย่างที่ใช้ในการวิเคราะห์โปรตีนของแบรดฟอร์ด
ถ้ายังคงมีโปรตีนบางตัวอย่างที่ใช้
ใช้เซ็นต์ริคอน® 10 สำหรับ ultrafilter หลังจากนั้น
การวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนโดยแบรดฟอร์ด
การวิเคราะห์โปรตีน
มาตรฐานกรดอะมิโน
ฉันต้องการที่จะรู้ว่าสิ่งที่ฉันต้องการจะพูดกับคุณ
บีตาแอลซีส L-Orn L-City และ L-TRP ซื้อจาก
บริษัทวาร์โกเคมิคอลจำกัด ซื้อกรดอะมิโนเพิ่มประเภท
โซลูชั่นมาตรฐานสำหรับส่วนผสมของกรดอะมิโน
การผลิตโซลูชั่นมาตรฐานการทำงานของกรดอะมิโนชนิด 25 ซึ่ง
ความเข้มข้นของกรดอะมิโนแต่ละชนิดใน 0.1-n HCl เป็น 100μโมลและตับ L
การวิเคราะห์กรดอะมิโน
ปฏิกิริยาของตัวอย่างกรดอะมิโนและ
nbd-f ซึ่งได้มาจาก nbd-amino
การแยกกรดใน zorbax SB-c18 คอลัมน์
เชื่อมต่อกับบริษัทฮิตาชิ
พร้อมกับระบบโครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูงพิเศษ
เครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลตที่มองเห็นได้คือการตรวจสอบที่ 470nm อนุพันธ์
ตามบริษัทฮิตาชิ
คู่มือโครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูง เอ็นบีดีอะมิโน
ล้างกรดด้วยการไล่ระดับสีเพิ่มขึ้นอย่างค่อยเป็นค่อยไป
B มีดังนี้สมดุลกับ 15 เปอร์เซ็นต์และ 15-15
อย่างต่อเนื่องสำหรับ 2.7 นาที 255-35 เปอร์เซ็นต์ 3.5 นาที 35-70 เปอร์เซ็นต์อย่างต่อเนื่อง
1.0 นาที 70-85 เปอร์เซ็นต์ถือ 0.1 นาที 85 เปอร์เซ็นต์ถือ 1.5 นาที
ตามคำสั่ง ซื้อจาก A และ B
บริษัทฮิตาชิไฮเทคจำกัด ความเร็วในการรักษา
0.550 มิลลิลิตรนาทีในการวิเคราะห์ทั้งหมด
การตรวจสอบตามปกติของผลิตภัณฑ์มาตรฐานโดยการฉีด
โซลูชั่นอย่างต่อเนื่องครั้ง โดยทั่วไปหรือญาติ
ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของพื้นที่สูงสุดของซีสเตอีน
ได้รับในช่วง 0.46 เปอร์เซ็นต์และ 6.82 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับ นี่
จำกัดการตรวจสอบคือ 0.8pmol เฉลี่ย
ตัวอย่างอาหารแต่ละชนิดจะถูกวิเคราะห์สามครั้งต่อการสกัด
การวิเคราะห์ข้อมูลใช้ค่าเฉลี่ย