To test whether the cosmid DNA cont

To test whether the cosmid DNA contained human homologs of the
rat GluR genes, partial sequence of subcloned fragments of cosmids
containing sequences hybridizing to the homologous rat cDNA probe
was obtained. DNA sequence of introns was also obtained from the
subclones and used as primers for polymerase chain reactions, thereby
avoiding cross-reactivity with the endogenous hamster gene. Subcloning
was accomplished as follows. For GluR 1, cosmid DNA was sonicated
and blunt ended with Klenow and T4 DNA polymerases, and DNA
fragments approximating 250-500 base pairs (bp) were isolated by agarose gel electrophoresis and eluted using a kit from Gene Clean. These
fragments were ligated into an SmaI site of the M 13mp9 vector and
used to transform competent cells. Recombinants containing coding
sequence were identified by hybridization to rat GluRl cDNA. For
GluR2 and GluR3, cosmid DNA was digested with EcoRI and Hind111
restriction endonucleases, separated by electrophoresis on agarose gels,
transferred to filters, and hybridized to radiolabeled probes for the respective rat cDNAs. Fragments (258 and approximately 900 bp for
GluR2 and GluR3, respectively) that hybridized were eluted from agarose gels as above and subcloned into pBluescript KS( +) vectors digested
with EcoRI and HindIII. For GluR4, a 1.8 kbp EcoRI fragment which
hybridized with radiolabeled GluR4 cDNA was subcloned into
pBluescript(+). Plasmid DNA was isolated and digested with BamHI
restriction endonuclease, and the vector with the remaining 1.2 kbp
insert was ligated and used to transform competent cells
=============================

Results (Thai) 1:

เพื่อทดสอบว่าดีเอ็นเอ cosmid อยู่ homologs มนุษย์ของการหนูเกลอร์ยีน ลำดับบางส่วนของชิ้นส่วน subcloned ของ cosmidsลำดับที่ hybridizing กับโพรบ cDNA เซทจะมีหนูที่ประกอบด้วยได้รับ ลำดับดีเอ็นเอของ introns ยังมาจากการsubclones และใช้เป็นไพรเมอร์สำหรับปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส จึงหลีกเลี่ยงการ cross-reactivity กับยีนภายนอกหนูแฮมสเตอร์ Subcloningสามารถทำได้ดังนี้ Sonicated cosmid DNA สำหรับเกลอร์ 1และปลายทู่ มี Klenow และ T4 DNA polymerases และดีเอ็นเอชิ้นส่วนที่ใกล้เคียง 250-500 คู่เบส (bp) ถูกแยก โดย agarose เจอิ และ eluted ใช้ชุดจากยีนสะอาด เหล่านี้ชิ้นส่วนถูกกเดี่ยวในการเว็บไซต์ SmaI ของเวกเตอร์ 13mp9 M และใช้ในการแปลงเซลล์ Recombinants ที่ประกอบด้วยการเขียนโค้ดมีระบุลำดับ โดย hybridization เพื่อราษฎร์ GluRl cDNA สำหรับGluR2 และ GluR3, cosmid DNA ถูกย่อยสลาย ด้วย EcoRI และ Hind111จำกัด endonucleases คั่น โดยอิบน agarose เจโอนย้ายไปที่ตัวกรอง และไฮบริดเพื่อรบ radiolabeled สำหรับ cDNAs หนูตามลำดับ เศษ (258 และประมาณ 900 bp สำหรับ GluR3 และ GluR2 ตามลำดับ) ที่ไฮบริด eluted จากเจ agarose ดังกล่าวข้างต้น และ subcloned ใน pBluescript KS (+) เวกเตอร์ย่อย ด้วย EcoRI และ HindIII สำหรับ GluR4, kbp 1.8 EcoRI fragment ซึ่งไฮบริด ด้วย cDNA ถูก subcloned ไป GluR4 radiolabeledpBluescript(+) Plasmid DNA ถูกแยก และย่อย ด้วย BamHI endonuclease จำกัด และเวกเตอร์กับ kbp 1.2 เหลือ กเดี่ยวแทรก และใช้ในการแปลงเซลล์=============================

Results (Thai) 2:

เพื่อทดสอบว่าดีเอ็นเอ cosmid ที่มี homologs มนุษยชนของ
ยีนหนู Glur ลำดับบางส่วนของชิ้นส่วนของ subcloned cosmids
มีลำดับ hybridizing ไปสอบสวนยีนคล้ายคลึงกันหนู
ที่ได้รับ ลำดับดีเอ็นเอของ introns ก็ยังได้รับจาก
subclones และใช้เป็นไพรเมอร์สำหรับปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์จึง
หลีกเลี่ยงปฏิกิริยาข้ามกับยีนหนูแฮมสเตอร์ภายนอก Subcloning
ก็ประสบความสำเร็จดังต่อไปนี้ สำหรับ Glur 1 cosmid ดีเอ็นเอ sonicated
และจบลงด้วยการทื่อ Klenow และ T4 ดีเอ็นเอ polymerases และดีเอ็นเอ
เศษใกล้เคียง 250-500 คู่เบส (BP) ที่แยกได้จากข่าวคราว agarose และชะใช้ชุดจากยีนสะอาด เหล่านี้
ชิ้นส่วนที่ถูกผูกเข้าเว็บไซต์สมัยของเวกเตอร์ M 13mp9 และ
ใช้ในการแปลงเซลล์ที่มีอำนาจ โคที่มีการเข้ารหัส
ลำดับโดยระบุว่าการผสมพันธุ์เพื่อหนู GluRl cDNA สำหรับ
GluR2 และ GluR3, cosmid DNA ถูกย่อยด้วย EcoRI และ Hind111
endonucleases ข้อ จำกัด แยกจากกันโดย electrophoresis บน agarose เจล,
โอนไปกรองและไฮบริดที่จะ probes radiolabeled สำหรับ cDNAs หนูนั้น ชิ้นส่วน (258 และประมาณ 900 bp สำหรับ
GluR2 และ GluR3 ตามลำดับ) ที่ไฮบริดได้รับการชะจากเจล agarose ดังกล่าวข้างต้นและ subcloned เข้า pBluescript KS (+) พาหะย่อย
ด้วย EcoRI และ HindIII สำหรับ GluR4 เป็น KBP EcoRI ชิ้นส่วน 1.8 ซึ่ง
ไฮบริดที่มี radiolabeled GluR4 cDNA ถูก subcloned เข้า
pBluescript (+) ดีเอ็นเอที่แยกได้และย่อยด้วย BamHI
ข้อ จำกัด endonuclease และเวกเตอร์ที่เหลืออีก 1.2 KBP
แทรกถูกผูกและใช้ในการแปลงเซลล์อำนาจ
====================== =======

Results (Thai) 3:

เพื่อทดสอบว่า DNA cosmid ที่มีอยู่มนุษย์โฮโมลอกส์ของเกลอ โฮ หนูยีน ลำดับบางส่วนของชิ้นส่วนของดิจิทัมที่ประกอบด้วยลำดับ hybridizing เพื่อเปรียบเทียบดีเอ็นเอตัวตรวจ หนูคือได้รับ ดีเอ็นเอลำดับ introns ยังได้รับจากระดับสายพันธุ์บริสุทธิ์และใช้เป็นไพรเมอร์สำหรับวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส , จึงการหลีกเลี่ยงปฏิกิริยาข้ามกับยีนในหนูแฮมสเตอร์ . ในอนาคตได้ ดังนี้ สำหรับ cosmid ดีเอ็นเอ sonicated เกลอ โฮ 1และทื่อและจบลงด้วย klenow T4 สำนักงานปลัดกระทรวงศึกษาธิการ และดีเอ็นเอเศษประมาณ 250-500 คู่เบส ( BP ) ถูกแยกด้วยเจลอิเลคโตรโฟรีซีสและตัวอย่างการใช้ชุดจากยีนที่สะอาด เหล่านี้ชิ้นส่วนถูกผูกเข้าใช้เว็บไซต์ของ M 13mp9 เวกเตอร์และใช้ในการเปลี่ยนเซลล์ที่มีความสามารถ recombinants ที่มีการเข้ารหัสลำดับกลุ่มลูกผสม 2 สายพันธุ์ glurl . สำหรับและ glur2 glur3 cosmid ดีเอ็นเอ , ตัดด้วย EcoRI และ hind111ข้อ จำกัด สงบเงียบ โดยแยกหน้าที่ในกาโรสเจลย้ายตัวกรองและสามารถที่จะ radiolabeled probes สำหรับ cdnas หนูตามลําดับ เศษ ( ไปประมาณ 900 คู่เบสสำหรับและ glur2 glur3 ตามลำดับ ) ซึ่งสามารถเป็นตัวอย่างจากโรสเจลดังกล่าวข้างต้นของเข้า ) KS ( + ) เวกเตอร์ย่อยและด้วย - . สำหรับ glur4 , 1.8 kbp EcoRI fragment ซึ่งกับดีเอ็นเอของยีนใน radiolabeled glur4 คือ) ( + ) พลาสมิดดีเอ็นเอที่แยกและย่อยด้วย BamHIเอนโดนิวคลีเอสจำกัดและเวกเตอร์ด้วยเหลือ 1.2 kbpใส่ถูกผูก และใช้ในการเปลี่ยนเซลล์เชี่ยวชาญ=============================