3.3. Visualizing intact protein dis

3.3. Visualizing intact protein distributeon on PE-UHMW up to 204 kDa
Besides the finding that proteins adsorbon PE-UHMW aside from their post-translational modifications or hydrophobic quality, it is necessary to localize proteins adsorbing on PE- UHMW in order to correlate them to polymer qualities such as surface roughness or oxidation. For this the 15 _m PE-UHMW slices, incubated in SF for 24 h, were investigated concerning the adsorbed protein layer and the localization of certain proteins in a MSI approach. HCCA for the low or SA for the high molecular mass range were applied using the piezo printer at a lateral resolution of 100 _m covering the whole PE-UHMW sample homogeneously Fig.4 a shows an exemplary covered PE-UHMW sample after applying HCCA with the piezo printer. A rather thick matrix layer with fine crystal for mation is observed. Similar results were obtained for SA. The sameproteins as inprofiling experiments were detected, i.e. all highlya bundant species such as albumin, IgG and the apolipoprotein subclasses. Profile mass spectra were already presented in Fig.2a and 2b showing protein adsorption up to 204 kDa.Yet some proteins exhibited characteristic localization on the polymer material. Fig.4b shows the intensity distribution of apolipoprotein D[M+H]+ (m/z 22,301) and Fig.4e the distribution of the unknown protein at 204 kDa on GUR- 1050 PE-UHMW after total ion current(TIC) normalization. Molecules were almost homogeneously distributed on the polymer. The analyzed PE-UHMW sample showed a small folded area in the center, whereas the majority area was mounted completely planar to the conductive tape. On perfectly prepared samples all proteins were detected with a similar homogeneous lateral distributions. Interestingly that in the few areas not covered with Apo D especially albumin was found (Fig.4c). On both polymer variants, GUR-1050 and Vitamin E doped, m/z values correlating to[M+H]+ ions of human serum albumin (m/z 66,615) were detected in the center region of the polymer slice, with especially high intensities in folded area(Fig.4c and f).The area of high intensity on top of the sample results from protein adsorption on the conductive tape on which the polymer is mounted. Compared to the conventionally used GUR-1050PE-UHMW, Vitamin E doped material (Fig.4f) showed less signal intensities for all detected proteins. However, adsorbed proteins, IgG and an unidentified compound with m/z 204,000 (Fig.4d and e),revealed similar preferences for folded regions and sharp edges.To investigate the influence of protein degradation due to protease activity, MSI experiments were performed on samples removed from SF incubation after 15,30,60min and 3 h. It was found that homogeneous protein layers are formed already after 30 min of incubation and no loss of signal intensity or increased signal-to-noise ratio excelling biological variation was observed (data not shown).

Results (Thai) 1:

3.3 การมีระดับโปรตีน distributeon ใน PE UHMW ถึง 204 kDa แสดงผล Besides the finding that proteins adsorbon PE-UHMW aside from their post-translational modifications or hydrophobic quality, it is necessary to localize proteins adsorbing on PE- UHMW in order to correlate them to polymer qualities such as surface roughness or oxidation. For this the 15 _m PE-UHMW slices, incubated in SF for 24 h, were investigated concerning the adsorbed protein layer and the localization of certain proteins in a MSI approach. HCCA for the low or SA for the high molecular mass range were applied using the piezo printer at a lateral resolution of 100 _m covering the whole PE-UHMW sample homogeneously Fig.4 a shows an exemplary covered PE-UHMW sample after applying HCCA with the piezo printer. A rather thick matrix layer with fine crystal for mation is observed. Similar results were obtained for SA. The sameproteins as inprofiling experiments were detected, i.e. all highlya bundant species such as albumin, IgG and the apolipoprotein subclasses. Profile mass spectra were already presented in Fig.2a and 2b showing protein adsorption up to 204 kDa.Yet some proteins exhibited characteristic localization on the polymer material. Fig.4b shows the intensity distribution of apolipoprotein D[M+H]+ (m/z 22,301) and Fig.4e the distribution of the unknown protein at 204 kDa on GUR- 1050 PE-UHMW after total ion current(TIC) normalization. Molecules were almost homogeneously distributed on the polymer. The analyzed PE-UHMW sample showed a small folded area in the center, whereas the majority area was mounted completely planar to the conductive tape. On perfectly prepared samples all proteins were detected with a similar homogeneous lateral distributions. Interestingly that in the few areas not covered with Apo D especially albumin was found (Fig.4c). On both polymer variants, GUR-1050 and Vitamin E doped, m/z values correlating to[M+H]+ ions of human serum albumin (m/z 66,615) were detected in the center region of the polymer slice, with especially high intensities in folded area(Fig.4c and f).The area of high intensity on top of the sample results from protein adsorption on the conductive tape on which the polymer is mounted. Compared to the conventionally used GUR-1050PE-UHMW, Vitamin E doped material (Fig.4f) showed less signal intensities for all detected proteins. However, adsorbed proteins, IgG and an unidentified compound with m/z 204,000 (Fig.4d and e),revealed similar preferences for folded regions and sharp edges.To investigate the influence of protein degradation due to protease activity, MSI experiments were performed on samples removed from SF incubation after 15,30,60min and 3 h. It was found that homogeneous protein layers are formed already after 30 min of incubation and no loss of signal intensity or increased signal-to-noise ratio excelling biological variation was observed (data not shown).

Results (Thai) 3:

3.3 . แสดงผลเหมือนเดิม distributeon บน pe-uhmw โปรตีนถึง 204 กิโล
นอกจากนี้พบว่าโปรตีน adsorbon pe-uhmw นอกเหนือจากการไปรษณีย์ - แปล หรือคุณภาพ ) เป็นโปรตีนที่จะ จำกัด 134 ใน PE - uhmw เพื่อความสัมพันธ์ให้พอลิเมอร์คุณภาพ เช่น ความขรุขระของผิวหรือการเกิดออกซิเดชัน นี้ _m pe-uhmw 15 ชิ้นเลี้ยงใน SF 24 H ศึกษาเกี่ยวกับดูดซับโปรตีนชั้นและภาษาท้องถิ่นของบางโปรตีนใน MSI ) hcca สำหรับซาต่ำหรือช่วงมวลโมเลกุลสูงถูกใช้โดยใช้เครื่องพิมพ์ความละเอียด Piezo ที่ด้านข้างของ 100 _m ครอบคลุมทั้ง pe-uhmw นกเค้าเหยี่ยวรูปตัวอย่าง4 แสดงเป็นแบบอย่างตัวอย่างครอบคลุม pe-uhmw หลังจากใช้ hcca กับ Piezo เครื่องพิมพ์ ชั้นเมทริกซ์ ค่อนข้างหนาด้วยคริสตัลดี mation เป็นที่สังเกต ผลที่คล้ายกันได้รับสำหรับ SA การ sameproteins เป็น inprofiling การทดลองพบ เช่น highlya bundant ชนิดเช่นอัลบูมิน ไข่และฮอร์โมนเพศหญิงคลาส . โปรไฟล์แล้วนำเสนอในรูปมวลสเปกตรัม2A 2B แสดงและการดูดซับโปรตีนถึง 204 กิโลดาลตัน แต่บางชนิดมีลักษณะจำกัดวัสดุโพลิเมอร์ fig.4b แสดงความเข้มของการกระจายของฮอร์โมนเพศหญิง D [ M ] ( m / z 22301 ) และ fig.4e การกระจายตัวของโปรตีน ที่ไม่รู้จักที่ 204 กิโลดาลตันบน Gur - 1050 pe-uhmw หลังจากไอออนรวมปัจจุบัน ( TIC ) การฟื้นฟู . "เกือบจะเป็นเนื้อเดียวกันกระจายบนโมเลกุลของพอลิเมอร์ วิเคราะห์ pe-uhmw ตัวอย่างมีขนาดเล็กพับเก็บได้ พื้นที่ในศูนย์ ขณะที่พื้นที่ส่วนใหญ่ถูกติดตั้งอย่างสมบูรณ์ในแนวระนาบกับเทปที่สามารถ . ในตัวอย่างที่ตรวจพบโปรตีนที่สมบูรณ์พร้อม ด้วยกันเป็นเนื้อเดียวกันการกระจาย .น่าสนใจว่าในบางพื้นที่ที่ไม่ครอบคลุมโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับอาโปแอลบูมิน D พบว่า fig.4c ) ทั้งชนิดและสายพันธุ์ gur-1050 วิตามินอีเจือ , M / Z ค่าติดตาม [ M ] ไอออนของซีรั่มอัลบูมิน มนุษย์ ( M / Z 66615 ) พบในเขตภาคกลางของพอลิเมอร์ ชิ้น กับความเข้มสูงโดยเฉพาะในพื้นที่พับเก็บได้ ( fig.4c และ F )พื้นที่ของความเข้มสูงที่ด้านบนของตัวอย่างผลลัพธ์ที่ได้จากการดูดซับโปรตีนในเทปเป็นสื่อกระแสไฟฟ้าที่พอลิเมอร์อยู่ติด . เมื่อเทียบกับโดยทั่วไปใช้ gur-1050pe-uhmw วิตามินอี ด้วยวัสดุ ( fig.4f ) พบสัญญาณความเข้มน้อยทั้งหมดที่ตรวจพบโปรตีน อย่างไรก็ตาม ปริมาณการดูดซับโปรตีน IgG และสารประกอบได้กับ M / Z 204000 ( fig.4d และ E )พบลักษณะคล้ายพับภูมิภาคและขอบคม เพื่อศึกษาอิทธิพลของโปรตีนลดลงเนื่องจากกิจกรรมโปร MSI ทดลองตัวอย่างได้ลบออกจาก SF บ่มหลังจาก 15,30,60min และ 3 ชั่วโมงพบว่าโปรตีนที่เป็นเนื้อเดียวกัน ขึ้นชั้นแล้วหลังจาก 30 นาทีของการบ่มและไม่มีการสูญเสียของสัญญาณ หรือ สัญญาณความเข้มเพิ่มขึ้น อัตราส่วนการ excelling ชีวภาพ ) ( ข้อมูลไม่แสดง ) .