Sensor based recording of cell-spec

Sensor based recording of cell-specific calcium changes
To monitor [Ca2+]cyto during the whole double fertilization process, we expressed the Ca2+ sensor CerTN-L15 (ref. 31) under control of cell-type-specific promoters in synergid cells (​MYB98-promoter; ​AT4G18770 (ref. 33)), egg cell (​EC1.1 promoter; ​AT1G76750 (ref. 12)) and the central cell (​DD65-promoter; ​AT3G10890 (ref. 34)) as indicated (Fig. 1a). This sensor is based on the Ca2+−binding domain of troponin C and two spectrally overlapping fluorescent molecules cerulean and citrine that act as donor and acceptor for FRET, respectively. As the CerTN-L15 sensor has not been used in plants before, we first validated its functionality in roots expressing the sensor constitutively under control of a 35S promoter, using a microfluidic device that allows imaging under controlled perfusion of roots35. Repeated pulsed treatments with a hyperosmotic solution resulted in [Ca2+]cyto signatures with a minor increase in FRET ratio during the treatment-induced root shrinkage and a steep incline of the FRET ratio after wash-out and return to original root length, followed by a gradual return of the FRET ratio to the baseline (Supplementary Fig. 1). This characteristic signature has been observed before using Yellow Cameleon sensors29, 36 indicating that CerTN-L15 is functional in plants.

Results (Thai) 1:

เซ็นเซอร์ที่ใช้บันทึกการเปลี่ยนแปลงเซลล์เฉพาะแคลเซียม
ตรวจ cyto [Ca2] ระหว่างการปฏิสนธิคู่ทั้งหมด เราแสดงการเซ็นเซอร์ Ca2 CerTN-L15 (อ้างอิงที่ 31) ภายใต้การควบคุมของเซลล์ชนิดเฉพาะก่อ synergid เซลล์ (MYB98-โปรโมเตอร์AT4G18770 (อ้างอิงที่ 33)), เซลล์ไข่ (โปรโมเตอร์ EC1.1AT1G76750 (อ้างอิงที่ 12)) และเซลล์กลาง (DD65-โปรโมเตอร์AT3G10890 (อ้างอิง 34)) ที่ระบุไว้ (Fig. 1a) เซนเซอร์นี้จะขึ้นอยู่กับโดเมน −binding Ca2 troponin C และสอง spectrally ซ้อน citrine และโรงแรมเซรูลีเรืองแสงโมเลกุลที่ทำหน้าที่เป็นผู้บริจาคและ acceptor ในไม่สบายใจ ตามลำดับ ไม่ได้ใช้ในพืชก่อนเซ็นเซอร์ CerTN L15 เราก่อนตรวจงานในรากกำลังเซ็นเซอร์ constitutively ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35S ที่ ใช้อุปกรณ์ microfluidic ที่ช่วยให้ภาพภายใต้ควบคุมการกำซาบของ roots35 รักษาพัลซ้ำ ด้วยโซลูชัน hyperosmotic ส่งผลให้ลายเซ็น [Ca2] cyto กับเพิ่มขึ้นเล็กน้อยในอัตราส่วนไม่สบายใจระหว่างหดตัวทำให้เกิดการรักษารากและชันชันอัตราส่วนไม่สบายใจหลังล้างออกและกลับไปยังความยาวของรากต้นฉบับ ตาม ด้วยสมดุลของอัตราส่วนไม่สบายใจหลัก (เสริม Fig. 1) ลายเซ็นลักษณะนี้ได้ถูกตรวจสอบก่อนที่จะใช้สีเหลือง Cameleon sensors29, 36 ที่ระบุว่า CerTN L15 ทำงานในโรงงาน

Results (Thai) 2:

เซ็นเซอร์การบันทึกตามของเซลล์เฉพาะการเปลี่ยนแปลงแคลเซียม
ในการตรวจสอบ [Ca2 +] Cyto ในระหว่างขั้นตอนการปฏิสนธิสองครั้งทั้งที่เราแสดงความ Ca2 + เซ็นเซอร์ CerTN-L15 อาหาร (Ref. 31) ภายใต้การควบคุมของผู้เริ่มก่อการเซลล์ชนิดนี้เฉพาะในเซลล์ synergid (MYB98 -promoter; AT4G18770 (อ้างอิง 33).) เซลล์ไข่ (EC1.1 ก่อการ; AT1G76750 (อ้างอิง 12).) และเซลล์กลาง (DD65-ก่อการ; AT3G10890 (อ้างอิง 34).) ตามที่ระบุไว้ ( รูปที่ 1a.) เซ็นเซอร์นี้จะขึ้นอยู่กับ Ca2 + -binding โดเมนของนินซีและสองโมเลกุลเรืองแสงสีฟ้าที่ทับซ้อนกันผีและซิทรินที่ทำหน้าที่เป็นผู้บริจาคและใบเสร็จสำหรับฉลุตามลำดับ เป็นเซ็นเซอร์ CerTN-L15 ยังไม่ได้ถูกนำมาใช้ในโรงงานก่อนที่เราตรวจสอบการทำงานของรากในการแสดงเซ็นเซอร์ constitutively ภายใต้การควบคุมของ 35S ก่อการใช้อุปกรณ์ไมโครที่ช่วยให้การถ่ายภาพภายใต้การควบคุมของปะ roots35 รักษาชีพจรซ้ำกับการแก้ปัญหา hyperosmotic ผล [Ca2 +] Cyto ลายเซ็นที่มีการเพิ่มขึ้นเล็กน้อยในอัตราฉลุในช่วงหดตัวรากรักษาเกิดและมีแนวโน้มที่จะสูงชันของอัตราส่วนฉลุหลังจากที่ล้างออกและกลับไปที่ความยาวของรากเดิมตามมาด้วย กลับค่อยๆของอัตราส่วนฉลุเพื่อพื้นฐาน (เสริมรูปที่ 1). ลายเซ็นลักษณะนี้ได้รับการสังเกตก่อนที่จะใช้สีเหลือง Cameleon sensors29 36 แสดงให้เห็นว่า CerTN-L15 ทำงานในโรงงาน

Results (Thai) 3:

เซ็นเซอร์ที่ใช้บันทึกการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อตรวจสอบแคลเซียมแคลเซียม
[ ] cyto ในระหว่างกระบวนการคู่กันทั้งเราและเซ็นเซอร์ certn-l15 แคลเซียม ( 31 ) ) ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ในซินเนอร์จิดเซลล์ชนิดเซลล์ที่เฉพาะเจาะจง ( ​ myb98 ผู้สนับสนุน ; ​ at4g18770 อังกฤษ 33 ) , เซลล์ไข่ ( ​ ec1.1 โปรโมเตอร์​ at1g76750 ; ( อ้างอิงที่ 12 ) และเซลล์ภาคกลาง ( ​ dd65 ผู้สนับสนุน ; ​ at3g10890 ( อังกฤษ34 ) ) ( ( รูปที่ 1A ) เซ็นเซอร์นี้จะขึ้นอยู่กับแคลเซียม−ผูกโดเมนของโทรโปนินซีและสองโมเลกุลเรืองแสงสีฟ้าใสซ้อนกันมากกว่า และซิทริน ที่ผู้บริจาคและพระนาสิกสำหรับหงุดหงิด ตามลำดับ เป็น certn-l15 เซ็นเซอร์ไม่ได้ถูกใช้ในโรงงานมาก่อน ครั้งแรกที่เราตรวจสอบการทํางานในรากแสดงเซ็นเซอร์ constitutively ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35s ,การใช้ไมโครฟลูอิดิก อุปกรณ์ที่ช่วยให้สามารถควบคุมผ่านของ roots35 . การรักษาซ้ำด้วยสารละลายการแช่ในวัคซีน ( [ ] cyto ลายเซ็นที่มีแคลเซียมเพิ่มขึ้นเล็กน้อยในอัตราส่วนหงุดหงิดระหว่างการรักษาราก และเกิดการหดตัว เอียงชันของอัตราส่วนฉลุหลังล้างออกและกลับไปที่เดิม ความยาวรากตามด้วยกลับค่อยๆ ฉลุ อัตราส่วนพื้นฐาน ( เพิ่มเติมรูปที่ 1 ) ลายเซ็นลักษณะนี้ได้รับการตรวจสอบก่อนที่จะใช้ sensors29 ดสีเหลือง , 36 ที่ระบุว่า certn-l15 เป็นหน้าที่ในพืช